辣椒素对水浸—束缚应激大鼠胃动力的作用及机制研究

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目录1辣椒素对水浸一束缚应激大鼠胃动力的影响及机制研1．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯391．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯461．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯471．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯552致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯563Caja1间质细胞与胃肠动力关系的研究进展(综述)⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯·57 泸州医学院硕士学位论文辣椒素对水浸一束缚应激大鼠胃动力的作用及机制研究搬～幽㈣目的：通过研究辣椒素(capsaicin，CAP)对水浸．束缚应激(waterimmersion．restraintstress，WIRS)大鼠胃酚红排空率的影响，检测血浆胃动素(motilin，MTL)水平，胃窦组织辣椒素受体(transientreceptorpotentialvanilloidsubtype1，TRPVl)、P物质(substanceP，SP)及酪氨酸激酶受体(c．kit)的表达，胃窦组织c．kitmRNA及干细胞生长因子(stemcellfactor，SCF)mRNA的转录水平，探讨CAP对大鼠胃动力的作用及机制。方法：(1)自制CAP饲料：精确称取95％的CAP105．3mg(含CAP100mg)，完全溶解于30ml的食用油中，再加入食用面粉1009，混匀，所得即为CAP含量为lmg／g的饲料。(2)WIRS大鼠模型的建立：SD大鼠20只，随机分为正常组与模型组。模型组每日WIRS1小时，连续4周，正常组自由进食，连续4周。(3)CAP干预实验动物分组：SD大鼠40只，随机分为4组：A组(正常对照组)，B组(WIRS组)，C组(WIRS+CAP组)，D组(CAP组)。(4)具体方法：A组自由摄食进水，连续4周；B组每日WIRSl小时后自由摄食进水，连续4周；C组每日WIRS1小时后喂食CAP饲料(CAP含量为lmg／g)59／埏／只，待CAP饲料食用完后，再给予普通饲料喂养，连续4周；D组每日喂食CAP饲料(CAP含量为lmg／g)59／k／只，待CAP饲料食用完后，再给予普通饲料喂养，连续4周；4周后所有大鼠禁食24小时，于次日早晨给予浓度为50mg／dL的酚红溶液灌胃，2ml／鼠，灌胃30min后麻醉处死大鼠。(5)检测指标：①收集胃内容物，测定胃酚红排空 泸州医学院硕士学位论文率。②腹主动脉取血2ml，4。C离心后提取上清液，用Elisa法检测血浆MTL水平。③肉眼观察大鼠胃粘膜损伤指数并进行病理组织学检查。④取胃窦组织包埋、切片后用免疫组化方法检测TRPVl、SP及c．kit的表达。⑤取胃窦组织用RT-PCR方法检测c．kitmRNA、SCFmRNA的转录水平。结果：1．模型验证：(1)动物一般情况：实验过程中，正常组大鼠一般状态好，活动灵活，进食正常，大小便正常，无死亡；模型组大鼠精神状态差，行动迟缓，进食较少，大便干结，但无死亡。(2)大鼠胃酚红排空率：正常组、WIRS模型组大鼠胃酚红排空率分别为：61．76％±1．22％，53．07％+--2．19％，WIRS模型组胃酚红排空率显著低于正常组(PO．05)。(3)大鼠血浆MTL水平：A组190．30+-1．68pg／ml，B组179．75±1．72pg／ml，C组200．06+-2．06pg／ml，D组201．37+-1．45pg／ml，其中B组血浆MTL水平低于A组、C组及D组(PO．05)。(4)免疫组化方法检测结果：①大鼠胃窦组织TRPVl表达积分结果：A组2．30+-0．48分，B组2．20+-0．422 泸州医学院硕士学位论文分，C组3．30±O．48分，D组3．604-0．52分，其中A组TRPVl表达水平显著低于C组、D组(PO．05)，C组TRPVl表达水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。②大鼠胃窦组织SP表达积分结果：A组为2．004-0．47分，B组为1．204-0．42分，C组为3．204-0．63分，D组为3．504-0．53分，其中B组SP表达水平显著低于A组、C组及D组(PO．05o③大鼠胃窦组织c．kt表达积分结果：A组1．304-0．48分，B组O．80+0．42分，C组1．504-0．53分，D组1．704-0．48分，其中B组c-kit表达水平显著低于A组、D组(PO．05)，B组c．kit表达水平与C组差异无统计学意义(P>O．05)，C组c．ht表达水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。(5)RT-PCR方法检测结果：①大鼠胃窦组织c．kitmRNA表达量结果：A组为0．6244-0．016分，B组为0．6064-0．011分，C组为0．6224-0．011分，D组为0．6334-0．013分，其中B组c．kitmRNA转录水平显著低于A组、D组(PO．05)，B组c．kitmRNA转录水平与C组差异无统计学意义(P>O．05)，C组c．kitmRNA转录水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。②大鼠胃窦组织SCFmRNA表达量结果：A组为O．8944-0．011分，B组为0．8534-0．009分，C组为0．9324-0．009分，D组为0．9494-0．012分，其中B组SCFmRNA转录水平显著低于A组、C组及D组(PO．05)。(6)胃粘膜损伤指数及病理组织学检查结果：①胃粘膜损伤评分(Guth标准改良评分)：A组O．40±0．52分，B组2．90±0．74分，C组1．40±0．52分，D组O．50+0．53分，其中B组胃粘膜损伤评分显著高于A组、C组及D组(PO．05)②胃粘膜病理组织损伤积分(Masuda标准方法)：A组0．304-0．48分，B组3．704-1．89分，C组1．604-0．70分，D组0．404-0．52分，其中B组病理组织损伤积分显著高于A组、C组及D组(PO．05)。结论：(1)WIRS能成功建立胃动力障碍动物模型。(2)正常大鼠摄食小剂量CAP饲料4周可促进胃动力。(3)WIRS大鼠摄食小剂量CAP饲料4周可改善胃动力。(4)CAP影响正常及WIRS大鼠的胃动力可能与CAP调节TRPVl、SP的表达及MTL的释放有关。(5)CAP可能对SCF的表达有一定影响，但与c．1dt、Cajal间质细胞的相关性尚不明确。关键词：辣椒素；胃动力；Cajal间质细胞；c．kit；SCF；TRPVl；SP。4 泸州医学院硕士学位论文EffectsandmechanismofcapsaicinongastricmotilityinwaterimmersionrestraintstressratsAbstract0bjective：Toinvestigatetheeffectsandmechanismofcapsaicinongastricmotilityinwaterimmersionrestraintstress(WIRS)ratsthroughtestingtherateofgastricemptyingandtheplasmamotilinlevel，detectingtheexpressionoftransientreceptorpotentialtype1，substancePandc一妯tingastricantrum，testingthetranscriptionallevelofc-kitmRNAandSCFmRNAingastricantrumtissue．Methods：(1)ThepreparationofCAPfeed：The95％CAP105．3mg(includingCAP100mg)wasdissolvedinedibleoil(30m1)．Themixturewasblendedwithflour1009，thentheCAPfeedwaspreparedwell．(2)TheestablishmentofWIRSratmodel：TwentySDratswererandomlydividedintocontrolgroupandmodelgroup．Ratsinmodelgroupwereproceedwithwaterimmersionrestraintstressonehouradayfor4consecutiveweeks．Ratsincontrolgroupwerenotimposedstress．(3)TheexperimentalanimalgroupingofCAPintervention：FortySDratswererandomlydividedinto4groups：GroupA(thenormalcontrolgroup)，GroupB(theWIRSgroup)，GroupC(theWIRS+CAPgroup)，GroupD(theCAPgroup)．(4)Thespecificmethod：RatsinGroupAwerefreelyaccessedtofoodandwaterfor4consecutiveweeks．RatsinGroupBwerefreelyaccessedtofoodandwaterafterthestressfor4consecutiveweeks．RatsinGroupCwerefedthecapsaicinfeed(capsaicincontetwaslmg／g)59／kgafterthestress．Aftereatingthecapsaicinfeed，theywereatethenormalfeedfor4weeks．RatsinGroupDwerefedthecapsaicinfeed(capsaicincontetwas1mg／d)59／kg．Aftereatingthecapsaicin5 泸州医学院硕士学位论文feed，theywereatethenormalfeedfor4weeks．After4weeks，alltheratswerefastedfor24hours，andthenlavagedthemwithphenolredsolution(phenolredconcentrationwas50mg／dL)inthemorningofthesecondday．Alltheratswerekilled30minuteslater．(5)Detectionindex：@Thegastriccontentswerecollectedfortestingthegastricemptyingrateofphenolred．@Collect2mlbloodsamplefromtheabdominalaorta，aftercentrifugationat40C，thesupematantwasextractedandthentheplasmaMTLwasdetectedbyElisamethod．@Observethegastricmucosainjuryindexandusethegastricmucosaforpathologicalexamination．@UsethegastricantrumtissuefortestingtheexpressionofTRPV1，SPandc．kitbyimmunohistochemicalmethod．