褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其机制的探究.pdf

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1、巧古学化论义袍黑素对水牛卵母细胞体外成熟的＾影响及其机誦探究＾１＾Ｉ■１■＾■郭振伟．麵ｆ巧心等ＪＨ二—〇六年六月分类号Ｓ８１４．６密级公开ＵＤＣ５９１．３硕±学位论文姆黑素对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其机制的探究郭振伟学科专业动物遗传育种与繁殖指导教师陆凤花研究员石德顺研究员论文答辩日期２０１６年５月％日授予日期２０１６年６月３０日答辩委员会主席卢克焕教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究

2、所取得。的研究成果除己特别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的研巧成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，目Ｐ；学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可レッ采用影印、缩印或其它

3、复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。化不保密。＂＂请在上相应方框内打Ｖ（）＾＾：日期６、文、少论文作者签名：《＾＾＾；Ｗ｜指导教师签名／／式各？：心日期；方作者联系电话：电子邮箱：牠黑素对水牛卵母细施体外成熟的影响及其机制的探究摘要诞黑素是松果腺分泌的一种多功能分子，它不仅能调节昼夜节律和季节性动物繁殖，而且在调节动物生殖方面也起着重要的作用。研究证明，權黑素对卵泡的发育、卵母细胞的成熟和胚胎发育起着重要的作用。本研究主要是探讨外源性袍黑素对水牛卵母细胞体外成熟

4、的影响，并对其相关作用机制进行探究一，Ｗ期进步优化卵母细胞体外成熟的培养体系，为阐明水牛卵母细胞成熟的机制提供一定的理论依据。首先，检测了水牛卵丘细胞和卵母细胞上诞黑素的两种受体ＭＴ１和ＭＴ２的。表达情况结果发现，在水牛卵岳细胞和卵母细胞上均存在極黑素受体ＭＴ１和ＭＴ２。－９其次，探究了在体外成熟培养液中添加不同浓度诞黑素（０Ｍ、１０Ｍ、８－７１化Ｍ、１０Ｍ）对水牛卵母细胞体外成熟及其随后体外受精胚胎的发育的影－响９－８－７。结果显示：水牛卵母细胞在添加不同浓度的诞黑素（ｌ〇Ｍ、ｌ〇Ｍ、ｌ〇Ｍ）？的成熟液中成熟培养２２２４

5、ｈ一后，每个处理组的卵母细胞第极体排出率均显著高于未添加组〇（５０．３０％ＶＳ４７．％％、５３０４％．ｖｓ４７．：５６％、５０／〇ｖｓ．６３－４７８－９．５６％，戶＜０．０５），且浓度为１０Ｍ组卵母细胞的极体排出率显著高于Ｍｌ〇－７和１０Ｍ沮（戶＜０．０５）。随后，将各姐成熟培养２４ｈ后的卵母细胞进行体外受精，发现受精后各处理组胚胎的分裂率显著高于未添加组（６０．２３％ＶＳ巧〇－８．６２％、６５２６％ｖ２、．ｓ５７．６／。６２．８４ｓ５７．６２％％ｖ，Ｐ＜０．０５），而且ｌ〇Ｍ和－７１０Ｍ组的胚胎能发育到囊胚的比例显

6、著高于未添加姐（２０．４８％ｖｓ－９１５．２２％、１８．６８ｖｓ１５．２２％，Ｐ＜０．０５），但１０Ｍ组的囊胚发育率与未添加组相比差异不显著〇〇（１６．４４／〇ｖｓｌ５．２２／〇，Ｐ＞０．０５）。最后，探讨了诞黑素对卵母细胞成熟影响的作用机制。结果发现：在Ｉ－８Ｍ成熟液中单独添加同等浓度的槐黑素受体枯抗剂（ＬＺＵ，１０），水牛卵母细胞成熟培养后的极体排出率（４７．４４％ＶＳ４８．１５％）、体外受精后胚胎分裂〇１８％ｓ％４２％）率（５７．ｖ．和囊胚率（１５．０６／〇ｖｓｌ５．２６％）与未添加组相比，差异不显著（

7、？＞化〇５）；而单独添加同等浓度的袍黑素受体激动剂（ＩＩＫ７，－８〇ｌ〇Ｍ）时，水牛卵１２５％ｖ母细胞成熟培养后的极体排出率（５．ｓ４８．１５／〇）、体外受精后胚胎分裂率（６４．１５％ｖｓ％．４２％）和囊胚率（１９．０４％ｖｓ１５．２６％）＜０－８均显著高于未添加组（Ｐ．０５），但与单独添加诞黑素组（ＭＴ，ｌ〇Ｍ）卵母细胞的极体排出率（５１．２５％ｖｓ５２．９４％）、体外受精后胚胎的分裂率（６１．２４％ＶＳ６４．３２％）和囊胚率（１８．５２％ＶＳ１９．３６％）相比，差异不显著Ｐ＞－８（０．０５）；当同时添加诞黑

8、素（ＭＴ，ｌ〇Ｍ）和诞黑素受体招抗剂（ＬＺＵ，－