兔卵母细胞的超数排卵与孤雌激活

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1、兔卵母细胞的超数排卵与孤雌激活王春雨，鲁进，武浩，魏欣，赵甫涛，贾战生【关键词】卵母细胞Superovulationandparthenogeicactivationinrabbits　　【Abstract】AIM:Toexploreoptimalsuperovulatingmethodsandparthenogeicactivationconditionsinrabbits.METHODS:Virginalandmultiparousrabbitsulatinghormone(FSH)atdifferentconcentrations.Aft

2、erbeingobtained,thematureoocytesbersbetonegroupsandcontrolgroup(P0.05)andbetonegroups〔(15.00±1.58)vs(31.83±3.06),(31.80±3.27),P0.05〕.Soultiparousrabbits.Theratesofmerogenesis（85.59％）andtheratesofdevelopmentto4-8cellstage（21.19％）ofrabbitoocytesmdirectcurrentpulsestreatmentamo

3、ngthefourgroups.CONCLUSION:Thesuperovulationefficiencyinrabbitsentisoptimizedandthesuperovulationefficiencyisbetterinmultiparousrabbitsthanthatinvirginalrabbits.Theparativelysuitableoocyteactivationconditionisthatof200V/mm,40μsand2timesofdirectcurrentpulsesm组孤雌激活兔卵母细胞的卵裂率（85

4、.59％）和4~8细胞期发育率（21.19％）最高，与240V/mm组（71.43%,10.48%）之间存在统计学差异（P＜0.05）.结论：FSH25U及FSH80U+PVP方案均能产生最佳超排效果，经产兔优于青年兔；电场强度200V/mm，脉宽40μs，2次脉冲、间隔1s为兔成熟卵母细胞的较理想的激活条件.　　【关键词】卵母细胞；孤雌激活；兔　　0引言　　治疗性克隆（therapeuticcloning）是体细胞核移植技术和胚胎干细胞技术相结合的产物，将成为人类医疗史上革命性的技术.由于人类卵母细胞来源非常有限，且受到法律、伦理等多种因素的

5、限制，很难获得足够数量的人卵母细胞用于实验研究.异种核移植技术的出现为解决这一难题提供了可能.实践证实，家兔卵母细胞可以作为异种核移植研究的理想受体，可支持人类体细胞去分化并发育至囊胚期〔1〕.我们在以往研究工作的基础上,利用本地白兔进一步探讨了不同超数排卵处理方法以及不同年龄阶段白兔的超排效果.目的在于筛选一种效果好、成本低的家兔超排方案，为人兔异种细胞核移植的研究提供充足的成熟兔卵母细胞.此外，我们还采用不同强度直流电脉冲对超排获得的成熟兔卵母细胞进行孤雌激活的研究，探索最佳的激活条件，为下一步获得人兔核移植胚胎干细胞，并向肝细胞诱导分化做

6、准备.　　1材料和方法　　1.1材料　　①实验动物：体质量2.5~3.5kg，6~18mo龄性成熟雌性本地白兔42（经产兔20只，青年兔22）只，购自第四军医大学实验动物中心.②主要试剂和器械:兽用垂体促卵泡素(FSH)及注射用人绒毛膜促性腺素(hCG)，购自宁波激素二厂;PBS缓冲液（自配）;胎牛血清（四季青公司）;透明质酸酶、聚乙烯吡咯酮（PVP）（Sigma）;DMEM,RPMI1640(Gibco);电融合液（自配）;解剖显微镜（Olympas）;电融合仪（ModelECM830,BTX,SanDiego）;外科手术器械.　　1.2方法

7、　　1.2.1超数排卵处理将实验兔随机分为4组分笼饲养，每笼3只，喂以相同的颗粒饲料,自由饮水.实验前15d，选择5只8mo龄健康雄兔进行输精管结扎手术.1组11（经产兔5，青年兔6）只.受试兔经皮下注射FSH，2次/d，15U/次，连续3d，最后一次注射FSH后12h，由耳缘静脉注射hCG100U;2组10（经产兔5，青年兔5）只.受试兔经皮下注射FSH，2次/d，25U/次，连续3d，最后一次注射FSH后12h，由耳缘静脉注射hCG100U;3组11（经产兔6，青年兔5）只.参考朱华萍等〔2〕的实验方法，皮下一次性注射FSH80U与250g

8、/LPVP的混合液，3d后由耳缘静脉注射hCG100U.对照组10（经产兔4，青年兔6）只.均为正常排卵的雌兔，取卵前14~16h与结扎的雄兔1∶1合