通路抑制剂ly294002、pd98059对sdf-1介导的卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMasterTheef-fectofinhibitorsofsignaltransductionpathwayPD98059andI．Y294002onprloli氨eration，inVasiVenessofoVariancarcinomacellinterferedbvSDF—l，ByhuijunWangSuper、，isor：PIIo￡yuhuanQiao0bstetricsandGynecologyTheFirstA确liatedHospitalof

2、ZhengzhouUniVersityMay2014学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：携聋＼J嗍训勿年妒7同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位沦文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可

3、以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位做憾协孽R期：仞／泸占月7R摘要通路抑制剂LY294002、PD98059对SDF一1介导的卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响研究生王会军导师乔玉环教授郑州人学第一附属医院妇科河南郑州450052背景与目的基质衍生凶子一1(stro腑1cell一derivedfacLorl，SDF一1)是由骨髓基质细胞及其他相关的问皮细胞和上皮细胞分泌的一种趋化蛋白，

4、系统命名为CXCLl2。趋化因子受体4(chemokinereceptor4，CXCR4)是SDF一1的主要受体。SDF一1与CXCR4特异性结合后形成的SDF一1／CXCR4生物轴广泛参与体内多种病理生理过程，研究证实SDF一1／CxCR4与肿瘤的增殖、浸润和转移密切相关。SDF一1与cxcR4的结构和相互作用机制是发挥其病理、生理功能的基础。尽管有报道称SDF一1、CXCR4在卵巢癌组织及细胞中呈高表达，sDF．1可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭、迁移能力，但关于SDF一1／CXCR4对卵巢癌增殖和侵袭能力影响的作用机制尚不清楚。信号通路的激活是癌发生的早期事件，磷脂酰肌醇3激酶／蛋白

5、激酶B(P13K／Akt)信号途径是细胞内重要的信号传导通路：分裂原活化抑制剂／蛋白激酶(MEK／ERK)信号途径是重要的细胞外信号传导通路。本实验主要研究SDF一】对卵巢癌细胞的增殖、侵袭能力的促进作用是否能被MEK抑制剂PD98059、Akt抑制剂LY294002所阻断，从而探讨SDF一1／CXCR4生物轴与信号通路MEK／ERK及P13K／AKT信号通路的关系。方法1．细胞培养卵巢癌细胞系SKOV3，应用含12％胎牛血清的RPMI—1640培养基培养，置于5％C眈、37℃、饱和湿度的细胞培养箱中孵育。摘要2．采用细胞免疫化学检测SD卜】作用不同时问以及不同作用浓度，卵巢癌细胞表达

6、磷酸化AKT(P—AKT)和ERK(P—ERK)水平的变化；3．采用四甲基亚哗蓝(MTT)法检测卵巢癌SKOV3细胞在100ng／m1sDF—l、10pg／m1CXCR4中矛f1抗体、1ug／m1CxCR4抑韦4齐UAMD3100、50um01／LLY294002、50umol／LPD98059作用下细胞增殖能力的变化。4．采用Transwell细胞侵袭实验法检测卵巢癌sKov3细胞在100ng／mlSDF一1、10

7、Jg／mlcxCR4中丰口抗体、1ug／m1CXCR4抑铝I齐UAMD3100、50um01／LLY294002、t50um01／LPD98059作用下细胞侵袭能力的变化

8、。5．采用SPSSl6．0统计软件处理数据，定性资料采用等级资料秩和检验：定量资料以x±s表示，方差齐性检验，多组问的比较采用方差分析，多个样本均数的两两比较采用l，SD—t检验。检验水准口毛纸以尸m笏为差异具有统计学意义。结果1．磷酸化的ERK蛋白主要表达于sKOV3细胞的胞质和胞核中，以胞核表达为主，磷酸化的Akt主要表达于卵巢癌细胞的胞质中，镜下可见棕黄色颗粒。根据阳性细胞数及细胞染色程度表示蛋白表达水平，随着100ng／mlSDF—l作