靶向调节nlrp1炎症小体介导的神经元焦亡治疗阿尔茨海默病

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1、万方数据靶向调节NLRPl炎症小体介导的神经元焦亡治疗阿尔茨海默病学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：yl峰．1V．1，万方数据谨以此论文献给：我尊敬的导师谭兰教授和关心、爱护、支持我工作～学习和生活的各位老师、同学和家人!谭梦姗万方数据独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得——(洼!翅送直基丝盂垂堑剔重堕的!奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的

2、说明并表示谢意。学位论文作者签名：濒嘶签字日期：印c毕年fp月1日I学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：嬷剪

3、槲签字日期：p11年f、，月f日亟∥弘引夕么矗字期签日’_h¨?7一师字导签万方数据靶向调节NLRPI炎症小体介导的神经元焦亡治疗阿尔茨海默病靶向调节NLRPl炎症小体介导的神经元焦亡治疗阿尔茨海默病摘要目的：研究NLRPl炎症小体对13一淀粉样蛋白(Amyloid—B，AB)诱导的皮层神经元焦亡的作用，及其在阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)发生中的机制，探讨靶向调节脑内NLRPl炎症小体对APPswe／PSldE9双转基因AD小鼠认知功能和脑内神经病理的影响。方法：1、离体层面：分离纯化大鼠皮层神经元，应用不同浓度的AB。啦作用于神经元，测定神经元活力和乳

4、酸脱氢酶(LDH)释放量，通过TIJNEL染色阳性细胞计数，ASC荧光染色，了解神经元的焦亡情况；同时，采用免疫印迹法检测ABⅧ作用下NLRPl表达、Caspase一1活性水平，ELISA检测IL一1B表达水平。应用小于扰RNA(siRNA)技术，了解NLRPl炎症小体信号通路在A13。z诱导的神经元焦亡过程中的作用。2、活体层面：选取雄性3月、6月及9月龄APPswe／PSldE9双转基因小鼠以及其对照同源野生小鼠，通过免疫印迹法、荧光共定位法测定脑组织神经元中NLRPl随年龄变化的表达情况。之后选取5月龄APPswe／PSldE9小鼠，随机分为干扰组和对照组。干扰组于第三脑室通过

5、微型渗透泵持续输注NLRPJ或Caspase一1siRNA(0．1】ul／h)以抑制脑内NLRPI或Caspase一1的表达；对照组输注对照siRNA(0．11u1／h)。6周后，干扰效率通过免疫印迹法以及RT-PCR法确认。通过MorriS水迷宫测定小鼠空间学习记忆能力。通过免疫印迹法测定脑中Caspase-1活性水平、IL-Ip表达水平的变化；通过TUNEL染色观察小鼠皮层、海马区神经元TUNEL阳性细胞百分比变化，尼氏染色观察神经元细胞浆中的尼氏小体(Nisslbody)变化，免疫组化观察胞外淀粉样斑的变化。结果：】、离体层面：5umol／LABH：与原代培养的大鼠皮层神经元共

6、同孵育24h诱导神经元焦亡，表现为TUNEL染色阳性细胞数增多，LDH释放量增加，ASC斑形成；同时NLRPl表达水平升高，Caspase～l激活，IL一1B释放增多。用NLRPIsiRNA对大鼠皮层神经元进行预处理48h后再加入A13H，共同孵育，发现靶向抑制NLRPl对A13致神经元焦亡损伤有明显的保护作用，表现为TUNEL染色阳性细胞数减少，LDH释放量减低；同时活化态Caspase-1明显降低，IL一1B释放减少。2、活体层面：与同月龄对照小鼠相比，6月龄和9月龄APPswe／PSldE9小鼠脑神经元中NLRPI水平显著升高。给予NLRPl或Caspase-1siRNA6周能

7、降低APPswe／PSldE9小鼠脑内NLRP]或Caspase一1万方数据靶向调节NLR．P]炎症小体介导的神经元焦亡治疗阿尔茨海默病水平约50一6096。同时，干扰组小鼠脑内IL一113水平明显降低；神经元胞浆中Niss]body改变减轻、数量增多，神经元TUNEL阳性细胞百分比减低，而胞外淀粉样斑尚未见明显变化。此外，MorriS水迷宫隐蔽平台实验中，干扰组小鼠寻找平台潜伏期及游行距离较对照组明显缩短；空间探索实验中，干扰组小鼠在目标象限游泳时间较对