新型色胺酮ido抑制剂的筛选及抗肿瘤作用的研究

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1、万方数据姓名杨青指导小组成员名单：职称教授单位复旦大学生命科学学院、＼螋躞万方数据目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32．3抑制常数Ki及配50值测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．4细胞水平]DO抑制活性测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．207．Transwell实验检测细胞的运动侵袭能力⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．252．IDO活性检测体系的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯273．HEK293细胞瞬转rhlDO的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．284．色胺酮类IDO抑制剂的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一294．1TQ系列化合物IDO抑制活性的初筛⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．294．2TQ系列化合物抑制类型判定及Ki、IC50的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．294．3TQ系列化合物细胞水平的IDO抑制效果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯295．TQ系列化合物对T淋巴细胞增殖影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31万方数据6．TQ系列化合物的体内抗肿瘤作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯．326．1TQ系列化合物对LLC荷瘤小鼠肿瘤生长的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯326．2TQ系列化合物对LLC荷瘤小鼠体内IDO活性影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．347．色胺酮类化合物作用于IDO的分子机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯357．1CX系列化合物的氧化还原性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．357．2CX系列化合物与IDO结合作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯358．CX系列化合物体外抗肿痛转移的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36实验讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．

4、37结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．49万方数据摘要吲哚胺2，3．双加氧酶(Indoleamine2，3-Dioxygenase，IDO)是色氨酸沿犬尿氨酸代谢途径(kynureninepahway，KP)的限速酶，催化色氨酸代

5、谢产生L-犬尿氢酸，喹啉酸等具有细胞毒性的代谢产物。IDO已经成为治疗人类多种重大疾病的重要靶点，如肿瘤、神经系统疾病以及其他⋯些具有色氨酸代谢异常病理特征的疾病。研发IDO抑制剂作为相关治疗药物具有重要的现实意义，但目前只有少数的IDO抑制剂被发现。本研究发现天然化合物色胺酮在体外酶活水平具有显著的IDO抑制活性。经结构修饰合成了17个色胺酮类TQ系列化合物，通过筛选和酶动力学常数测定，发现13个色胺酮类TQ系列化合物均具有较高IDO抑制活性，其抑制效果远远优于目前体内外实验中普遍使用的IDO抑制剂1-甲基色氨酸

6、(1-MT)，并且对细胞内的IDO同样具有抑制效果。其中2个化合物的Ki值和IC50值已达到纳摩尔级别。在混合淋巴细胞反应体系中，TQ系列化合物能够明显促进T细胞的增殖。采用LLC(LewisLungCancer)荷瘤小鼠模型，发现TQ．009和TQ．004能够显著抑制肿瘤生长，并且降低小鼠麻清中IDO的活性。本实验室在以前的工作中发现色胺酮类CX系列化合物是优良的IDO抑制剂，并且抑制LLC荷瘤小鼠体内肿瘤的生长。作为盼前工作的延续，我们分别采用DPPH(diphenylpicrylhydrazyl)实验和表面等

7、离子体共振分析(SPR)实验，研究了色胺酮类CX系列化合物的氧化还原性以及与IDO的相互作用。发现CX．47不具有氧化还原性，不是通过氧化IDO而起到抑制IDO的作用，而是直接与IDO分子相互结合，平衡解离常数(KD)为46．8灶M。此外，我们还发现CX系列化合物具有体外抗肿瘤转移的作用。以上结果显示，新型色胺酮类化合物(TQ系列和CX系列)作为新型高效的小分子IDO抑制剂具有成为肿瘤治疗药物的潜能。关键词：IDO；IDO抑制剂；色胺酮类TQ系列化合物；色胺酮CX系列化合物：抗肿瘤作用万方数据AbstractInd

8、oleamine2,3一dioxygenase(n30)isthefirstandrate—limitingenzymeinthekynureninepathwayoftryptophancatabolismultimatelyleadstotheproductionoftheL-kynurenineandquinolinicacid(QUIN)．IDOis