mirna--133b在低强度激光照射促进骨髓间质干细胞增殖中的作用

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1、温州医学院硕士学位论文miRNA--133b在低强度激光照射促进骨髓间质干细胞增殖中的作用姓名：黄伟聪申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：孙成超2012-05-19温州医学院硕士学位论文miRNA-I33b在低强度激光照射促进骨髓间质干细胞增殖中的作用中文摘要目的探讨低强度激光照射(LLLI)促大鼠骨髓问质干细胞(BMSCs)增殖中miRNA的作用。方法体外全骨髓贴壁法原代培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)，取生长良好的第2代细胞作为本实验的研究对象。以InGaAsP半导体激光(635nm，60mw)能量密度O．5J／cm2照射细胞做为实验组，以未

2、接受激光照射细胞做对照，采用MTS法绘制细胞生长曲线，TaqMan低密度芯片分析miRNA表达变化，qRT．PCR法检测细胞周期相关基因表达，生物信息学方法预测芯片中表达变化较大的miRNA的靶点基因，并对其靶点基因进行基因功能分析。miRNA功能学实验中利用siPORTNeoFX将miRNA模拟物／抑制剂转染大鼠骨髓间质干细胞，过表达／抑制芯片中变化较大miR-15b／miR-29b／miR一133b／miR一224／miR一3205种miRNA，同时以转染相应的无义核苷酸序列做阴性对照，免疫荧光和TaqManqRT．PCR验证转染效率，MTS法、Br

3、du细胞增殖比色法和ki67免疫荧光检测转染后细胞增殖情况，流式细胞技术(ArmexinV／PI双染)和TUNEL免疫荧光分析细胞凋亡情况。结果1．低强度激光照射能够促进体外培养的大鼠骨髓间质干细胞的增殖，增加细胞周期相关基因的表达。2．f氐强度激光处理影响骨髓间质干细胞miRNA的表达，miRNA芯片结果提示共有34个miRNA发生1．25倍以上变化。3．过表达miR．133b能促进BMSCs的增殖(尸

4、过影响细胞周期相关基因表达发挥其促增殖功能。5．体外抑制miR-133b通路，能够抑制低强度激光照射介导的BMSCs增殖。结论miR．133b在低强度激光照射(LLLI)介导的BMSCs增殖中起关键作用，在临床间质干细胞治疗中可能具有潜在的应用价值。关键词骨髓间质干细胞；低强度激光照射；miRNA；细胞增殖；细胞凋亡4温州医学院硕士学位论文miRNA-·133bPro··proliferationEffectforBoneMesenchymalStemCellsafterLow．1evelLaserIrradiationTreatment．Abstrac

5、tObjectives：ToinvestigatetheroleofmiRNAsinthebonemarrowderivedmesenchymalstemcells(BMSCs)pro．proliferationeffectaftertheLow．1evellaserirradiation(LLLI)treatment．Methods：PrimaryculturedBMSCsofratsweretreatedbyLLLI，CellproliferationWaSevaluatedbyMTSassay，TaqManlow·densitymicroarray

6、analysisofmiRNAexpressionchanges，qRT-PCRtodetectexpressionofcellcycle-associatedgenes．UsingmiRNATargetdatabaseandbioinformaticsanalysesweidentify5miRNAsaspotentialtargetsandtestifytheirdynamicchangesafterLLLI．Throughgain-loss—functionexperiment，primaryculturedBMSCsofratsweretrans

7、fectedwith5miRNAsmimicandinhibitor(miR-15b／miR-29b／miR一133b／miR-224／miR-320)bvsiPORTNeoFXtoincreaseorreducetheactivityofthem,transfectedwiththeircorrespondingnegativecontrolascontr01．ThetransfectionrateweredetectedbyqRT-PCRandfluorescenceintheBMSCsfromFAMTMdye．1abeledmiRNA．Cellpr

8、oliferationwasevaluatedbyMTSassay，colori