hsa--mir--30a通过调控ccne2表达抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的研究

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1、隶．轫大·莹⑨临床医学硕士学位论文Hsa—miR-30a通过调控OCNE2表达抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的研究研究生姓名：瑟磊导师姓名：陈明申请学位类别蝤鏖医堂亟±专业名称堕压医堂研究方向渔星签登答辩委员会主席熬肆趱学位授予单位塞童太堂论文答辩习期2Q!!生堕旦】!旦学位授予日期2垒!i生旦评阅人型豇筠蟹缝舢0川1o堡；⋯⋯川9拦蔫五㈣矧i洲4凹^弧巳^㈣㈣⋯m、．川”；D。㈣⋯洲v．隶。初大·坚临床医学硕士学位论文Hsa．miR-30a通过调控CCNE2表达抑制去势抵抗性前列腺癌发生发展的研究本论文获国家自然科学基金项目(81070592、81202034)、江苏省自

2、然科学基金(BK2012336)、教育部博士点基金项目(2012009212007)、南京市科技发展项目(201201053)、东南大学基本科研业务(3290002402)资助。IUlIIIII111[IIIIIIIIIIIIlitIIIY2437910HSA—MIR一3OASUPPRESSESTUMORGROWTHANDPROGRESSIONBYTARGETINGCCNE2INCASTRATION—RESISTANTPROSTATECANCERADissertation(Thesis)SubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademic

3、DegreeofMasterofClinicalMedicineBYZHANGLeiSupervisedbyProf．CHENMingSchoolofMedicineSoutheastUniversityMay2013东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：东南大学学位

4、论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：—尘至兰身师签名：!茎塑茎Hsa．miR．30a通过调控CCNE2的表达抑制去势抵抗性前列腺癌发生及发展的研究东南大学医学院研究生张磊导师陈明摘要目的：通过体外及体内实验探讨hsa．miR．30

5、a对激素非依赖性前列腺癌细胞株DUl45及PC3细胞生物学行为的影响，并鉴定hsa-miR-30a影响的下游基因。探讨hsa．miR．30a在去势抵抗性前列腺癌发生发展中的分子机制。方法：MicroRNAs芯片及实时定量PCR检测去势抵抗前列腺癌和激素依赖前列腺癌组织中hsa．miR-30a的表达差异。DUl45及PC3细胞株体外转染hsa．miR．30amimics，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及细胞集落形成实验法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期改变及凋亡率；粘附实验检测细胞的粘附能力改变；Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的改变；裸鼠皮下成瘤实验检测

6、hsa．miR．30a对细胞移植瘤生长的影响；靶基因预测软件miRanda、TargetScan等预测hsa-miR-30a的潜在靶基因，荧光素酶报告基因检测hsa．miR．30a与潜在靶基因3’UTR的结合能力，WesternBlot检测潜在靶基因表达变化。结果：MicroRNAs芯片结果表明，去势抵抗前列腺癌组织中hsa．miR．30a的表达水平与激素依赖前列腺癌组织相比显著下降，实时定量PCR验证了芯片结果；MTT实验表明hsa-miR-30a组细胞增殖率显著低于阴性对照州C)组；在细胞集落形成实验中，hsa．miR．30a抑制细胞形成集落的数目和大小；流式细胞术检测

7、hsa．miR．30a组细胞G1期分布增加，凋亡率显著高于NC组；细胞粘附实验表明hsa-miR一30a组细胞粘附数显著低于NC组在Transwell实验中，hsa．miR．30a组细胞通过Transwell小室及含基质胶的Yranswell小室的数量均明显少于NC组；裸鼠成瘤实验hsa-miR-30a组的DUl45细胞裸鼠皮下肿瘤的大小明显小于NC组，免疫组化实验发现Ki一67阳性细胞数少于NC组，CD34表达少于NC组；预测软件预测并经荧光素酶报告基因证实CCNE2是hsa．miR-30a的靶基因；Wester