@Usethegastricantrumtissuefortestingthetranscriptionallevelofc-kitmRNA，SCFmRNAbyRT-PCRmethod．Results：1．Themodelvalidation：(1)Generalstatesoftherats：Ratsincontrolgroupwereingoodstateofmind，aflexibleaction，agoodappetite，andtheurinewasnormalduringtheexperiment．Ratsinmodelgroupwereinbadstateofmind，aslowlyaction，apoorappetiteandhadadryst001．(2)Thegastricemptyingrateofphenolredincontrolgroupandmodelgroupwere：61．76％士1．22％and53．07％士2．19％，Thegastricemptyingrateinmodelgroupwassignifican--tlylowerthancontrolgroup(p<0．05)．2．TheresultsofCAPintervention：(1)Generalstatesoftherats：Therewasnodeathduringtheexperiment．RatsinGroupAwereingoodstateofmind，aflexibleaction，agoodappetiteandtheurinewasnormal．RatsinGroupBwereinbadstateofmind，aslowlyaction，apoorappetiteandhadadryst001．RatsinGroupCwereingoodspirits，abit6 泸州医学院硕士学位论文slowlyaction，agoodappetiteandtheurinewasnormal．RatsinGroupDwereingoodstateofmind，aflexibleaction，agoodappetiteandtheurinewasnormal．(2)ThegastricemptyingrateofphenolredinGroupA，B，C，Dwere’62．910／硅1．10％，55．330／硅1．79％，61．880／硅2．07％，70．78％+2．42％．ThegastricemptyingrateinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，C，D(p<0．05)，thegastricemptyingrateinGroupAwasSignificantlylowerthanGroupD(p<0．09，thegastricemptyingratebetweeGroupAandGroupChadnosignificantdifferences(p>0．05)．(3)TheplasmaMTLresultsinGroupA，B，C，Dwere：190．30土1．68pg／ml，179．75+1．72pg／ml，200．06士2．06pg／ml，201．37士1．45pg／m1．TheplasmaMTLinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，C，D(pO．05)．(4)Immunohistochemistrydetectionresults：@TheexpressionintegralofTRPVlinGroupA，B，C，Dwere：2．30士0．48，2．20士0．42，3．30士0．48，3．60士0．52．TheexpressionofTRPVlinGroupAwasSignificantlylowerthanGroupC，D(p0．05)，theexpressionofTRPV1betweeGroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．②TheexpressionintegralofSPinGroupA，B，C，Dwere：2．00士0．47，1．20士0．42，3．20士0．63，3．50士0．53．TheexpressionofSPinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，C，D(p<0．09，theexpressionofSPinGroupA7 泸州医学院硕士学位论文wasSignificantlylowerthanGroupC，D(p<0．05)，theexpressionofSPbetweeGroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>O．05)．@Theexpressionintegralofc—kitinGroupA，B，C，Dwere：1．30士0．48，0．80士0．42，1．50士0．53，1．70士O．48．Theexpressionofc—kitinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，D(pO．05)，theexpressionofc—kitbetweeGroupBandGroupChadnosignificantdifferences(p>O．05)，theexpressionofc-kitbetweeGroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．(5)ResultsofRT-PCRmethod：@Theexpressionofc．kitmRNAinGroupA，B，C，Dwere：0．624+0．016，O．606士0．011，0．622士0．011，0．633士0．013．Theexpressionofc-kitmRNAinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，D(p<0．05)．Theexpressionofc-kitmRNAamongGroupA，GroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>O．05)．Theexpressionofc-kitmRNAbetweeGroupBandGroupChadnosignificantdifferences(p>O．05)．Theexpressionofc-kitmRNAbetweeGroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．②TheexpressionofSCFmRNAinGroupA，B，C，Dwere：0．894士0．011，O．853土0．009，0．932士0．009，0．949土0．012．TheexpressionofSCFmRNAinGroupBwasSignificantlylowerthanGroupA，C，D(p<0．05)，theexpressionofSCFmRNAinGroupAwasSignificantlylowerthanGroupC，D(p<0．05)，theexpressionofSCFmRNAbetweeGroupCandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．(6)Thegastricmucosainjuryindexandhistopathologicalexaminationresults：@Thegastricmucosainjuryscore(Guthstandardmodified8 泸州医学院硕士学位论文score)inGroupA，B，C，Dwere：0．40士0．52，2．90士0．74，1．40士0．52，0．50士0．53．ThegastricmucosainjuryscoreinGroupBwasSignificantlyhigherthanGroupA，C，D(p<0．05)，thegastricmucosainjuryscoreinGroupCwasSignificantlyhigherthanGroupA，D(p<0．05)，thegastricmucosainjuryscorebetweeGroupAandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．@Thegastricmucosalhistopathologicaldamageintegral(Masudastandardmethod)inGroupA，B，C，Dwere：0．30士0．48，3．70a：1．89，1．60士0．70，0．40-士0．52．Thegastricmucosalhistopathol--ogicaldamageintegralinGroupBwasSignificantlyhigherthanGroupA，C，D(p<0．05)，thegastricmucosalhistopathologicaldamageintegralinGroupCwasSignificantlyhigherthanGroupA，D(p<0．05)，thegastricmucosalhistopathologicaldamageintegralbetweeGroupAandGroupDhadnosignificantdifferences(p>0．05)．Conclusion：(1)WIRSmethodcouldestablishananimalmodelofgastricmotilitydisorder．(2)TheCAPfeedfor4weekscouldimprovethegastricemptyingrateinWIRSrats．(3)TheCAPfeedfor4weekscouldimprovethegastricemptyingrateinnormalrats．(4)ThemechanismofCAPactongastricmotilitymayviaregulatetheexpressionofTRPV1，SPandthereleaseofMTL．(5)cAPmayhaveaneffectontheexpressionofSCF,andhavenoobviousrelationshipwithinterstitialcellsofCajalandc·kit．KeyWords：capsaicin；gastricmotility；interstitialcellsofCajal；c—kit；SCF；TRPVl；SE9 泸州医学院硕士学位论文前言随着社会的快速发展，工作与生活压力的不断增加，胃肠动力障碍性疾病(disordersofgastrointestinalmotility，DGIM)的发病率逐年上升，目前已成为消化系统中发病率最高，同时也是最缺少治疗手段的疾病之一。胃肠动力障碍性疾病，如胃食管反流病(gastroesophagealrefluxdisease，GERD)、功能性消化不良(functionaldyspepsia，FD)、肠易激综合征(irritablebowelsyndrome，IBS)、糖尿病胃轻瘫(diabeticgastroparesis，DGP)等，已成为影响人类健康的常见病、多发病，既影响了患者的生活质量，又造成了相当高的医疗费用支出，目前已成为当代社会中一个重要的医疗问题‘11。辣椒素(capsaicin，CAP)是红辣椒中的主要活性成分，其化学名称为反8．甲基．N．香草基．6．壬烯基酰胺，它能通过刺激TRPVl通道，激活无髓鞘或薄的有髓神经纤维的初级神经元(辣椒素敏感传入神经元，CSANs)释放多种神经递质，进而产生多种生物学作用。