口腔黏膜下纤维性变病例蛋白质组学研究

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1、分类号UDC博士学位论文密级口腔黏膜下纤维性变病例蛋白质组学研究ProteomicsStudyonCasesofOralSubmucousFibrosis作者姓名：贺智晶学科专业：外科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：翦新春教授论文答辩日期垄!!：至：红答辩委员会主席盈丝中南大学二0一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证

2、书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：』酗日期：韭年』月卑日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。醐：韭魁啤日本课题受以下基金资助：2010年度国家自

3、然基金青年科学基金项目(81000445)2010年度中南大学优秀博士学位论文扶持基金项目(098102103)博士学位论文中文摘要摘要口腔黏膜下纤维性变(oralsubmucousfibrosis，OSF)是一种慢性的、复杂的12腔黏膜疾病。主要表现为上皮下组织的炎症反应和黏膜下组织的进行性纤维化。咀嚼槟榔是OSF的主要致病因素。OSF是一种口腔的癌前病变。OSF的癌变率高达7％-13％。OSF的发病及癌变机制也已成国内外学者共同关注的焦点。本课题组的胡延佳用AffymetrixU133A2．0芯片构建OSF颊

4、黏膜组织的基因表达谱，并对部分差异表达基因进行了验证。然而，仅在基因组水平研究OSF发生发展过程中DNA或是mRNA的变化不能完全阐明OSF发病过程中的分子机制。为了寻找新的OSF发病分子标记物，本研究采用蛋白质组学方法对正常人和OSF患者的口腔颊黏膜组织中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定，对鉴定出来的差异蛋白质进行生物信息学分析，并采用Westemblotting和免疫组织化学的方法对部分差异蛋白质进行半定量和定性验证。(一)蛋白质组学筛选口腔黏膜下纤维性变病例差异蛋白质目的：准确筛选正常人和OSF患者口腔颊黏膜

5、组织的差异表达蛋白质，并对其进行生物信息学分析。方法：收集正常人(NBM组)和OSF患者(OSF组)的口腔颊黏膜组织标本各10例，分组混合，形成1对标本。对其进行二维电泳分离(2．DE)，经图像分析后找出差异表达的蛋白质斑点，并进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MADLDI．TOF．MS)分析鉴定，并对质谱鉴定出的蛋白质进行生物信息学分析。结果：得到的NBM组和OSF组的2-DE图谱，经过软件分析得到表达差异在2倍以上的蛋白质斑点48个。采用MADLDI．TOF．MS对差异蛋白质斑点进行鉴定，最终得到33个差

6、异蛋白质。其中，在OSF组中表达上调的有22个，表达下调的有11个。博士学位论文中文摘要结论：比较蛋白质组学技术能有效地鉴定OSF差异表达蛋白质，能为寻找OSF发病分子标记物的提供参考数据。(二)部分口腔黏膜下纤维性变病例差异蛋白质的验证研究目的：对前期鉴定的5个差异蛋白质进行半定量和定性验证研究并探讨其临床意义。方法：收集NBM组和OSF组颊黏膜组织标本，用于Westernblotting分析的标本各20例，用于免疫组织化学分析的标本NBM组20例，OSF组60例。使用Westernblotting和免疫组织化

7、学的方法对5个差异蛋白质(prohibitin、peroxiredonxin2、translationallycontrolledtumorprotein、calumenin及cellularretinoicacidbindingprotein1)在NBM组和OSF组中的表达进行检测。结果：Westernblotting结果显示OSF组中的prohibitin、peroxiredonxin2及translationallycontrolledtumorprotein的表达明显上调，calumenin及cellul

8、arretinoicacid．bindingprotein1的表达明显下调。免疫组织化学结果显示OSF组中prohibitin、peroxiredonxin2及translationallycontrolledtumorprotein的阳性表达率分别为70．O％、71．7％、81．7％，明显高于NBM组，calumenin及cellularretinoicacidbind