低能激光照射对猪心肌干细胞增殖及旁分泌作用的影响

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1、分类号：R541.4学校代码：10062密级：学号：2012602409硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：低能激光照射对猪心肌干细胞增殖及旁分泌作用的影响TITLEEffectoflow-levellaserirradiationonproliferationandsecretionofporcinecardiacstemcells一级学科：临床医学二级学科：内科学心血管病论文作者：赵剑指导教师：夏大胜教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R541.4学校代码：10062密级：学号：201260240

2、9学位类别：科学学位□√专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：低能激光照射对猪心肌干细胞增殖及旁分泌作用的影响TITLE：Effectoflow-levellaserirradiationonproliferationandsecretionofporcinecardiacstemcells一级学科：临床医学二级学科：内科学心血管病论文作者：赵剑指导教师：夏大胜教授导师组成员：卢成志陈欣天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进

3、行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于

4、不保密□√。学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：心肌干细胞（cardiacstemcells,CSCs）是心梗后细胞再生修复疗法的热点种子细胞。低能激光照射（low-levellasterirradiation,LLLI）已被证实能够影响多种体外培养细胞的生长状况及细胞因子的分泌，但目前尚缺乏LLLI对心肌干细胞影响的研究，本实验旨在探讨不同能量强度低能激光照射对体外培养的猪心肌干细胞增殖效率及旁分泌作用的影响。方法：选取成年巴马小型猪，雌性，体重25-30kg。通过心脏外科手术经右

5、侧小切口钳取右心耳组织，用组织块培养法获取原代心肌干细胞，以心肌干细胞培养液进行培养，视细胞生长情况进行传代。选取分选纯化后的第3代细胞行流式检测鉴定细胞表型：c-kit、CD34、CD45、CD31、CD90、Lineage；行WesternBlot检测心肌早期特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4的表达；诱导剂诱导后行免疫荧光检测CX43、cTnT、α-SMA、vWF，以观察心肌干细胞的多向分化潜能；并以不同能量密度（0J/cm2,0.50J/cm2,0.75J/cm2,1.00J/cm2,3.00J/cm2,5.00J/cm2）

6、的低强度激光（660nm）照射，检测上清液中的乳酸脱氢酶（lacticdehydrogenase，LDH）含量以行细胞毒性分析；MTT呈色法绘制心肌干细胞增殖曲线；酶联免疫吸附法（ELISA）测定上清液中胰岛素样生长因子-1(InsulinlikeGrowthFactor-l，IGF-1)和促血管生成素-2(angiopoietin-2)的含量。结果：1.传代分选后细胞流式细胞仪鉴定结果显示，干细胞因子受体c-kit表达阳性，而成纤维细胞标志CD90、造血干细胞标志CD34、血源性标志CD45和Lineage以及内皮标志CD31表达阴性

7、。WesternBlot检测结果显示，心肌早期特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4结合蛋白表达阳性。2.传代分选后的细胞分别经5-氮杂胞苷、rh-PDGF-BB以及bFGF三种诱导剂诱导后，可分化成熟至表达心肌细胞特异的CX43和cTnT蛋白，平滑肌细胞独有的a-SMA蛋白，以及内皮细胞的vWF因子。3.波长660nm的低能激光在0.50-5.00J/cm2能量密度下照射，对体外培养的心肌干细胞没有明显的细胞毒性。I天津医科大学硕士学位论文4.低能激光照射对CSCs的增殖速率有促进作用，最佳能量密度可能为0.75J/cm2；LLLI

8、能够促进心肌干细胞分泌IGF-1及angiopoietin-2，最适能量密度可能是3J/cm2。结论：+----1.自成年小型猪右心耳组织成功分离获得c-kit、CD31、CD34、CD45、CD90、Li