过去有关CAP的研究主要集中在疼痛与镇痛方面，许多学者已将CAP作为研究疼痛的工具药【21。近年来越来越多的研究发现CAP对消化功能有重要影响，其中CAP对胃肠动力的作用已引学者重视。大量研究显示适量的CAP对胃肠动力具有促进作用。Holzer等【3】报道在体外实验中，0．0015mg／kg的CAP可引起大鼠胃体平滑肌的收缩。Debreceni等报道健康人0．4mg的CAP一次口服后，胃排空时间明显降低。Matsumoto等f5】报道CAP可引起大鼠结肠的瞬时和持久收缩；其中CAP刺激神经末梢释放的SP和神经激肽A激活副交感神经神经节上的神经激肽1(NKl)和神经激肽2(NK2)受体，引起胆碱能神经末梢释放乙酰胆碱，引起瞬时收缩；神经激肽A从外在感觉神经末梢释放，激活平滑肌细胞上10 泸州医学院硕士学位论文的NK2受体，则引起持久收缩。CAP对胃肠动力的作用机制目前尚不清楚。胃肠运动主要受神经系统与体液因素两方面因素的调节。近年来Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal，Icc)在胃肠运动方面的作用受到重视，ICC可维持胃肠平滑肌节律性运动，并有产生和传导慢波电位、调节神经递质等功能‘6，71。lcc与肠神经系统(entericnervoussystem，ENS)、胃肠平滑肌细胞组成的网络是胃肠运动的基本功能单位，对胃肠道的运动功能起决定性作用【8l。酪氨酸激酶受体(c．kit)是ICC表面表达的特异性蛋白，c．“t与其自然配体．干细胞生长因子(stemcellfactor，SCF)结合后启动的信号途径对维持ICC调节胃肠运动的功能起重要作用19]。在体液因素调节胃肠运动方面，胃泌素(GAS)、MTL、胆囊收缩素、神经降压素(NT)等以内分泌的形式为主要作用方式，而P物质、CGRP、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、降钙素(LT)、脑啡肽(ENK)等以胃肠肽的形式为主要作用方式。Holzer等【1叫报道CAP能刺激胃肠道的TRPVl通道，引起辣椒素敏感传入神经元释放神经递质如SP、胆囊收缩素、神经激肽A、降钙素基因相关肽(CGRP)、血管活性肠肽(VIP)和兴奋性氨基酸等。CAP药理作用特殊，CAP对胃肠动力的具体作用及作用机制是目前迫切需要研究的问题。本实验通过研究CAP对水浸．束缚应激(waterimmersion．restraintstress，WIRS)大鼠胃酚红排空率的影响，检测血浆胃动素(motilin，MTL)水平、胃窦组织辣椒素受体(transientreceptorpotentialtype1，TI冲V1)、P物质(substanceP，SP)及酪氨酸激酶受体(c．kit)的表达，胃窦组织c．kitmRNA及干细胞生长因子(stemcellfactor，SCF)mRNA的转录水平，探讨CAP对大鼠胃动力的作用及可能机制。 泸州医学院硕士学位论文材料与方法1．实验材料及仪器1．1实验动物SD大鼠60只，体重180—2509(泸州医学院动物实验中心提供)，用代谢笼饲养。2．主要实验试剂95％的辣椒素(河南倍特生物技术有限公司)戊巴比妥钠(泸州医学院动物实验中心提供)酚红(国药集团化学试剂有限公司)氢氧化钠(上海试剂厂)三氯乙酸(国药集团化学试剂有限公司)4％多聚甲醛(泸州医学院附属医院病理科提供)兔抗大鼠n心V1多克隆抗体(BioworldTechnology公司)兔抗大鼠SP多克隆抗体(BioworldTechnology公司)兔抗大鼠c—ldt多克隆抗体(BioworldTechnology公司)二步法免疫组化检测试剂(PV-6001)(北京中杉金桥生物技术有限公司)DAB显色剂(北京中杉金桥生物技术有限公司)总RNA提取试剂盒(Trizol试剂盒)(北京TIANGEN)RT．PCR试剂盒(成都博瑞克生物技术有限公司)DNAMaker(北京TIANGE)琼脂糖法国(B10WEST公司)3．主要实验仪器12 泸州医学院硕士学位论文低温高速离心机(美国Thermo公司)石蜡切片机(LELCA．RM2135，德国莱卡)恒温推片烤片机(湖北孝感市泰维电子设备有限公司)显微照相机(日本O删PUs)恒温水浴箱(余姚市东方电工仪器厂)紫外分光光度仪(SHIMADZU公司)电子分析天平(Mettler公司)．70。C超低温冰箱(美国Thermo公司)水平电泳仪(美国Bio．Rad公司)PCR扩增仪(杭州博日公司)凝胶成像系统(美国Bio．Rad公司)全波长分光光度计(美国Thermo公司)微量移液器(德国Eppendorf公司)4．实验方法4．1CAP饲料的配制方法精确称取95％的CAP105．3mg(含CAP100mg)，完全溶解于30ml的食用油(金龙鱼)中，再加入食用面粉1009，混匀，所得即为CAP含量lmg／g的饲料。4．2造模及模型验证SD大鼠20只，体重1809--2509，随机分为2组，即正常组(ZC组)10只，模型组(MX组)10只。采用水浸．束缚应激(waterimmersion．restraintstress，WIRS)造模。13 泸州医学院硕士学位论文4．2．1造模方法WIRS模型组每日上午进行造模：将大鼠四肢束缚固定于鼠板上，然后将鼠板垂直浸入(19±1)℃水中，水面平胸骨剑突，持续1小时(见图1)。造模结束后大鼠自由摄食进水，连续4周。正常组自由摄食进水，连续4周。4周后所有大鼠禁食24小时，于次日早晨给予浓度为50mg／dL的酚红溶液灌胃，2ml／鼠。灌入酚红溶液30min后处死大鼠，将责门与幽门结扎，取出鼠胃。图1水浸-束缚应激造模Figure1Waterimmersion—restraintstress4．2．2模型验证(大鼠胃酚红排空率的测定)：(1)用剪刀沿鼠胃大弯侧剪开，用蒸馏水将胃内容物冲洗到器皿中，定容为20ml。(2)加入20ml浓度为O．5mol／L的NaOH搅拌混匀，静置1h。(3)取5ml上清液，加入0．5ml浓度为20％的三氯乙酸去蛋白，以3500r／min(离心半径为0．1m)离心10min。(4)取上清液，用分光光度计测在560nm波长下待测液的吸光度值，为实测酚红吸光度。14 泸州医学院硕士学位论文(5)另取2ml酚红溶液，先后加入18ml蒸馏水、20ml浓度为0．5mol／L的NaOH、4ml浓度为20％的三氯乙酸搅拌混匀，用分光光度计测在560nm波长下测标准液的吸光度值，为标准酚红吸光度。大鼠的胃酚红排空率=(1一实测酚红吸光度／标准酚红吸光度)×100％。4．3CAP的干预实验SD大鼠40只，体重18091509，用代谢笼饲养，温度(24±1)℃，通风良好，随机分为4组，每组lO只。即：A组：正常对照组，自由摄食进水，连续4周；B组：WIRS模型组，每日WIRSl小时，WIRS结束后自由摄食进水，连续4周；C组：WIRS模型+CAP干预组，每日WIRSl小时，WIRS结束后喂食CAP饲料(CAP含量为ling／g)59／蚝／只，待CAP饲料食用完后，再给予普通饲料喂养，连续4周；D组：CAP干预组，每日喂食CAP饲料(CAP含量为lmg／g)59／kg／只，待CAP饲料食用完后，再给予普通饲料喂养，连续4周。4．4标本采集4周后所有大鼠禁食24小时，于次日早晨给予浓度为50mg／dL的酚红溶液灌胃，2ml／鼠。灌入酚红溶液30min后处死大鼠。具体操作步骤如下：(1)各组大鼠予3％的戊巴比妥钠腹腔注射(1ml／kg)。(2)待大鼠麻醉成功后，将其固定于无菌手术台上，暴露内脏，腹主动脉取血2ml，血标本用Elisa法检测血浆MTL。 泸州医学院硕士学位论文(3)将贲门与幽门结扎，取出鼠胃，用剪刀沿胃大弯侧剪开，用蒸馏水将胃内容物冲洗到器皿中，定容为20ml，用于测定酚红排空率。(4)观察大鼠胃粘膜损伤程度。(5)取胃窦组织，包埋、切片，进行HE染色和免疫组化检测TRPVl、c．kit及sP的表达。(6)另一部分胃窦组织存于．70。C超低温冰箱，用RT-PCR方法检测c．kitmRNA及SCFmRNA的转录水平。4．5检测指标和方法4．5．1大鼠胃酚红排空率的测定：同4．2．2。4．5．2ELISA法测定血浆MTL含量4．5．2．1样本处理腹主动脉取血2ml注入玻璃试管中(EDTA)，上下颠倒混匀，3000rpm离心10min，吸取上层血浆标本于EP管中，．20℃储存。4．5．2．2双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆MTL水平主要实验步骤如下：ELISA试剂盒从4。C冰箱取出后需在室温平衡至少30分钟，临用前15min再配制工作液。(1)建立标准曲线：共设置6个标准孔，每个标准规孔均加入O．1ml样品稀释液。于第一孔加入O．1ml标准品，混匀后用加样器吸出O．1ml移至第二孔，在第二孔混匀后，仍然用加样器吸出O．1ml加入第三孔。用以上同样的方法，反复作倍比稀释直至第五孔，最后将第五孔中吸出O．1ml弃去，使之剩余0．1ml，并将第六孔设定为空白对照孔；16 泸州医学院硕士学位论文(2)加样：加入O．1ml待测血清于对应的反应板孔中；(3)封板膜盖上，将反应板振荡混匀后，于37℃温育60分钟；(4)洗板：将封板膜揭开后，弃去液体，滤纸上拍干，每孔加350ul洗涤液，静置30秒后弃去，且于吸水纸上拍干)；反复上述洗涤5次；(5)每孔加入O．1ml1×生物素(Biotin)。混匀30秒，封住板孔，370C温育60min；(6)洗板：同(4)；(7)每孔加入O．1ml1×辣根过氧化物酶的(Ⅷ冲)．轻轻混匀30秒，封板膜封住板孔，370C温育30min；(8)洗板：同(4)；(9)显色：每孔先后加入底物工作液A、B各50l-tl，轻轻振荡混匀10Sec，置于370C暗处避光显色10min；(10)每孔加入100ul终止液，轻轻混匀30秒，终止反应；(11)30min内，以空白孔调零，用酶标仪在450nm波长处，依序测量各孔的吸光值(OD值)；(12)根据标准品的浓度，以及其对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。4．5．3肉眼观察胃粘膜损伤指数并行胃粘膜病理学检查4．5．3．1胃粘膜损伤指数的检查及判定标准剪开大鼠胃大弯，按照Guth改良评分标准【111评定胃粘膜损伤情况：0分：粘膜正常；1分：粘膜损伤长度2．2表明RNA己被水解。4．5．5．3逆转录合成eDNA逆转录前每个标本的RNA用RnasefreeH20配成相同浓度，按RT试剂盒(20lal体系)说明在PCR管中配反应液：将装有上一步骤的混合液的PCR管放入PCR仪中，设置以下参数：反应体系组成体积无RNA酶H205×RTBufferdNTPmixturSuper-RIRT．EnhancerOligo(dT)18RNA模板ReverTraAce30℃，10min_◆4℃，20min斗99℃，5min_◆4℃，5min22mⅥⅥ轧札mⅥⅥ州¨训脚脚M叫M，L，I 泸州医学院硕士学位论文上述步骤反应完毕即得到cDNA。4．5．5．4PCR得到目的基因按照下表比例在PCR管中混合相应的溶剂，移液器充分混匀：PCR反应体系组成体积cDNA模板无RNA酶H2010umol／L上游引物10umol／L下游引物2xTaqPCRMasterMix29l6pllgl101xl合计20txl将装有上一步骤的混合液的PCR管放入PCR仪中，进行PCR反应，设置反应条件如下：94oC94oC退火温度72℃注：木GAPDH、c．kit、SCF退火温度分别为57．3"C、56．2℃、53．0℃Note：TheannealingtemperatureofGAPDH，c·kitandSCFare57。3"C，56．2Vand53．．0*Crespectively4．5．5．5PCR产物琼脂糖电泳检测将1．5％琼脂糖凝胶置于电泳槽中，加入配制好的1XTBE电泳工作液。取每一样本反应产物各5ul加入上样孔内，并在靠边的上样孔内加入DNAMarker。