以木糖异构酶基因xyla为选择标记的gateway系统植物表达载体的构建

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1、生物技术通讯LETFERSINBIOTECHNOLOGY一Vo1l．2一1一No．·一1Jan．，201035doi：10．3969~．issn．1009-0002．2010．01．008研究报告以木糖异构酶基因xylA为选择标记的Gateway系统植物表达载体的构建阎淑滑，周波，赵霞，李玉花东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室，黑龙江哈尔滨150040[摘要]目的：构建以木糖异构酶基因xylA为筛选标记的无抗生素标记Gateway系统植物表达载体。方法：克隆大肠杆菌木糖异构酶基因xylA并用其替换植物表达载体pCAMBIA1301中的hot基因，利用载体中的多克隆

2、位点将GatewayBinaryVector(pH7WG2D)中酶切位点XbaI和Hind11I之间包括P35S、T35S、attR1、attR2和CmR—ccdB的片段重组入表达载体pCAMBIA1301中，构建表达载体pCAMBIA1301一xylA—GW，利用含有津田芜菁HY5基因片段的BP反应产物与载体进行LR反应，获得含有目的基因的植物表达载体pCAMBIA1301一xylA—HY5，并导入根癌农杆菌LBA4404中。结果：抗生素筛选及酶切和PCR鉴定表明成功构建了以xylA为筛选标记的无抗生素标记植物表达载体pCAMBIA1301一xylA—HY5。结论：利

3、用木糖异构酶基因xylA结合Gateway克隆技术构建无抗生素标记植物表达载体，可简化、方便植物转基因表达载体构建。[关键词]Gateway技术；木糖异构酶基因；LR反应；植物表达载体[中图分类号]Q78[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(201O)01—0035—04ConstructionofGatewayPlantExpressionVectorswithGeneasSelectionMarkerYANShu-Hua,ZHOUBo．ZHA0io,LIYu—HuaDepartmentofDevelopmentalBiology，CollegeofLife

4、Sciences，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China[Abstract】Objective：ToconstructplantexpressionvectorwithxyloseisomerasegenexylAastheselectionmarkerusedinGatewaytechnologysystem．Methods：First，xyIAgenewasclonedfromEscherichiacoli，andwasconstructedintopCAMBIA1301bysubstitutingfor7gen

5、e．Second，thefragmentincludingP35S，T35S，attR1，at—tR2andCmR—ccdBoftheGatewayBinaryVectorfpH7WG2D)wascutbyXbaIand月ndⅢandwasrecombi—nantedintotheexpressionvectorpCAMBIA1301一xylA．Third，thedonorvectorwithHY5gene[clonedfrom‘Tsu—da’Turnip(BrassicaeampestrisL．ssp．rapa)afterBPreacticIn]wasmixedwit

6、hpCAMBIA1301一xylA—GWvectorbyLRreaction．Then，therecombinantplasmidwastransformedintoAgrobacteriumtumefaciensLBA4404byelectro—poration．Results：TheplantexpressionvectorpCAMBIA1301一ylA—HY5forGatewaytechnologysystemwasSUC—eessfullyconstructedbyidentification．Conclusion：Theresultsshowedthatiti

7、sconvenienttoconstructnon-an—tibioticmarkerplantexpressionvectorbyusingxylAasselectivemarkerandGatewaycloningtechnology．[Keywords]Gatewaycloningtechnology；xyloseisomerasegene；LRrecombinationreaction；plantexpressionvector目前，随着植物转基因技术的飞速发展，已获甘露糖异构酶可将甘露糖一6一磷酸转化成果糖一6一得了大批转基因植