川芎嗪抗动脉粥样硬化机制的研究

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1、川芎嗪抗动脉粥样硬化机制的研究作者：彭小春，马红莺，尹刚，魏芸【摘要】　　目的研究川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)致人内皮细胞ECV30损伤的保护作用及机制，探讨其在动脉粥样硬化防治中的意义。方法ox-LDL诱导人血管内皮细胞损伤，以/ml川芎嗪干预2h，试剂盒测定细胞培养液中乳酸脱氢酶活性。结果川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞诱导的损伤有明显的抑制作用，主要是显著提高了血管内皮细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性。结论川芎嗪对ox-LDL导致內皮细胞损伤具有保护作用，机制与其抗氧化效应有关。【关键词】川芎嗪；氧化型低密度脂蛋白；动脉粥样硬化；谷光甘肽过氧化物酶；超

2、氧化物歧化酶内皮功能不全被认为是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)炎症学说发病机制中的最早期事件。许多危险因素能引起内皮功能不全，诸如高胆固醇血症、高血压病、吸烟、糖尿病等［1］。但内皮功能不全的确切机制还不十分清楚。越来越多的证据显示氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotEin,ox-LDL)在内皮功能不全中扮演重要角色。本实验以体外培养内皮细胞为研究对象，观察川芎嗪对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其机制，为川芎嗪在治疗动脉粥样硬化中的应用提供实验依据。1材料与仪器1.1药物盐酸川芎嗪氯化钠溶液，购于山东华鲁制药有限公

3、司，用蒸馏水稀释成终浓度/ml。细胞人内皮细胞株(ECV304)购自武汉大学典藏中心。试剂与仪器DMEM，胎牛血清以及胰蛋白酶购自美国Gibeco公司；乳酸脱氢酶值，经0.%的琼脂糖凝胶电泳检测LDL氧化程度。.3实验分组测定其它指标的细胞，无血清培养基同步化1h，随机分为４组：①空白对照组：不加任何刺激因素；②川芎嗪对照组：加入终浓度为/ml的川芎嗪；③ox-LDL组加入终浓度为mg/ml的ox-LDL；④川芎嗪保护组加入终浓度为mg/ml的ox-LDL和/ml的川芎嗪。各组细胞加入处理因素后继续培养2h，收集细胞培养液，测定LDH、MDA含量；收集细胞检测SOD、GSH-Px活性

4、。.4测定LDH、MDA含量以及SOD、GSH-Px活性收集1孔培养板中培养液，按照试剂盒说明书测定LDH和MDA含量；培养板中细胞用PBS洗2次，刮取细胞，加入冰冷PBS悬浮细胞，超声1s，反复冻融3次，离心，按照试剂盒方法测定SOD、GSH-Px活性。结果.1内皮细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化鉴定细胞呈椭圆形，多角形或不规则形，胞浆中有黄褐色颗粒存在，Ⅷ因子相关抗原鉴定反应阳性。.2川芎嗪对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用细胞培养液中LDH检测表明：经ox-LDL刺激2h后细胞分泌的LDH含量U/L，明显高于未加任何处理因素的空白组U/L。而经过终浓度为/ml的川芎嗪处理的药

5、物保护组细胞分泌的LDH含量为U/L，明显低于ox-LDL组，两者差异显著。川芎嗪保护组较ox-LDL组MDA含量明显降低，差异有显著性，其中ox-LDL组MDA为μmol/L，而川芎嗪保护组MDA为μmol/L；同时川芎嗪保护组的SOD、GSH-Px活性明显高于ox-LDL组，ox-LDL组SOD为mU/L，GSH-Px为kU/；川芎嗪保护组SOD为mU/L，GSH-PxkU/L，两组差异显著。结果见表1。表1川芎嗪对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用　4讨论内皮细胞功能障碍是AS始发事件，而ox-LDL是目前公认的致内皮细胞损伤的危险性因子之一。临床上发现急性心肌梗塞患者血浆

6、ox-LDL水平明显高于心绞痛患者和对照组，但三者之间的脂质水平无差异［3］。Toshima等发现冠心病(coronaryheartdisease，CHD)患者血浆ox-LDL水平较对照组明显为高，该水平独立于其它危险因素之外［4］。ox-LDL直接损伤内皮细胞，破坏其完整性，增加细胞死亡率。川芎嗪作为一种抗氧化作用机理抗动脉粥样硬化越来越受到重视［5］。LDH和MDA是一种细胞内的酶，广泛存在于细胞浆内，当细胞破坏或细胞膜通透性增加时，其水平均明显增高，可反映细胞或细胞膜损伤的程度［6］。ox-LDL作用于内皮细胞24h后促进细胞膜脂质过氧化和胞膜损伤，ox-LDL组LDH、MDA

7、含量明显升高，而川芎嗪可使ox-LDL损伤细胞的LDH、MDA含量明显降低，说明川芎嗪通过清除氧自由基，达到修复和保护作用细胞膜的完整性的作用。　　高脂蛋白环境可使机体产生大量自由基，生物膜上的不饱和脂肪酸受活性氧作用，产生大量脂质过氧化物，使生物膜结构和功能改变，从而造成组织细胞的损伤。在保护细胞免受或减轻活性氧损伤的过程中，细胞内SOD和GSH-Px等具有抗氧化功能的酶起着不可忽视的作用［7］。SOD催化超氧根阴离子生成H2O2和O2，GSH-Px可将