盖上电泳槽，接通电泳仪，以电压110V稳压电泳40rain左右停止电泳。将电泳后的琼脂糖凝胶置于紫外凝胶成像系统成相，分析并保存实验结果。4．5．5．6结果分析，3环循个02J、●●●kr●jn．US．U．肌佻呕．肌 泸州医学院硕士学位论文电泳后紫外凝胶成像的结果用QuantityOne软件测定条带灰度值，用c．kit、SCF分别与GAPDH条带灰度值的比值作为rnRNA的相对表达量，分析各组相对表达量之间是否具有统计学意义。5．统计学处理采用SPSSl3．0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差(又±S)表示，对各组数据先进行独立性、正态分布和方差齐性检测，若符合方差分析的应用条件则采用单因素方差分析，各组间两两比较采用LSD法，否则采用非参数统计分析方法。检验水准Q=O．05，P<0．05表示差异有统计学意义。24 泸州医学院硕士学位论文结果模型验证1．动物一般情况实验过程中：正常组(ZC组)：大鼠一般状态好，活动灵活，进食正常，大小便正常，无死亡；模型组(MX组)：大鼠精神状态差，行动迟缓，进食较少，大便干结，但无死亡。(见图2)图2两组大鼠的一般情况A：正常组大鼠精神状态好；B：模型组大鼠精神状态较差。Figure2GeneralstatesoftheratsA：Ratsinnormalcontrolgroupwereingoodstateofmind；B：Ratsinmodelgroupwereinbadstateofmind．2．大鼠胃酚红排空率正常组、WIRS模型组大鼠胃酚红排空率分别为：61．76％±1．22％，53．07％±2．19％，WIRS模型组胃酚红排空率显著低于正常组(PO．05)。(见表2和图4)26一零一o_再Lac一^_APcooIJ-啊母。 泸州医学院硕士学位论文表2各组大鼠胃酚红排空率(X一±S)Table2：Thechangeofthelevelsofgastricphenolredemptyiginratsabouteachgroup注：宰与A组比较P<0．05；#与B组比较P<0．05；＆与C组比较P<0．05。Note：木Compared、ⅣitllAgroupP<0．05；#ComparedwithBgroupP<0．05；＆ComparedwithCgroupP<0．05．圜A组囝B组目C组皿D组图4各组大鼠胃酚红排空率的直方图Figure4Thehistogramofthelevelsofgastricphenolredemptyiginratsabouteachgroup3．血浆UTI_水平各组大鼠血浆MTL水平分别为：A组190．30±1．68pg／ml，B组179．75±1．72pg／ml，C组200．06+2．06pg／ml，D组201．37+1．45pg／ml。NF日-J比较采用单因素方差分析LSD法，结果显示B组血浆MTL水平低于A组、C组及D组(PO．05)。(见表3)27一零一3母LauI》苞暑o3I．1苗俺。 泸州医学院硕士学位论文表3各组大鼠血浆MTL水平(j±S)Table3：ThechangeofthelevelsofplasmaMTLinratsabouteachgroup注：宰与A组比较P<0．05；#与B组比较P<0．05。Note．幸ComparedwithAgroupP<0．05；舞ComparedwithBgroupP<0．05．4眉窦组织TRPVl、SP及c-k．t的表达情况TRPVl、SP免疫阳性产物在大鼠胃窦组织粘膜层及粘膜下层均有表达，阳性产物呈棕黄色或淡黄色，染色明显高于背景；c．虹t免疫阳性产物主要位于大鼠胃窦组织肌间神经丛附近，阳性产物呈棕黄色或淡黄色，染色高于背旦尿O4．1TRPVl在胃窦组织的表达TRPVl在大鼠胃窦组织表达水平分别为：A组2．30+0．48分，B组2．20±O．42分，C组3．30±O．48分，D组3．60+_0．52分。其中A组TRPVl表达水平显著低于C组、D组(P0．05)C组TI冲V1表达水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。(见表4和图5)4．2胃窦组织SP的表达大鼠胃窦组织SP表达水平分别为：A组2．00+_0．47分，B组1．20+_O．42分，C组3．20_+0．63分，D组3．50+-0．53分。其中B组SP表达水平显著低于A28 A．1粼钨蘧爹泸州医学院硕士学位论文≯；参菇鬻一’图5各组大鼠胃窦组织TRPVl的表达銎◆(×200，×400)：A．1，A．2：A组；B一1，B．2：WIRS组：C一1，C．2：WIRS+CAP组；D．1，D．2：CAP组。Figure5TheexpressionofTRPVlinthegastricantlqlmtissueofrats(x200，x400)．A．1，A．2：Thecontrolgroup；B-1，B一2：TheWIRSgroup；C一1，C-2：TheWIRS+CAPgroup；D-1．D-2：TheCAPgroup．29 泸州医学院硕士学位论文B．1‘＼．图6：羹鬻磐毒?鍪l懑：B．2手奠·．‘∥／jt，47●磐；势●．~‘y’’≯：：多I‘j簟￡囊≥{一．一：。口，，‘．≯各组大鼠胃窦组织SP的表达(×200，×400)：A．1，A．2：A组：B．1，B．2：WIRS组；C．1，C．2：WlRS+CAP组；D．1，D．2：CAP组。Figure6TheexpressionofSPinthecantrumtissueofrats(x200，x400)．A一1，A．2：Thecontrolgroup；B-1，B一2：TheWIRSgroup；C-1，C-2：TheWIRS+CAPgroup；D．1，D．2：TheCAPgroup．30，，“．，．，，．．j．句．II 泸州医学院硕士学位论文A．1B．1C．1‘＼．D．1＼．一?jA-2●-．．，●一一／，一。B．2C-2、．D乏．～＼“·南I、、～-、}二¨●’m丘图7各组大鼠胃窦区组织内c-kit的表达(×200，x400)：A．1，A．2：A组；B．1，B．2：WIRS组；C．1，C．2：WIRS+CAP组；D．1，D．2：CAP组。Figure7Theexpressionofc-kitinthegastricantrumtissueofrats(×200．x400)．A-1，A-2：Thecontrolgroup；B一1，B-2：TheWIRSgroup；C-1，C-2：TheWlRS+CAPgroup；D-1．D-2：TheCAPgroup． 泸州医学院硕士学位论文组、C组及D组(PO．05)。(见表4和图6)4．3胃窦组织c．kit的表达大鼠胃窦组织c．kit表达水平分别为：A组1．30±0．48分，B组0．80+_0．42分，C组1．50±0．53分，D组1．70±0．48分。其中B组c．kit表达水平显著低于A组、C组及D组(PO．05)，A组c-kit表达水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)，C组c．kit表达水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。(见表4和图7)表4：TRPVl、SP及c-kit在各组大鼠胃窦区组织内表达的评分Table41TheexpressionsofTRPV1,SPandc-kitineachrat'santral组别动物数(只)TRPVlSPc．kit注：·与A组比较PO．05)，B32 泸州医学院硕士学位论文组c．kitmRNA转录水平与C组差异无统计学意义(P>O．05)，C组c．kitmRNA转录水平与D组差异无统计学意义(P>O．05)。(见表5和图8．1，图8．2)表5RT．PCR检测各组c．kitmRNA的表达(膏±S)———————Table5Theexpressionofc-kitmRNAineachgroupdetectedbyRT—-—P——C———R——————(——X————+———S——)—组别动物数(只)c．kitNote：幸ComparedwithAgroupP<0．05；#ComparedwithBgroupP<0．05．A图8-1Fig8-1BCDc-kit276bpGAPDH450bpRT．PCR检测各组c．kitmRNA的表达Theexpressionofc-kitmRNAineachgroupdetectedbyRT—PCR田A组圜B组目C组皿D组图8-2RT．PCR检测各组c．kitmRNA的表达Fi98—2Theexpressionofc-kitmRNAineachgroupdetectedbyRT．PCR33《ZⅣ-E甚卫．O：IOcO一协协o．Ia×Do￡卜 泸州医学院硕士学位论文5．2大鼠胃窦组织SCFmRNA的表达RT-PCR结果显示：大鼠胃窦组织SCFmRNA表达水平分别为：A组为O．894+_0．011分，B组为O．853±O．009分，C组为0．932___0．009分，D组为O．949___0．012分。其中B组SCFmRNA转录水平显著低于A组、C组及D组(PO．05)。(见表6和图9．1，图9．2)表6RT．PCR检测各组SCFmRNA的表达(j±S)．．．．．．——Table6TheexpressionofSCFmRNAineachgroupdetectedbyRT-PCR(X+S)．组别动物数(只)SCF注：宰与A组比较P<0．05；#与B组比较P<0．05。Note：木ComparedwithAgroupP<0．05；#ComparedwithBgroupP<0．05．ABCDSCF179bpGAPDH450bp图9-1RT．PCR检测各组SCFmRNA的表达Fig9-1TheexpressionofSCFmRNAineachgroupdetectedbyRT-PCR34 泸州医学院硕士学位论文田A组囝B组目C组皿D组图9-2RT-PCR检测各组SCFmRNA的表达Fig9-2TheexpressionofSCFmRNAineachgroupdetectedbyRT-PCR6．胃粘膜损伤指数及病理组织学检查6．1胃粘膜标本的肉眼观察胃粘膜肉眼观察下的损伤情况：A组：胃粘膜光滑，未见明显异常。B组：胃粘膜充血、水肿、散在点状糜烂及出血点，未见溃疡。C组：胃粘膜充血、水肿，未见糜烂、出血及溃疡。D组：胃粘膜光滑，未见明显异常。Guth标准改良评分分别为：A组O．40±O．52分，B组2．90±O．74分，C组1．40±O．52分，D组O．50±O．53分。组间比较采用单因素方差分析LSD法，结果显示B组胃粘膜损伤评分显著高于A组、C组及D组(PO．05)。(见表7和图10)6．2胃粘膜病理组织学观察各组胃粘膜组织病理学情况：A组：胃粘膜上皮细胞排列整齐，未见上皮损伤、出血、炎性细胞浸润351O《Z区ELo∞-OcO一毁警．Id】8o￡卜 泸州医学院硕士学位论文Note：木ComparedwithAgroupP<0．05；#ComparedwithBgroupP<0．05；＆ComparedwithCgroupP<0．05．A’惑挚圄曩澜鬻鳝瀵：蓥图lO肉眼观察下各组大鼠胃粘膜标本．A：正常对照组胃粘膜光；B：WIRS组胃粘膜充血、点片状糜烂；C：WIRS+CAP组胃粘膜充血；D：CAP组胃粘膜光滑。Figure10ThegastricmugosaspecimensofratsA：Thegastricmucosalwasintegrityincontrolgroup．B：ThegastricmucosalwashyperemiaandpunctateerosionsinWIRSgroup．C：ThegastricmucosalwashyperemiainWIRS+CAPgroup．D，ThegastricmucosalwasintegrityinCAPgroup．36霉鬟 泸州医学院硕士学位论文及腺体结构紊乱。