靶向于β淀粉样蛋白的先导化合物筛选及其相互作用

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1、博士学位论又靶向于J3淀粉样蛋白的先导化合物筛选及其相互作用作者姓名：学科专业：导师姓名：完成时间：葛金芳神经生物学周江宁教授二。一一年三月UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor’SdegreeScreeningandinteractionofleadingcompoundswithbetaamyloidAuthor’SName：Specialitv：一●bupervISOr：Finishedtime：Jin—FangGeNeurobiology一一ProfJiang—NingZhouMarch，

2、20ll中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除己特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：超．签字日期：中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入{：中国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫

3、描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。f口公开作者签名：导师签名：签字日期：弘＼4∥加It．r．弓f中文摘要摘要阿尔茨海默病(alzheimerdisease，AD)是临床常见的痴呆类型，其主要病理改变为老年斑和神经元纤维缠结。p淀粉样蛋白级联反应假说是目前关于AD发病机制较为公认的学说，其基本观点认为，p淀粉样蛋白(amyloidbeta,AB)的沉积、聚集是AD发病的始发因素，而其他病理特征如tau蛋白的高度磷酸化以及随后的神经元纤维缠结等都与AD沉积有关。因此，从理论上讲，若能找到有效且可靠的抑制

4、Ap聚集的试剂或药物，将有可能减少由Ap纤维导致的神经元变性及其他病理改变，从而抑制或阻止AD的病程发展。Ap是一个含有40—42个氨基酸的多肽，为D淀粉样蛋白前体蛋白的水解产物。生理条件下AD是可溶的，而在病理状态下Ap可在神经组织中形成致密纤维状的聚合体，成为不溶性的Ap，并表现出神经毒性。研究表明，不同的AB片段如Apl．40和Apl-42具有不同的聚集特性，而且在不同的条件下合成的AD纤维结构不同提示了Ap纤维的多形性真实存在，并已通过固态核磁共振(nuclearmagneticresonance，NMR)等技术得以证明。因而，探索合适的实验环境，包括温度的影响对于研究A

5、p的特点及靶向于AD的药物是十分必要的。本研究采用改良的等温滴定微量热(isothermaltitrationcalorimetry，ITC)、圆二色谱(circulardichroismspectra,CD)和原子力显微镜(atomicforcemicroscope，AFM)等方法观察了Apl-40和A131．42在不同温度下静置、无搅拌状态下的聚集过程，确定了稳定的体外实验条件。在此基础上，利用表面等离子共振技术(surfaceplasmonresonance，SPR)对本课题组根据构效关系设计并合成的大量化合物进行了抗Ap聚集活性的初步筛选，并以白藜芦醇(resveratr

6、ol，RES)为代表，对部分具有Ap抗聚集活性的化合物进行了功能确定，最后拟通过脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)腹腔注射的方法建立ICR小鼠学习记忆障碍模型并研究RES对其影响。结果表明：1．4"C的实验温度持续24h，单体Apl·40和ADl-42均不发生热力学改变，而25"C和37℃条件下单体Apl-40和Ap卜42静置24h内均显示吸热的热力学过程；结合CD及AFM的实验结果，提示4"C的实验温度下，单体A[31．40和Apl．42都不发生自我聚集，而在25℃和37℃的实验条件下，A]31．40和ADl．42都出现了明显的热力学改变、二级结构改变和粒径

7、大小的改变，表明25"C和37℃下A131．40和ADl．42都可以发生自我聚集。2．利用表面等离子共振技术，首先证实了刚果红和硫黄素S可以与单体及纤维状ADI．40和Apl·42结合，提示表面等离子共振技术可以用于抗淀粉样蛋白中文摘要聚集化合物的初步筛选。3．通过表面等离子共振技术，待选化合物中仅有部分能与单体或纤维状AB结合，但结合能力比CongoRed弱。而且相同浓度下，不同化合物与Ap的结合能力和其与fAp的结合能力并不一致。这是否与其在聚集过程中存在二级结构改变从而暴露