胎盘源间充质干细胞对同种异体b淋巴细胞免疫调节作用的初步研究

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：羲到纽．日苏州大学学位论文使用授权声明㈣I舢舢舢舢删删删埘舢Y2121773本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆

2、、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在——年一月解密后适用本规定。非涉密论文函论文作者签名：导师签名：13期：卫』垄：金。l≤日期：o垒f丛￡：[皇7胎盘源间充质干细胞对同种异体B淋巴细胞免疫调节作用的初步研究中文摘要胎盘源间充质干细胞对同种异体B淋巴细胞免疫调节作用的初步研究中文摘要中文于葡要背景与目的间充质干细胞[mesen

3、chymalstemcells，MSCs】是干细胞家族的重要成员，具有自我更新和多向分化潜能。胎盘源间充质干细胞(Placenta-derivedmesenchymalstemcells，PMSCs)具有来源丰富，无伦理学问题，获取较为方便，且表型与骨髓源MSCs(BMSCs)表达相似，正日渐受人关注。MSCs具有低免疫原性和独特的免疫调节作用，在自身免疫性疾病及组织修复、器官移植等领域具有广阔的临床应用前景。但其具体的免疫调节作用及机制仍有待澄清。近年来，BMSCs对于T细胞的免疫调节研究较多，但对B细胞的免疫调节作用仍不明确，不同的研究者观点不一，而在PMSCs对B细胞的免疫调

4、节研究领域更是鲜见报道。本研究在体外分离培养获得PMSCs的基础上，就PMSCs对同种异体B淋巴细胞的增殖、活化及相关细胞表面协同刺激分子表达的影响进行初步研究，探讨PMSCs对B淋巴细胞的免疫调节作用，为进一步临床应用提供实验依据。方法从人胎盘组织中分离培养获得形态均一的贴壁细胞，通过检测细胞表面抗原表达、分化潜能等特征进行鉴定，确定所得细胞为间充质干细胞。用CpG2006、重组人CD40L、人IL-2、人几_4和IgM+IgG(H+G)等(缩写为CpG)激发B细胞，并将其与体外扩增培养的用丝裂霉素处理的PMSCs按5：1的数量共培养，并与PMSCs培养上清组和未激发组等进行对照

5、，具体细胞分组为：(1)未激发组(B)；(2)：CpG等激发组(CpG+B)；(3)：激发B淋巴细胞与PMSCs共培养组(B+CpG+PMSCs)；(4)：激发B淋巴细胞与PMSCs培养上清共培养组(B+CpG+PMSCs(sup))；(5)：未激发B淋巴细胞与PMSCs共培养组(B+PMSCs)；(6)未激发B淋巴细胞与PMSCs培养上清共培养组(B+PMSCs(sup))；(7)：对照组(PMSCs)。所有细胞培养T中文摘要胎盘源间充质干细胞对同种异体B淋巴细胞免疫调节作用的初步研究72小时后，用免疫荧光标记、流式细胞术检测B细胞增殖及表面正性及负性协同刺激分子CD80、CD8

6、6、PD--L1的表达。勿士甲耋口木1、PMSCs具有MSCs特性的细胞形态和表面标志，表达CD29、CD44、CDl05、CD43、CD90、CDl06、CDl66，不表达CD34、CD45和HLA-DR。2、PMSCs不表达协同刺激分子CD80、CD86、CD83、PD一1和B7H4，但高表达PD-L1。3、PMSCs可分化为脂肪细胞，光镜下可见细胞质中脂滴形成，油红0染色阳性；并可分化为成骨细胞，vonKossa法染色可见黑色的钙沉积。4、CpG2006、重组人CD40L、人IL-2、人IL-4和IgM+IgG(H+G)等激发B细胞24小时后出现活化细胞团，B+CpG+PMS

7、Cs组活化细胞团更大，而B+CpG+PMSCs(sup)宝Jt活化细胞团较小，未激发组均未出现活化细胞团。5、标记细胞增殖的核抗原Ki67在B+CpG+PMSCs(41．60圭13。81)％组比B+CpG组(19．23+2．79)％表达明显增高，而B+CpG+PMSCs(sup)组(16．00士1．57)％较B+CpG组(19．23+2．79)％表达低，各组间比较有统计学意义。6、正性协同刺激分子CD86在B+CpG+PMSCs(sup)组(4．21士1。10)％与B