B组：胃粘膜上皮损伤、脱落，偶有点状出血灶，粘膜轻度淋巴细胞浸润。C组：胃窦粘膜上皮细胞轻度损伤，未见明显腺体结构紊乱和坏死上皮细胞、炎性细胞浸润。D组：胃粘膜上皮细胞排列整齐，未见上皮损伤、出血、炎性细胞浸润及腺体结构紊乱。AC置D精懿美邀溅!辫图11各组大鼠胃粘膜病理组织学改变(HE×100)．A：正常对照组胃粘膜正常：B：WIRS组胃粘膜上皮脱落、充血：C：wIRS+CAP组胃粘膜上皮轻度脱落、未见腺体紊及坏死：D：CAP组胃粘膜正常．Figure11Thegastricmucosapathologicalhistologyinrats(HEx1001：A：Thegastricmucosalwasintegrityincontrolgroup；B：ThegastricmucosalwassheddingandhyperemiainWlRSgroup；C：ThegastricmucosalwasalittledenudedandhadnoglandularturbulentornecrosisinWIRS+CAPgroup；D：ThegastricmucosalWasintegrityinCAPgroup．Masuda标准评分分别为：A组O．30±O．48分，B组3．70±1．89分，C37一繇瓣～溱囊? 泸州医学院硕士学位论文组1．604-0．70分，D组0．404-0．52分。组间比较采用单因素方差分析LSD法，结果显示B组病理组织损伤积分显著大于A组、C组及D组(PO．05)。(见表7和图11)38 泸州医学院硕士学位论文讨论CAP是辣椒中的主要活性成分，其药理作用十分广泛，既往研究发现CAP具有降血压、改善呼吸功能、止痛、抗癌、减肥等作用114-18】。近年来越来越多的研究发现CAP对消化功能有重要影响，其中CAP对胃肠动力的作用已引学者重视，故本研究通过观察CAP对实验大鼠胃动力的干预作用，初步探讨CAP对胃动力的作用及机制。1．胃动力障碍动物模型有关胃动力障碍动物模型的造模方法文献[19-211报道较多，如：左旋精氨酸腹腔注射法、硫酸阿托品腹腔注射法、肢体缺血再灌注损伤法、糖尿病胃轻瘫模型等，上述造模方法均属于侵入性方法，造模过程中容易造成动物死亡，同时不能较好模拟心理因素在胃肠动力障碍形成中的作用。水浸。束缚应激(waterimmersionrestraintstress，WIRS)是一种具有心理应激与生理应激双重作用的应激方法，既往本造模方法已广泛应用于应激相关的动物实验研究【221。张丹等[23-251报道长期慢性束缚水浸应激可以损伤大鼠胃窦ICC的超微结构，随着应激时间的延长，大鼠胃排空率呈现先上升后下降的规律。柯道平等【26J手艮道冷束缚应激可抑制大鼠胃排空速度及小肠推进率。故本实验选择WIRS方法试图制作胃动力障碍动物模型。该方法具有实验器材与实验动物价格低廉，易于操作，能较好模拟心理应激与生理应激在胃肠动力障碍形成中的作用。本实验结果显示：WIRS组大鼠胃酚红排空率显著低于正常对照组，说明WIRS造模方法能较好制作胃动力障碍动物模型。2．CAP的使用方法39 泸州医学院硕士学位论文CAP目前在消化系统的应用研究主要是动物实验。在动物实验中CAP有多种用药途径，包括灌胃、皮下注射、腹腔注射等，既往的实验中多采用灌胃方式给药。Shibata等研究CAP灌胃对狗胃肠动力的影响，结果发现小剂量CAP灌胃可促进狗的胃肠排空。CAP通过灌胃途径给药能准确控制CAP用量，但灌胃给药存在一些局限性，由于CAP对呼吸道的刺激作用，可能导致实验动物窒息，甚至死亡。本课题组既往研究《辣椒煎剂对大鼠胃动力及胃酸分泌的影响》、《辣椒素对内脏高敏感大鼠胃动力的影响》的实验中均采用CAP灌胃途径给药，实验过程中，CAP灌胃常常导致大鼠呛咳，甚至死亡，对实验进程造成一定影响。为了改进CAP实验的给药方法，降低CAP对实验动物呼吸道的刺激作用，本实验首次采用喂食自制CAP饲料的给药方法。CAP为脂溶性，能较好溶于食用油，且CAP在室温下不易挥发，容易控制剂量，同时降低了CAP对呼吸道的刺激作用，实验过程中大鼠无呛咳、窒息等，未出现一例动物死亡，较为顺利的完成了实验，成为该方法的一个优点。但本方法给药受大鼠主观摄食欲望的影响，可能对CAP给药量造成一定影响，尚需进一步摸索、改进此给药方法。3．CAP的用量研究发现CAP的药理作用具有迷人的特性，与CAP的用量高度相关。当CAP的使用量由低到高时，CAP对CSAN可产生四阶段不同的刺激作用，即兴奋作用、感觉阻滞作用、长时的选择性神经毒性作用及不可逆的细胞损毁作用【281。Mozsik等‘28，29】报道小剂量的CAP(<10mg／kg)可对辣椒素敏感传入神经元(capsaicinsensitiveafferentneurons，CSAN)产生兴奋作用，中 泸州医学院硕士学位论文等剂量的CAP(10mg／kg～50mg／kg)可能会对CSAN产生感觉阻滞作用。Evangelistal等㈣认为大剂量的CAP(>50mg／kg)可使CSAN产生化学“去神经”作用。因此在进行实验研究时CAP的使用量至关重要，不同剂量的CAP甚至可以产生截然相反的结果。本课题组既往在《辣椒素对内脏高敏感大鼠胃动力的影响》的研究中发现，lmg／kg／d、5mg／kg／d及20mg／kg／d的CAP连续灌胃2周，三组胃核素排空率均较正常对照组及空白模型组显著升高，但5mg／kg／d组较lmg／kg／d组胃核素排空率高，较20mg／kg／d组大鼠不适反应低。因此本实验选用5mg／kg／d的CAP进行实验研究。4．CAP对胃肠动力的作用近年来研究发现CAP对胃肠动力有一定影响，有关CAP与胃肠动力关系的实验结果不一。多数研究认为小剂量CAP可促进胃动力，而大剂量时则对胃动力产生抑制作用。Holzer等13】报道在体外实验中，0．0015mg／kg的CAP可引起大鼠胃体平滑肌的收缩。Takeuchi等【31峙艮道大鼠30mg／kg的CAP灌胃能抑制乙醇／盐酸诱导的胃黏膜损伤大鼠的胃运动，在给药30min后胃电波的收缩幅度抑制70％。Bartho等【321报道，CAP可诱发豚鼠食道出现两相收缩，即瞬时收缩和持久收缩。Bartho等【331报道CAP可引起豚鼠回肠平滑肌的收缩，且此作用与神经末梢释放的生物活性物质刺激平滑肌细胞和肌间神经元有关。Matsumoto等【51报道CAP可引起大鼠结肠的瞬时和持久收缩；其中CAP刺激神经末梢释放的SP和神经激肽A激活副交感神经神经节上的NKl和NK2受体，引起胆碱能神经末梢释放乙酰胆碱，引起瞬时收缩；神经激肽A从外在感觉神经末梢释放，激活平滑肌细胞上的NK2受体，则41 泸州医学院硕士学位论文引起持久收缩。本实验通过配制CAP大鼠饲料，CAP的用量为5mg／kg／d，连续喂食4周，结果显示：CAP组胃酚红排空率显著高于正常对照组与WIRS组，WIRS+CAP组胃酚红排空率显著高于WIRS组，提示CAP可能对正常大鼠及WIRS模型大鼠胃动力具有改善作用。5．0^P对胃肠动力的作用机制胃肠运动主要受神经系统与体液因素调节。其中肠神经系统．Cajal间质细胞．平滑肌细胞组成的网络是胃肠动力的基本功能单位，对胃肠道的运动功能起决定性作用‘8】；在胃肠激素中胃泌素(GAS)、MTL、胆囊收缩素、神经降压素(NT)等以内分泌的形式为主要作用方式，而P物质、CGRP、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、降钙素(LT)、脑啡肽(ENK)等以胃肠肽的形式为主要作用方式。5．1CAP与TRPVlTRPVl是一种通透钙离子的非选择性阳离子通道，TRPVl被CAP激活后，会导致细胞钙离子内流，激活无髓鞘或薄的有髓神经纤维的初级神经元(辣椒素敏感传入神经元)释放多种神经递质，进而产生多种生物学作用。Zhong等【34】报道胃肠道分布着许多辣椒素敏感的传入神经元(capsaicinsensitiveafferentneurons，CSAN)，TI冲V1就分布在CSAN的胞体膜和感觉神经末梢上。辣椒素刺激胃肠道的TRPVl通道，激活无髓鞘或薄的有髓神经纤维的初级神经元释放多种神经递质，如SP、VIP、CGRP、胆囊收缩素、神经激肽A和兴奋性氨基酸等，参与胃肠动力调节【10】。本实验结果显示WIRS+CAP、CAP组大鼠胃窦组织TRPVl较正常对照42 泸州医学院硕士学位论文组及WIRS组升高。推测CAP对实验大鼠胃动力的改善作用可能与CAP增加胃窦组织TRPVl的表达量相关。5．2CAP与胃肠激素MTL主要由分布在十二指肠和空肠内的M细胞及肠嗜铬样细胞所分泌。Bardhan等【351研究认为MTL通过刺激消化道的MTL受体，引起消化间期MMC的周期性变化，从而可以加速胃排空。周吕等【361研究认为狗胃体和胃窦肌间神经丛和黏膜下神经丛存在数量众多的MTL受体，并与ENS、ICC联系在一起，脑肠肽神经元释放递质作用于ICC，从而调控胃运动的起搏功能。此外还有研究【371也认为MTL引起的大鼠胃平滑肌的收缩作用是通过ICC实现的。本实验结果显示WlRS+CAP组、CAP组血浆MTL水平较WIRS组高。据此我们推测CAP对实验大鼠胃动力的改善作用可能与CAP刺激TRPVl，兴奋CSAN迷走神经通路释放MTL有关。SP是一种重要的胃肠肽，在整个胃肠道和肠神经系统都有广泛的分布【381。SP既可以神经递质的形式，又可以激素的形式参与调控胃肠运动。大量研究[39,401表明SP是调节胃肠运动的主要的兴奋性神经递质，SP对胃肠道纵行肌和环行肌可表现为两相的收缩效应，即瞬时收缩和紧随的由胆碱能神经释放乙酰胆碱起的持久收缩。sP是粘膜下神经丛和肌间神经丛的慢兴奋性突触后介质，可直接作用于平滑肌或通过释放Ach引起胃肠道平滑肌收缩；此外SP对胃平滑肌的兴奋作用大于对幽门括约肌的收缩作用，因此表现为促进胃排空【4¨。ICC细胞膜上存在NKl．R，因此SP可由NKl一R介导参与移行性复合运动波活动的起搏【421。43 泸州医学院硕士学位论文本实验结果显示WIRS组大鼠胃窦组织SP表达下降，推测胃窦组织SP的表达失调可能与WIRS大鼠胃排空率下降有关。CAP饲料干预能提高胃窦组织SP的表达，推测CAP可能通过提高胃窦组织SP的表达进而促进实验大鼠的胃排空。5．3胃肠运动的起搏者—Cajai间质细胞1893年，解剖学家RamonYCajal发现家兔小肠神经末梢与平滑肌细胞之间存在一种特殊间质细胞，他认为这种特殊的间质细胞是交感神经的终末细胞m1。随后人们将这种细胞命名为Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal，icc)，此后学者通过大量研究发现ICC可维持胃肠平滑肌节律性运动，并有产生和传导慢波电位、调节神经递质等功能‘6，71。酪氨酸激酶受体(c．kit)是ICC表面表达的特异性蛋白，c．ht受体几乎在所有的ICC表面表达【441。c．kit与其自然配体．干细胞生长因子(stemcellfactor，SCF)结合后启动的信号途径，对维持ICC的生长、发育及表型起着重要作用‘纠。5．3．1ICC与胃肠道电生理慢波信号主要由ICC的一种亚型．肠肌从ICC(ICC．MY)产生，慢波传递至胃肠道平滑肌细胞，使平滑肌细胞外的Ca2+内流，使之产生兴奋性收缩来调节胃肠道的节律性运动，胃肠道动力障碍与慢波信号的减弱有密切关系[45-47】。Klein等1481研究发现ICC缺失小鼠的小肠缺少慢波活动，并出现不协调性收缩。Lu等【491在肠道炎症模型狗中发现慢波波幅的缩小和持续时间的缩短，并且慢波波幅的缩小和持续时间的缩短与环形肌ICC的损伤程度有密切关系。’5．3．2ICC与肠神经系统 泸州医学院硕士学位论文肠神经系统(theentericnervoussystemENS)参与肠道动力的调节，很多胃肠动力障碍性疾病都存在ENS的紊乱。病理状态下ENS结构的紊乱发生在ICC病变之后，ICC的减少往往伴随着肠道神经元和肠道胶质细胞的减少【50-511。Rolle等【521发现肠内神经元发育不良与新生儿期ICC细胞网络系统的缺失有密切关系。