鹅bmp4基因克隆及其对颗粒细胞凋亡的抑制作用研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationMolecularcloningofBMP4geneanditseffectonapoptosisolgranulosacellsingoosen‘’’●ByYingyingZhang一⋯一DirectedbyProf．Ji—wenWangAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGeneticsandWaterfowlBreedingThecollegeofAnimalScienceandTe

2、chnology，SichuanAgriculturalUniversityYa’an，SichuanProvince，ChinaJune，2014论文指导小组成员塑炒万方数据李亮教授刘贺贺副研究员韩春春副研究员(INJil农业大学动物科技学院)本论文由国家水禽产业技术体系(CARS．43．6)、四川省畜禽育种攻关项目(2011NZ0099．8)资助本论文在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室”完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外

3、，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川f农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：张宦莒2,,／7年占月f7日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：苏宦髫导

4、师签名：i形壶又砂H年f具＼＼177t加一年6月／1日万方数据摘要BMP4是BMPs蛋白家族中的一员，对卵泡颗粒细胞与膜细胞类固醇激素的分泌以及颗粒细胞分化有着调节作用，并且在有些物种上对颗粒细胞的增殖或凋亡也产生影响。而颗粒细胞的增殖与凋亡对卵泡发育来说至关重要。因此，本试验拟探究BMP4对鹅等级前卵泡颗粒细胞增殖或凋亡的影响。通过基因克隆获得鹅的BMP4基因完整CDS区序列，并采用实时荧光定量技术检测其在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞与膜细胞中的相对表达量。通过构建其真核表达载体pEGFP—NI．BMP4，使用脂质体转染法对颗粒细胞进行转染来探究BMP4对鹅

5、颗粒细胞增殖与凋亡的影响。取得的主要研究结果如下：(1)鹅BMP4基因CDS区序列全长为1212bp，其核苷酸序列与斑胸草雀的同源性高达96．3％，编码的氨基酸序列同源性为98．3％。(2)鹅BMP4基因mRNA在颗粒细胞中的相对表达量均高于其在相同卵泡发育阶段的膜细胞中的表达量(卵泡直径为6～8mm的发育阶段除外)。BMP基因mRNA在小卵泡颗粒细胞中表达量较低，随后表达量逐渐上升，于直径8～10ram的卵泡及F5中表达量达到最高，随后又开始迅速下降。膜细胞BMP4基因mRNA表达量在直径6～8mm的卵泡中最高，且这一卵泡发育阶段中BMP4基因mRNA在膜

6、细胞表达量要高于颗粒细胞，而在卵泡其他发育阶段中膜细胞BMP4mRNA表达量均低于颗粒细胞。(3)颗粒细胞转染36h后，BMP4转染转染组OD值显著高于对照组(P

7、词：鹅；颗粒细胞；凋亡；BMP4万方数据MolecularcloningofBMP4geneanditseffectonapoptosisofgranulosacellsingooseByYingyingZhang(AnimalGenetics．Breeding&Reproduction)DirectedbyProf．WangJi-wenAbstract：BMP4asamemberofBMPs，affecttingtheproductionofsteroidshormonethatseretesbygranulosacellsandthecacellsand

8、thedifferentiationofgranul