家蚕吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶基因的rna干扰研究

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1、分类号：单位代码：103644密级：学号：13720334安徽农业大学学位论文家蚕吡哆醛激酶和磷酸吡哆醇氧化酶基因的RNA干扰研究ResearchonpyridoxalkinaseandpyridoxinephosphateoxidasegenebyRNAiinsilkworm,Bombyxmori研究生：姚丽丽指导教师：黄龙全教授合作指导教师：申请学位门类级别：农学硕士专业名称：农产品加工及贮藏工程研究方向：动物源食品科学所在学院：茶与食品科技学院答辩委员会主席：222016年6月万方数据万方数据独创性声明本人声

2、明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文

3、。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：年月日第一导师签名：时间：年月日万方数据万方数据摘要PLP是主要辅酶形式，参与体内氨基酸、糖原、神经递质、鞘磷脂、血红素和核酸的合成与代谢。由于PLP的缺乏会引起严重的神经系统疾病，PLP浓度过高又会产生毒性作用，导致感觉神经和运动出现问题，因此PLP的合成调节及平衡供给是VB6营养核心问题。酶的调节一般从结构水平和合成水平两个方面进行研究，目前PLP合成酶结构水平研究已经透彻，但

4、是合成调节如转录翻译等方面研究有待深入。有研究发现过表PLP依赖酶，PLP含量随之也增加，这提示PLP的合成酶和PLP依赖酶之间有联动调节关系。家蚕是大型泌丝性昆虫，蛋白质代谢旺盛，PLP作为转氨酶的辅酶，PLP需求量增加。为此本研究以家蚕为实验材料，用RNAi的方法对PLK和PNPO基因进行干扰，用荧光定量的方法检测PLK基因、PNPO基因及转氨酶基因的转录水平表达变化，并用高通量测序的方法对RNAi处理后的家蚕丝腺组织进行基因转录组学分析，探讨涉及PLP合成酶基因调控网络。实验结果如下：1.家蚕PLK和PNPO

5、基因RNAi（1）PLK和PNPO基因在注射干扰片段siRNA48h后干扰效率最佳。（2）PLK最佳干扰片段是k-siRNA1下降了80%；PNPO最佳干扰片段是o-siRNA2下降了65%。（3）PLK和PNPO基因RNAi处理后，干扰效果最好的组织都是中肠组织，基因表达量分别下降了55%和52%。脂肪体中几乎没有干扰效率。2.家蚕PLK和PNPO基因RNAi后转氨酶的表达量研究PLK基因RNAi处理后，丝腺中磷酸丝氨酸转氨酶（phosphoserineaminotransferase,SerB）和天门冬氨酸氨基

6、转移酶（asparateaminotransferase,AST）表达量分别下降了90%和29%；PNPO基因RNAi处理后，丝腺中SerB和AST基因表达量分别下降了28%和26%。3.家蚕PLK和PNPO基因RNAi后丝腺组织转录组学分析PLK基因RNAi处理后，筛选得到差异基因365个，其中基因下调177个，基因上调188个。对PLK基因处理组的差异基因进行GO富集，其中，有显著的GOterms有150个(P≤0.05)，包括39个分子功能（Molecularfuntion），99个生物过程（Biologic

7、alprocess）及12个细胞成分（Cellcomponent）。对KEGG代谢通路分析发现有9条通路有富集现象，差异基因主要富集在内质网蛋白加工、次生物质合成和累积及蛋白输出通路中。PNPO基因RNAi处理后，筛选得到差异基因381个，其中基因下调基因260个，上调基因121个。对PNPO基因RNAi处理组的差异基因进行GO富集，分I万方数据析发现具有显著性富集的分析发现具有显著性的Goterms有280个（P≤0.05），包括140个生物学过程、68个细胞组分和72个分子功能。对其KEGG代谢通路通路分析发现

8、有10条通路有富集现象，差异基因主要富集在内质网蛋白加工、蛋白质输出、核糖体及氨酰生物合成通路中。本研究证明了家蚕PLP合成酶基因和转氨酶基因存在联动调节，PLP合成酶RNAi干扰后影响到家蚕丝蛋白合成，为进一步分析PLP的动态平衡及VB6的代谢工作奠定基础，为研究人类VB6营养问题提供依据。关键词：家蚕，吡哆醛激酶，磷酸吡哆醇氧化酶，磷酸吡哆醛，RNA干扰