ICC可能通过刺激神经细胞的干细胞因子影响ENS，神经细胞则是通过生成氮氧化物合酶，诱导产生NO刺激ICC细胞的增生【531。5．3．3ICC与神经递质ICC通过突触后膜与神经突触形成特殊的神经连接，并通过其传递神经递质，同时神经递质对ICC的功能有着十分重要的作用。Wouters等【54】在5-HT2B敲除的动物模型中发现ICC网络的异常，并出现胃肠功能的紊乱。ICC细胞膜上含有5-HT的感受器，5-HT与其受体结合可激活Ca2+电压门控通道，使细胞外Ca2+l为流，从而调节胃肠动力‘551。此外，ICC细胞膜上还存在多种受体如毒蕈碱M2、M3受体、VIP受体，神经激肽受体，ICC对乙酰胆碱、VIP、P物质等神经递质均有反应【561。本实验RT-PCR结果显示WIRS组c．kitmRNA转录水平显著低于正常对照组，但CAP组c．kitmRNA转录水平与正常对照组差异无统计学意义；WIRS组SCFmRNA转录水平显著低于正常对照组，CAP组SCFmRNA转录水平显著高于正常对照组与WIRS组。据此我们推论WIRS引起的大鼠胃排空率减慢，可能与应激影响SCF／c．kit信号途径，影响ICC的功能有关；CAP可能对SCF的表达有一定影响，但与c—kit、Cajal间质细胞的相关性尚不明确。45 泸州医学院硕士学位论文结论皇口p匕(1)WIRS能成功建立胃动力障碍动物模型。(2)正常大鼠摄食小剂量CAP饲料4周可促进胃动力。(3)WIRS大鼠摄食小剂量CAP饲料4周可改善胃动力。(4)CAP影响正常及WIRS大鼠的胃动力可能与调节TRPVl、SP的表达及MTL的释放有关。(5)CAP可能对SCF的表达有一定影响，但与c．kit、Cajal间质细胞的相关性尚不明确。 泸州医学院硕士学位论文参考文献1．HalderSL，LockeGR，3rd，SchleckCD，ZinsmeisterAR，MeltonLJ，3rd，TalleyNJ：Naturalhistoryoffunctionalgastrointestinaldisorders：a12-yearlongitudinalpopulation—basedstudy．Gastroenterology2007，133(3)：799—807．2．林绮雯，杨得坡：辣椒素的药理与临床研究概况．广东药学2000，10(5)：5-8．3．Holzer-PetscheU，SeitzH，LembeckF：Effectofcapsaicinongastriccorpussmoothmuscleofthe162(1)：29—36．invitro．EurJPharmacol1989，4．DebreceniA，Abdel—SalamOM，FiglerM，JuricskayI，SzolcsanyiJ，MozsikG：Capsaicinincreasesgastricemptyingrateinhealthyhumansubjectsmeasuredby13C-labeledoctanoicacidbreathtest．JPhysiolParis1999，93(5)：455—460．5．MatsumotoK。KurosawaE，TeruiH，HosoyafTashimaK。Murayama刀．PriestleyJr,HorieS：LocalizationofTRPV1andcontractileeffectofcapsaicininmouselargeintestine：highabundanceandsensitivityinrectumanddistalcolon．AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol2009，297(2)：G348-360．6．HL：OntheInterstitialCellsofCajal．PhDthesis1937，UniversityofUtrecht(Netherlands)．7．N．A：Theelectricalactivityofisolatedmammalianintestines．JPhysiol47 泸州医学院硕士学位论文8。1947(106)：139——153．李毅，齐清会：胃肠道神经一Cajal间质细胞．平滑肌网络研究进展．国际消化病杂志2007，27(3)：225—227．9．HuizingaJD，ThunebergL，KluppelM，MalyszJ，MikkelsenHB，BernsteinA：W／kitgenerequiredforinterstitialcellsofCajalandforintestinalpacemakeractivity．Nature1995，373(6512)：347—349．10．HolzerP，PainsippE，SchuligoiR：Differentialeffectsofintragastricacidandcapsaicinongastricemptyingandafferentinputtotheratspinalcordandbrainstem．BMCNeurosci2005，6：60．11．GuthPH，PaulsenGNagataH：Histologicandmicrocirculatorychangesinalcohol—inducedgastriclesionsintherat：effectofprostaglandincytoprotection．Gastroenterology1984，87(5)：1083-1090．12．MasudaE，KawanoS，NaganoK，TsujiS，TakeiYHayashiN，TsujiiM，OshitaM，MichidaT’KobayashiIetal：Roleofendogenousendothelininpathogenesisofethanol—inducedgastricmucosalinjuryinrats．AmJPhysiol1993，265(3Pt1)：G474—481．13．VanderwindenJM，DeLaetMH，SchiffmannSN，MailleuxP，LowensteinCJ，SnyderSH，VanderhaeghenJJ：NitricoxidesynthasedistributionintheentericnervoussystemofHirschsprung’Sdisease．Gastroenterology1993，105(4)：969·973．14．VaishnavaP，WangDH：Capsaicinsensitive-sensorynervesandbloodpressureregulation．CurrMedChemCardiovascHematolAgents2003，48 泸州医学院硕士学位论文1(2)：177—188．15．EbiharaT’TakahashiH，EbiharaS，OkazakiT’SasakiT'WatandoA，NemotoM，SasakiH：Capsaicintrocheforswallowingdysfunctioninolderpeople．JAmGeriatrSoc2005，53(5)：824—828．16．RapoportAM，BigalME，TepperSJ，SheftellFD：Intranasalmedicationsforthetreatmentofmigraineandclusterheadache．CNSDrugs2004，18(10)：671—685．17．SanchezAM，SanchezMGMalagarie-CazenaveS，OleaN，Diaz-LaviadaI：InductionofapoptosisinprostatetumorPC一3cellsandinhibitionofxenograftprostatetumorgrowthbythevanilloidcapsaicin．Apoptosis2006，11(1)：89-99．18．BartnessTJ，KaySongC，ShiH，BowersRR,FosterMT：Brain—adiposetissuecrosstalk．ProcNutrSoc2005，64(1)：53—64．19．彭博，贺蓉，杨滨，路艳丽，高杰，李建荣：厚朴和凹叶厚朴对实验性胃肠动力障碍的药效作用差异研究．中国中药杂志2010，35(19)：2624-2627．20．张桐茂，唐方：运脾汤对胃肠动力障碍大鼠离体小肠运动的影响．天津医科大学学报2010，16(1)：158．159．21．何莉莉，朱雅娜，任荣，张玉，王飞，李媛，张艺凡，孙玉凤：厄贝沙坦对糖尿病胃轻瘫大鼠ET-1和ATlR表达的影响．世界华人消化杂志2013．21(9)：798．803．22．Landeira-FernandezJ：Analysisofthecold-waterrestraintprocedurein49 泸州医学院硕士学位论文gastriculcerationandbodytemperature．PhysiolBehav2004，82(5)：827—833．23．张丹，夏志伟，韩亚京：长期慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞数量的影响．世界华人消化杂志2010，18(9)：920-925．24．张丹，夏志伟，韩亚京：不同时程束缚水浸应激对大鼠胃排空的影响．中国实验动物学报2009，17(6)：415．418．25．张丹，夏志伟，韩亚京：不同时程慢性束缚水浸应激对大鼠胃窦Cajal间质细胞超微结构的影响．世界华人消化杂志2010，18(6)：581-585．26．柯道平，杜鹃，唐影，高莉，李忠稳，胡金兰，王刚，孔德虎：银杏叶提取物对大鼠冷应激引起的胃肠动力紊乱及NO含量变化的影响．中国药理学通报2005，21(7)：881-883．27．ShibataC，SasakiI，NaitoH，UenoT’MatsunoS：Intragastriccapsaicinstimulatesmotilityofuppergutandproximalcolonviadistinctpathwaysinconsciousdogs．DigDisSci1999，44(6)：1083-1089．28．MozsikGVinczeA，SzolcsanyiJ：Fourresponsestagesofcapsaicin—sensitiveprimaryafferentneuronstocapsaicinanditsanalog：gastricacidsecretion，gastricmucosaldamageandprotection．JGastroenterolHepatol2001，16(10)：1093-1097．29．MozsikGSzolcsanyiJ，RaczI：Gastroprotectioninducedbycapsaicininhealthyhumansubjects．WorldJGastroenterol2005，11(33)：5180—5184．30．EvangelistaS：Roleofsensoryneuronsinrestitutionandhealingofgastriculcers．CurrPharmDes2006，12(23)：2977-2984．50 泸州医学院硕士学位论文31．TakeuchiK，NiidaH，MatsumotoJ，UeshimaK，OkabeS：Gastricmotilitychangesincapsaicin-inducedcytoprotectionintheratstomach．JpnJPharmacol1991，55(1)：147—155．32．BarthoL，LenardL，Jr．，PatacchiniRHalmaiVWilhelmM，HolzerP，MaggiCA：Tachykininreceptorsareinvolvedinthe¨localefferent¨motorresponsetocapsaicinintheguinea—pigsmallintestineandoesophagus．