吲哚-2,3-二酮抗动脉粥样硬化机制研究

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1、摘要目的研究吲哚一2，3一二酮对动脉粥样硬化的预防作用，并初步探讨其作用机制。方法建立大鼠乳鼠心肌微血管内皮细胞(rCMEC)的组织贴块培养法，形态学和免疫细胞化学染色鉴定为rCMEC。在掌握其生长特性后，选用生长状态良好的第3代细胞进行后续实验。用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(OX—LDL)作用于细胞，Mrr法观察细胞的存活率以确定OX—LDL的造模浓度。吲哚一2，3一二酮预处理后，M1vr法测定其对OX—LDL诱导微血管内皮细胞损伤的影响，对OX—LDL诱导微血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响；ELISA法分别测定其对

2、ox-LDL致心肌微血管内皮细胞分泌的炎性因子白介素一6(IL一6)和肿瘤坏死因子一Q(TN卜a)的影响，并从基因水平观察二者表达的情况。结果免疫细胞化学染色法鉴定所培养的乳鼠心肌微血管内皮细胞因子CD31相关抗原阳性，细r胞呈单层铺路石样生长；MTT法结果显示浓度为0．19·Ll的OX—LDL对内皮细胞损伤作用较明显i可建立稳定的内皮细胞损伤模型，被选为造模浓度；吲哚一2，3一二酮预处理后，0．19·L。1的OX—LDL能够明显降低内皮细胞存活率，使模型组细胞吸光值明显下降，与对照组相比差异显著(尸<0．05)，与模

3、型组相比，吲哚一2，3一二酮各实验组吸光度值都升高(P

4、，吲哚一2，3一二酮高、中、低剂量组IL一6、TNF-amRNA表达均明显下降(P

5、tsandmechanismsofindol一2，3一dioneonatherosclerosis．MethodsWeestablishedtheprimaryculturemethodofratcardiacmicrovascularendothdialcells(rCMEC)．Thenweusedinvertedmicroscopetoappraisethecellswerewhatwewantedbycellsmorphologyandimmunecellchemicaldyeing．The“rdgenerati

6、onofcellswasadoptedinourexperiment．Bydeterminingtheeffectofoxidizedlow-densitylipoprotein(ox-LDL)onthesurvivalrateof妃MEC，it’Sconcen仃ationtomaketherCMECinjuredwasdecided．Thentheeffectofindol一2．3．dioneonthesurvivalrateandsecretionofcytokinesof疋MECwasinvestigatedby

7、MTTandELISA．Atthesametimeweinvestigatedtheeffectofindol一2．3．dioneontheadhesionofmonocytetorCMECinducedbyOX-LDL．Finallyweusedrealtimepolymerasechainreaction(RT-PCR)todetecttheIL一6、TNF-0cmItNA．ResultsTheculturedeellwasidentifiedtoberCMECbyimmumofluorescencemethoda

8、ndmorphologyobservation．TheOX—LDLof0．1g·L-1waschosentoinjurerCMECinexperiment．Afterpretreatmentwithind01．2，3．dionefor24hours，the疋MECwasincubatedwithOX．LDLforanother24