变应性鼻炎血清蛋白质组学的研究

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1、分类号VDC博士学位论文密级变应性鼻炎的血清蛋白质组学研究ComparativeproteomicresearchlntnesernmoI一·‘●●l“allergicrhinitiscases作者姓名：吕云霞学科专业：耳鼻咽喉科学学院(系、所)：湘雅医院指导老师：赵素萍教授答辩委员会主中南大学二O一二年五月原创性声明一㈣本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。、尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得

2、中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：星三匿日期：塑2兰年量月一日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：

3、熔导师签名二蜓日期：五望年』月盟日本课题受以下基金资助：>科技部“十一五”国家科技支撑计划项目子项目(项目批准号：2004BA720A19—01)>国家自然科学基金(项目批准号：30973167)本研究在复旦大学生物医学研究院、湘雅医院医学中心实验室及湘雅医院耳鼻咽喉科实验室完成，由湘雅医院医学中心实验室及湘雅医院耳鼻咽喉科实验室提供相关设备和技术支持。特此致谢!博士学位论文中文摘要摘要第一章变应性鼻炎的血清蛋白组学研究及生物信息学分析目的变应性鼻炎是一种十分常见的疾病，它还是哮喘的高危因素。变应原特异性

4、免疫治疗是唯一可以改变变应性鼻炎疾病进程的治疗方法。然而，变应性鼻炎的发病机制及其特异性免疫治疗的确切机制尚未完全阐明。本研究的目的是为了筛选与常年性变应性鼻炎发病及特异性免疫治疗密切相关的调控因子及其调节网络，为进一步深入研究变应性鼻炎及其免疫治疗的作用机制奠定基础。方法研究选取了45名确诊为常年性变应性鼻炎患者，22名经特异性免疫治疗有效患者，20名经特异性免疫治疗无效患者及20名健康志愿者作为研究对象。我们对这四组研究对象进行了同位素标记的相对和绝对定量的蛋白组学研究，接着利用二维凝胶电泳及质谱分析

5、确定我们所需的差异蛋白。然后利用利用EXPANDERv5．2软件对这些差异蛋白进行聚类分析。最后将聚类后的差异蛋白汇入Metacore软件，进一步确认可能起重要作用的调节网络及与特异性免疫治疗密切相关的蛋白作用。结果本研究共确认了210个差异蛋白，其中188个与变应性鼻炎的发生密切相关，91个与特异性免疫治疗的作用相关。通过Metacore通路软件构建了P值最小的lO组调节通路，其中以凝血通路的可信度最高。其中参与凝血通路的重要蛋白质如凝血因子XII、凝血因子III、凝血酶原、仪一2巨球蛋白及纤溶酶原等在

6、四组研究对象中表达都有所改变。在变应性鼻炎组中表达增高，经特异性免疫治疗后，在特异性免疫治疗有效组中其表达下降，而在特异性免疫治疗无效组中其表达升高或变化不明显。在Metacore软件构建的转录因子网络中，STAT3及STATl转录因子网络与凝血通路的相关系数最高。结论凝血因子XII、凝血因子III、凝血酶原、0c．2巨球蛋白及纤溶酶原构成的凝血通路很可能是变应性鼻炎炎症反应的重要调节网络。特异性免疫治疗可能通过抑制凝血通路的活化以减轻变应性炎症反应从而改善变应性鼻炎的症状。而且凝血通路可能通过STAT3

7、和／或STATl转录因子网络参与AR及特应性免疫治疗的调控。博士学位论文中文摘要第二章凝血酶Thrombin在AR血清中的鉴定目的变应性鼻炎是鼻部常见的慢性炎症性疾病，其发病机制一直以来是基础和临床研究的重点，但至今仍不十分清楚。第一章的研究我们已证实凝血通路的激活和抑制可能对变应性鼻炎的炎症反应和特异性免疫治疗的疗效起着重要作用，本章中我们选择凝血通路中起中心作用的调节因子Thrombin蛋白作为研究对象，检测变应性鼻炎及免疫治疗病人中Thrombin蛋白的表达差异。探讨Thrombin蛋白在变应性鼻炎

8、及特异性免疫治疗中的意义；并检验凝血通路与变应性鼻炎及特异性免疫治疗的相关性。方法利用酶联免疫吸附法检测变应性鼻炎(20例)，特异性免疫治疗有效组患者(20例)及特异性免疫治疗无效组患者(20例)血清中Thrombin蛋白的含量，并与健康志愿者(20例)的结果进行统计学比较。结果三个病例组(变应性鼻炎、特异性免疫治疗有效组、特异性免疫治疗无效组)与健康对照组总体比较，进一步对血清Thrombin水平进行组间两两比较。结果显示：