Neuroscience1999，90(1)：221·228．33．BarthoL，BenkoR，PatacchiniKPethoGHolzer-PetscheU，Holzer只LazarZ，UndiS，IllenyiL，AntalAetal：Effectsofcapsaicinonvisceralsmoothmuscle：avaluabletoolforsensoryneurotransmitteridentification．EurJPharmacol2004，500(1-3)：143—157．34．ZhongF’ChristiansonJA，DavisBM，BielefeldtK：Dichotomizingaxonsinspinalandvagalafferentsofthemousestomach．DigDisSci2008，53(1)：194-203．35．BardhanKD，BodemarGGeldofH，SchutzE，HeathA，MillsJG,JacquesLA：Adouble-blind，randomized，placebo-controlleddose-rangingstudytoevaluatetheefficacyofalosetroninthetreatmentofirritablebowelsyndrome．AlimentPharmacolTher2000，14(1)：23-34．36．周吕，袁勃，田瑞，王礼建：Cajal间质细胞介导胃动素兴奋胃起搏区运动的作用．基础医学与临床2001，21(z1)：84-85．37．周吕，ISL建，袁勃，王玲：胃动素对Cajal间质细胞引起的大鼠胃平滑肌收缩的作用．中华医学杂志2003，83(16)：1422-1427．51 泸州医学院硕士学位论文38．MaakeC，KloasW，SzendefiM，ReineckeM：Neurohormonalpeptides，serotonin，andnitricoxidesynthaseintheentericnervoussystemandendocrinecellsofthegastrointestinaltractofneotenicandthyroidhormone—treatedaxolotls(Ambystomamexicanum)．CellTissueRes1999，297(1)：91-101．39．LordalM，TheodorssonE，HellstromPM：Tachykininsinfluenceinterdigestiverhythmandcontractilestrengthofhumansmallintestine．DigDisSci1997，42(9)：1940-1949．40．WheatleyJM，HutsonJM，Chowcw,OliverM，HurleyMR：Slow．transitconstipationinchildhood．JPediatrSurg1999，34(5)：829-832；discussion832．823．41．SchmidtPT,HoistJJ：Tachy7kininsinregulationofgastricmotilityandsecretion．CellMolLifeSci2000，57(4)：579．588．42．MuleF，D’AngeloS，TabacchiGSerioR：InvolvementoftachykininNK2receptorsinthemodulationofspontaneousmotilityinratproximalcolon．NeurogastroenterolMotil2000，12(5)：459—466．43．SRyC：Histologiedusyst6menerveuxde1’hommeetdesvert6br6s．Paris：Maloine1911．44．VannucchiMG：ReceptorsininterstitialcellsofCajal：identificationandpossiblephysiologicalroles．MicroscResTech1999，47(5)：325．335．45．HuizingaJD，ZarateN，FarrugiaG：Physiology,injury,andrecoveryofinterstitialcellsofCajal：basicandclinicalscience。Gastroenterology2009，52 泸州医学院硕士学位论文137(5)：1548—1556．46．SandersKM，KohSD，WardSM：Interstitialcellsofcajalaspacemakersinthegastrointestinaltract．mnnuRevPhysiol2006，68：307—343．47．HermigGW,SpencerNJ，Jokela-WillisS，BayguinovPO，LeeHT,RitchieLA，WardSM，SmithTK，SandersKM：ICC—MYcoordinatesmoothmuscleelectricalandmechanicalactivityinthemurinesmallintestine．NeurogastroenterolMotil2010，22(5)：e138·151．48．KleinS，SeidlerB，KettenbergerA，SibaevA，RohnM，FeilR，AllescherHD，VanderwindenJM，HofmannF，SchemannMetal：InterstitialcellsofCajalintegrateexcitatoryandinhibitoryneurotransmissionwithintestinalslow．waveactivity．NatCommun2013，4：1630．49．LuGQianX，BerezinI，TelfordGL，HuizingaJD，SamaSK：InflammationmodulatesinvitrocolonicmyoelectricandcontractileactivityandinterstitialcellsofCajal．AmJPhysiol1997，273(6Pt1)：G1233—1245．50jVillanacciWAnneseVCuttittaA，FisogniS，ScaramuzziGDeSantoE，CorazziN，BassottiG：Animmunohistochemicalstudyofth．emyentericplexusinidiopathicachalasia．JClinGastroenterol2010，44(6)：407_410·51．BassottiGVillanacciVMaurerCA，FisogniS，DiFabioF，CadeiM，MorelliA，PanagiotisT’CathomasGSalerniB：Theroleofglialcellsandapoptosisofentericneuronesintheneuropathologyofintractableslowtransitconstipation．Gut2006，55(1)：41—46．53 泸州医学院硕士学位论文52．RolleU，Piaseczna-PiotrowskaA，PuriP：InterstitialcellsofCajalinthenormalgutandinintestinalmotilitydisordersofchildhood．PediatrSurgInt2007，23(12)：1139—1152．53．ChoiKM，GibbonsSJ，Roeder儿，LurkenMS，ZhuJ，WoutersMM，MillerSM，SzurszewskiJH，FarrugiaG：RegulationofinterstitialcellsofCajalinthemousegastricbodybyneuronalnitricoxide．NeurogastroenterolMotil2007，19(7)：585—595．54．WoutersMM，GibbonsSJ，RoederJL，DistadM，OuYStregePR，SzurszewskiJH．FarrugiaG：ExogenousserotoninregulatesproliferationofinterstitialcellsofCajalinmousejejunumthrough5-HT2Breceptors．Gastroenterology2007，133(3)：897—906．55．LiuHN，OhyaS，NishizawaYSawamuraK，IinoS，SyedMlVl，GotoK，ImaizumiYNakayamaS：Serotoninaugmentsgutpacemakeractivityvia5-HT3receptors．PLoSOne2011，6(9)：e24928．56．TanahashiKWakiN，UnnoZMatsuyamaH，IinoS，KitazawaZYamadaM．KomoriS：RolesofMandMmuscarinicreceptorsinthegenerationofrhythmicmotoractivityinmousesmallintestine．NeurogastroenterolMotil2013．54 泸州医学院硕士学位论文英文缩写英文全称CAPcapsaicin英汉缩略词对照表中文译名辣椒素WIRSwaterimmersionrestraintstress水浸一束缚应激MTLTRPVlCSANCGRPSPSCFDGIMDGPFDmotilintransientreceptorpotentialvanilloidsubtype1胃动素辣椒素受体capsaicinsensitiveafferentneurons辣椒素敏感传入神经calcitoningenerelatedpeptide降钙素基因相关肽substancePstemcellfactorP物质干细胞生长因子disordersofgastrointestinalmotility胃肠动力障碍性疾病diabeticgastroparesisfunctionaldyspepsiaGERDgastroesophagealrefluxdiseaseICCENSinterstitialcellsofCajalentericnervoussystem55糖尿病胃轻瘫功能性消化不良胃食管反流病Cajal间质细胞肠神经系统 泸州医学院硕士学位论文致谢岁月如梭，转眼间，三年的研究生求学生活即将结束，在此首先向我的导师彭燕教授致以最诚挚的感谢!彭教授扎实的专业知识、科学严谨的治学态度、高尚的医德、一丝不苟的工作作风让我获益匪浅。宽容豁达、平易近人的人格魅力对我影响深远，永远值得我学习。感谢泸州医学院附属医院消化内科李昌平教授、邓明明教授、唐世孝教授、唐川康副教授、李晓云副教授、付祥胜副教授等在临床工作中给予我的指导与帮助。感谢泸州医学院附属医院中心实验室的唐利老师、唐小平老师，泸州医学院附属医院病理科柴利老师在实验过程中给予我的指导与帮助。感谢我的师兄、同学、师妹们在课题及论文完成过程中对我的帮助。感谢我的父母和亲人，他们这三年来无微不至的关怀和照顾，一如既往地支持我、鼓励我，是我顺利完成学业的巨大动力。最后向论文评审老师及答辩的专家老师们致以崇高的敬意及衷心的感谢156 泸州医学院硕士学位论文综述皇刁：】尘Cajal间质细胞与胃肠动力关系的研究进展【摘要】Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal，ICC)是胃肠电生理信号的起搏者和传导者，同时介导肠道神经系统(the’entericnervoussystem，ENS)参与胃肠道神经信号转导，在胃肠动力产生和调节中扮演着至关重要的角色。