正文描述:《褪黑素对热应激猪卵母细胞体外成熟的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位(毕业)论文褪黑素对热应激猪卵母细胞体外成熟的影响学位申请人:张振南指导教师:李相运教授学科专业:动物遗传肓种与繁殖学位类别:农学硕士授予单位:河北农业大学答辩日期:二〇一五年五月三十日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得河北农iL大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学
2、位论文作者签名:签字日期年G月j日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:导师签名:/^r-^%签字日期:20&年^月1円签字日期:似卑&月3日学位论文作者毕业后去向:工作单位:电话:通讯地址:邮编:分类号:S814.6单位代码:10086密级:公开学号:2012329褪
3、黑素对热应激猪卵母细胞体外成熟的影响Effectsofmelatoninonheatstressporcineoocytesinvitromaturation学位申请人:张振南指导教师:李相运教授学科专业:动物遗传育种与繁殖学位类别:农学硕士授予单位:河北农业大学答辩日期:二〇一五年五月三十日基金项目资助受“十二五”国家科技支撑计划课题任务“家畜胚胎保存与性控双犊诱导技术研究与示范”(2011BAD19B01)、“863计划”国家高技术研究发展计划“家畜卵母细胞冷冻、胚胎表观修饰和体细胞克隆技术研究(2011AA100303)”项目资助。摘要本试验的目的是研究热应激对猪卵
4、母细胞体外成熟的影响,以及在成熟培养基中添加褪黑素对热应激猪卵母细胞体外成熟的作用。以猪卵巢中分离出的GV期COCs为研究对象,通过体外41℃生理热应激4h后成熟至MII期,对卵母细胞中线粒体DNA拷贝数、胞质中线粒体分布情况、线粒体染色荧光强度、核编码线粒体相关基因和线粒体编码基因的表达进行检测,以及观察孤雌激活后胚胎的发育情况。-9将猪卵母细胞按对照组(C组)、正常培养加10M褪黑素组(C+M(-9)组)、-8-9正常培养加10M褪黑素组(C+M(-8)组)、热应激组(H组)、热应激加10M-8褪黑素组(H+M(-9)组)、热应激加10M褪黑素组(H+M(-8)组)随
5、机分成6组,体外成熟培养至MII期,孤雌激活后观察胚胎发育情况,试验结果显示:与C组相比,C+M(-8)组能够显著提高猪卵母细胞的囊胚发育率(P<0.05);在H组中,热应激显著的降低了囊胚发育率(P<0.05),热应激培养基中添加褪黑素能够提高囊胚率(P<0.05),但是H+M(-8)组能够显著的提高囊胚率(P<0.05)而H+M(-9)组只有提高的趋势但差异并不显著(P>0.05)。其中卵母细胞的卵裂率并不受不同处理的影响,各处理的卵裂率差异不显著(P>0.05)。线粒体拷贝数可作为衡量卵母细胞成熟的重要指标之一,本试验进一步研究热应激对猪卵母细胞中mtDNA拷贝数的
6、影响。同样卵母细胞随机分成六组,成熟培养至MII期,利用RT-PCR方法对卵母细胞中mtDNA拷贝数进行量化,试验结果表明:与C组相比,C+M(-8)组显著的提高了卵母细胞中mtDNA拷贝数(P<0.05);在热应激的条件下,H组的mtDNA显著降低(P<0.05),而H+M(-9)组和H+M(-8)组都能够显著的提高mtDNA拷贝数(P<0.05)。这与孤雌胚胎发育的数据吻合,说明热应激降低卵母细胞的发育潜能是通过减少胞质中mtDNA拷贝数来影响卵母细胞胞质的成熟。在卵母细胞成熟过程中,线粒体的分布也随成熟的过程发生移位。利用Mito-Tracker染色观察MII期猪卵
7、母细胞中线粒体的分布情况。与C组相比,H组中细胞胞质中线粒体分布不均,出现空洞,而H+M(-8)组中,线粒体又恢复了正常的分布。这说明褪黑素也通过影响线粒体的分布来提高卵母细胞成熟的质量。同时对Mito-Tracker染色荧光信号强度进行定量分析得出,与C组相比,褪黑素能够显著提高C+M(-8)组的荧光信号强度(P<0.05);而H组中,热应激使得线粒体染色强度明显降低(P<0.05),而H+M(-8)组又显著提高了荧光信号强度(P<0.05)。这说明褪黑素增加了卵母细胞中活性线粒体数量同时保持线粒体膜电位处于正常水平。在猪卵
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