microrna在骨髓间质干细胞介导的急性肾损伤修复中的作用研究

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1、硕士学位论文microRNA在骨髓间质干细胞介导的急性肾损伤修复中的作用研究THEROLEOFMICRoRNAINBoNEMARROWMESENCHYMALSTEMCELL—MEDL～TEDREPAIRoFACUTEKIDNEYINJURY作者姓名：周颖指导教师：钱晖教授小组成员：申请学位：学科专业：许文荣教授朱伟研究员硕士临床检验诊断学论文提交日期：2013年5月3日论文答辩日期：2013年6月10日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月17日答辩委员会主席：张竹繁教授基金资助：国家自然科

2、学基金重大研究计划(91129718)国家自然科学基金(81272481，31140063，81071421)江苏省医学领军人才与创新团队(LJ201117)独创性声明＼I㈣必刿炒本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果

3、由本人承担。学位论文作者签名：J司敖日期：测j年6月／7日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布

4、(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：J司疑洲)年‘月，7日指导教师签名：川年‘月，-lEl江苏大学硕士学位论文摘要目的探讨大鼠骨髓间质干细胞(bonemallrowmesenchymalstemcells，rMSCs)在顺铂诱导的大鼠急性肾损伤(acutekidneyinjury，AKI)中通过调控关键microRNA(miRNA)的表达从而发挥修复作用。骨髓间质干细胞(rMSCs)移植AKI大鼠，观察rMSCs对损伤肾的修复作用；miRNA芯片比较筛选出在rMS

5、Cs组与PBS组中表达差异的miRNAs分子，体内外实验验证并探寻rMSCs修复肾损伤中的关键miRNAs，揭示rMSCs修复肾损伤的可能分子机制。方法以6mg／kg剂量的顺铂经腹腔注射到大鼠体内，建立急性肾损伤实验动物模型。于顺铂注射后的24h以尾静脉注射方式将2×106rMSCs输注到大鼠体内，并分别在损伤不同时间点收集大鼠的血液，检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平来评价MSC对肾功能的改善情况，通过活体成像观察rMSCs的组织定位。于顺铂注射后5d处死大鼠，留取肾组织标本，HE染色观察rMS

6、Cs对肾组织的修复作用，WesternBlot检测凋亡相关蛋白的表达，免疫组织化学染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，TUNEL染色检测肾小管上皮细胞的凋亡情况，综合评价间质干细胞对急性肾损伤的修复作用。在此基础上，留取正常大鼠(对照组)，急性肾损伤输注PBS大鼠(PBS组)以及输注rMSCs的大鼠(rMSCs组)的肾组织进行microRNA芯片分析。经芯片比较筛选，选取rMSCs组与PBS组差异显著的miRNAs分子，经qRT．PCR检测并验证这些miRNAs分子在体内外模型中的表达情micro

7、RNA在骨髓间质干细胞介导的急性肾损伤修复中的作用研究况。在体内外模型中差异变化一致的miRNAs，进一步研究其下游靶基因及相关信号通路，探讨rMSCs修复肾损伤中可能的分子机制。结果体内活体成像结果显示经尾静脉注射的rMSCs能够到达损伤的大鼠肾组织，rMSCs移植组的BUN、Cr水平较PBS组有明显的下降(P

8、的凋亡，WesternBlot显示rMSCs移植组的Bax表达下调，Bcl．2的表达上调。microRNA芯片分析显示部分miRNAs分子在PBS组较正常对照组的表达显著增高或降低，而rMSCs可以逆转相应miRNAs分子的表达。选取miR一92b，miR一146b，miR．150*与miR一455进行验证，qRT—PCR验证结果显示miR．146b在体内外模型中变化一致且与芯片结果相符，初步选取miR．146b进行体外功能实验。Weste