ICC的数量和超微结构的改变可引起多种胃肠动力障碍性疾病的发生。深入研究ICC影响胃肠动力的病理生理学机制可能为ICC胃肠道动力障碍性疾病的治疗提供新的认识和治疗靶点。本文就近年来ICC与胃肠动力关系的研究进展作一综述。【关键词】Cajal间质细胞；c．kit；SCF；慢波；胃肠动力；胃肠动力障碍性疾病1Cajai间质细胞早在1893年，解剖学家RamonYCajal利用甲基蓝及嗜银染色法在家兔小肠神经末梢与平滑肌细胞之间存在一种特殊间质细胞，他认为这种特殊的间质细胞是交感神经的终末细胞，并首次绘出了这个细胞的外形【¨。随后人们将这种细胞命名为Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal，ICC)，大量研究发现ICC可维持胃肠平滑肌节律性运动，并有产生和传导慢波电位、调节神经递质和等功能‘2，31。20世纪末，学者在W／Wv突变致ICC发育受损的大鼠模型中发现胃肠道电生理信号减弱和胃肠动力障碍，暗示胃肠动力障碍性与ICC的异常有关，从而使ICC的研究进入新的阶段【4，51。酪氨酸激酶受体(c．kit)是ICC表面表达的特异性蛋白，c．kit受体几乎在所有的ICC表面表达【6】oc．kit与其自然配体．干细胞生长因子(stemcell气7 泸州医学院硕士学位论文factor，SCF)结合后启动的信号途径，对维持ICC的生长、发育及表型起着重要作用。Takeda等【7l报道W／WV小鼠及W／WV大鼠(自发性C-kit突变的动物)c．kit的活力明显下降，表现为ICC不能正常发生及发育。同时，微环境中存在足够的SCF对于ICC的发育及表型维持也相当重要。Beckett等【81研究发现SI／SId小鼠(SCF非致死性突变小鼠)胃肠道ICC网络紊乱，肠肌间丛ICC缺失，没有产生自发的节律性的电慢波活动。Huizinga等【51报道小鼠Steel位点(编码SCF)和W位点(编码c．kit)突变均可导致胃肠道肌间神经丛ICC缺失，胃肠道慢波消失。2ICC与胃肠道电生理ICC作为胃肠的起搏点，管理着胃肠道平滑肌的慢波电活动，胃肠道动力障碍与慢波信号的减弱有密切的关系19]。慢波信号主要产生于ICC的一种亚型．肠肌从ICC(ICC．MY)，慢波传递至胃肠道平滑肌细胞，使平滑肌细胞外的Ca2+l为流，使之产生兴奋性收缩来调节胃肠道的节律性活动【10，¨l。Klein等【12】通过观察小鼠小肠平滑肌细胞的电生理活动和收缩特点，发现ICC缺失组小鼠的小肠缺少慢波活动，并出现不协调性收缩，而在正常对照组则表现为典型慢波活动下的节律性收缩。Lu等【131在肠道炎症模型狗中发现慢波波幅缩小和持续时间的缩短，并且慢波波幅的缩小和持续时间的缩短与环形肌ICC的损伤程度密切相关。3ICC与肠神经系统肠神经系统(theentericnervoussystem，ENS)参与肠道动力的调节，很多胃肠动力障碍性疾病都存在ENS的紊乱。因为ICC的位置很特殊，位于胃肠道平滑肌细胞和神经节之间，并且有类似于神经细胞的噬银染色性，58 泸州医学院硕士学位论文所以学者们推测ICC细胞参与胃肠道神经系统的活动。有研究发现病理状态下ENS结构的紊乱发生在ICC病变之后，ICC的减少往往伴随着肠道神经元和肠道胶质细胞的减少【14，M】。Rolle等fMl发现肠内神经元发育不良与新生儿期ICC细胞网络系统的缺失有密切关系。可见ICC与ENS相互作用，共同协调决定着肠道的运动模式。ICC可能通过刺激神经细胞的干细胞因子来影响ENS，神经细胞则是通过生成氮氧化物合酶，诱导产生NO进而刺激ICC细胞增生【17】。所以很多的观点认为ICC就是ENS的终末细胞，是ENS的重要组成部分。4ICC与神经递质ICC与神经轴突接触非常紧密，ICC通过突触后膜与神经突触形成特殊的神经连接，并通过其传递神经递质。很多的内源性因子如神经递质、激素、旁分泌物等均可通过作用于ICC来影响胃肠运动。体内神经递质5．HT对ICC细胞的功能有着十分重要的作用，Wouters等【181在5-HT2B敲除的动物模型中发现ICC网络的异常，并因此出现胃肠功能的紊乱。ICC细胞膜上有5-HT的感受器，5-HT与其受体结合可激活Ca2+电压门控通道，使细胞外Ca2+P勺流，从而调节胃肠动力【19l。ICC细胞膜上含有大量抑制性神经递质NO的重要靶点Prkgl受体，ICC介入肠神经元细胞和平滑肌细胞中，神经元释放的NO作用于邻近的Prkgl受体，ICC可抑制NO的产生，如果ICC减少可导致NO的增多，使平滑肌细胞松弛【12】。此外，ICC细胞膜上还存在多种受体如毒蕈碱M2、M3受体、VIP受体、神经激肽受体，ICC对乙酰胆碱、VIP、P物质等神经递质均有反应【201。5ICC形态、数量异常与胃肠动力紊乱密切相关59 泸州医学院硕士学位论文20世纪末，学者在W／Wv突变致ICC发育受损的大鼠模型中发现胃肠道电生理信号减弱和胃肠动力障碍，暗示胃肠动力障碍与ICC密切相关，从而使ICC的研究进入新的阶段【4，51。研究发现许多胃肠动力性疾病存在ICC数量和形态结构的异常。Forster等【2u对14例胃轻瘫患者的研究发现5例ICC几乎完全缺失，其余9例ICC数量仅为正常人的20％，并且ICC缺失情况与胃轻瘫的严重程度有关。Knowles等【221在慢性便秘患者结肠发现ICC的分布异常、数量减少和超微结构的改变。Villanacci等f141用免疫组化方法研究12例贲门失弛缓症患者食管标本，发现疾病组食管样本中ICC数量与对照组相比显著减少，电镜观察发现疾病组ICC内线粒体和滑面内质网明显减少。目前研究认为ICC形态、数量等异常与以下疾病有关。5．1贲门失弛缓症贲门失弛缓症是食管贲门部的神经肌肉功能障碍所致的一种疾病，主要表现为食管下括约肌(10weresophagealsphincter,LES)弛缓不全，食物无法顺利通过的一种疾病。Faussone等【231报道贲门失弛缓患者LES及食管末端ICC较对照组减少，且ICC与神经末梢之间的联系减少。Villanacci等【1钾对12例贲门失弛缓症患者行食管平滑肌切开术，食管标本进行免疫组化标记ICC，发现疾病组食管样本中ICC数量与对照相比显著减少，电镜下观察发现疾病组ICC内线粒体和滑面内质网明显减少。5．2婴儿肥厚性幽门狭窄婴儿肥厚性幽门狭窄是一组以胃排空及幽门括约肌增厚为特征的疾病。Vanderwinden等【24】报道婴儿肥厚性幽门狭窄患者ICC在幽门环形肌中缺失。与此同时，Vanderwinden等【251的另一项研究报道肥厚性幽门切开术后送检幽 泸州医学院硕士学位论文门病理标本ICC与正常人分布十分相似。因此，ICC与婴JIJJE厚性幽门狭窄发生的相关性尚需进一步研究。5．3糖尿病性胃肠病糖尿病性胃肠病是指一组继发于糖尿病临床症候群，要表现为恶心呕吐、吞咽困难、烧心、餐后饱胀、腹胀腹痛、腹泻、便秘等。He等【26】报道糖尿病性胃肠病患者ICC间质少，但具体机制尚不明确。Nakahara等【271报道糖尿病患者结肠肌层ICC减少，这表明ICC的减少可能是糖尿病并发症发生的潜在病因。5．4慢性特发性假性肠梗阻慢性特发性假性肠梗阻主要表现为有胃肠推进异常及梗阻的症状，但不存在任何损伤或机械障碍‘2引。Streutker等129】报道一些慢性特发性假性肠梗阻患者存在ICC减少或缺失。Shafik等‘301报道慢性特发性假性肠梗阻患者存在慢波减弱或消失。Amiot等【311对慢性特发性假性肠梗阻患者肠道标本研究显示，48％的患者ICC数量减少或缺失。5．5先天性巨结肠先天性巨结肠又称肠管无神经节细胞症，患者病变肠管肠神经节细胞缺失，主要表现为病变肠管持续痉挛，粪便淤积，肠管扩张、肥厚。先天性巨结肠患者是否存在ICC异常尚有争议。Yamataka等‘321报道先天性巨结肠患者无神经节肠管ICC密度减低。Rolle等【331报道先天性巨结肠患者有神经节及无神经节肠管均存在ICC减少。然而Newman等【34】的研究认为先天性巨结肠患者的ICC数量与正常对照组无明显差异。5．6慢传输型便秘6l 泸州医学院硕士学位论文慢传输型便秘主要由于结肠的传输功能障碍引起的结肠运动减弱及排便速度减慢。Taguchi等【351报道ICC减少及分布异常是慢传输型便秘患者肠道运动功能障碍产生的重要原因。Breuer等【361研究慢传输型便秘患者活体标本显示，回肠中ICC数量减少不明显，而乙状结肠中ICC数量显著降低，并且其c．kitmRNA转录水平及c．1(it受体表达量也明显减少。5．7先天性肛门直肠畸形先天性肛门直肠畸形是较常见的胃肠道畸形，其发生是胚胎发育障碍的结果，目前与其相关的胚胎病因学研究尚无明确的最终结论。近年的研究发现先天性肛门直肠畸形患者存在ICC的异常。Kenny等【37】报道先天性肛门直肠畸形患者结肠运动减弱是由于ICC缺失或减少引起。Macedo等f381报道先天性肛门直肠畸形大鼠小肠末端ICC密度降低。6ICC与胃肠动力障碍性疾病的治疗由于多种胃肠动力障碍性疾病与ICC的功能障碍密切相关，理论上通过恢复ICC和其工作网络可以治疗胃肠道动力障碍性疾病。近年来越来越多的研究认为ICC可以成为许多胃肠动力障碍性疾病治疗的靶向目标[39-41】。屈他维林是一种罂粟碱类物，可通过抑制c—6山伊磷酸二酯酶从而减少胃肠蠕动，已作为胃肠道解痉药用于临床【421。最新的研究发现其机制主要是由于cAⅧ可减少ICC起搏电位和慢波频率，从而抑制胃肠平滑肌运动【43】。Min等【44】在体外培养小鼠ICC的研究中发现，中国传统方剂理中汤可以通过调节ICC细胞产生去极化电位，其主要机制是磷酸激酶C激活非选择性Ca十离子通道，使内源性的Ca+离子外流。Miao等【451研究发现厚朴酚可通过调节c．kit和NO信号通路来维持ICC功能，从而预防感染后肠动力紊乱。人工合成的促胃动62 泸州医学院硕士学位论文力剂DA．9701被认为可以通过激活ICC的起搏活性加速胃排空速率，增加胃顺应性，且其促进胃肠动力的效果强于莫沙必利和西沙必利【46，471。Choi等【4印报道DA．9701目前在韩国己用于功能性消化不良治疗的III期临床试验。Ishii[481等报道一些因ICC缺失或功能异常所致的胃肠动力性疾病，采用骨髓移植的方法植入具有多种分化潜能的多能干细胞，促使其分化为ICC，进而能恢复胃肠动力。研究表明ICC有自身更新和修复功能，ICC功能的恢复在很多疾病动物模型上已经得以实现。研究发现ICC具有重塑和再生能力，ICC在体内可由ICC祖／干细胞分化而来。目前有用SCF逆转糖尿病胃轻瘫模型小鼠ICC生理功能的报道【491。有学者通过酶分离法获取正常小鼠的ICC，并将其成功移植到先天性ICC缺乏的W网V突变小鼠模型中，用细胞内微电极检测到ICC产生了正常的慢波信号f501。由此期待以诱导干细胞分化和移植来治疗ICC缺失或者功能障碍引起的疾病，这可能是学术界的重大突破。综上，目前的研究表明ICC功能的正常对维持正常胃肠动力具有重要作用，ICC的形态、数量及分布的改变与多种胃肠动力障碍性疾病相关。在研究胃肠动力障碍性疾病治疗药物的实验中，一些以ICC为靶向治疗的研究也取得一定进展。然而，关于ICC调节胃肠动力的研究还有许多问题尚待解决，如产生慢波的离子机制，ICC形态、数量及分布的改变与动力性疾病发生的具体机制等。相信随着对ICC研究的深入，并将研究成果应用于临床，胃肠动力障碍性疾病的疗效将得到提高。63 泸州医学院硕士学位论文参考文献SRyC：Histologiedusyst6menerveuxde1’hommeetdesvert6br6s．Paris：Maloine1911．2．HL：OntheInterstitialCellsofCajal．PhDthesis1937，Universityof3．Utrecht(Netherlands)．N．A：Theelectricalactivityofisolatedmammalianintestines．JPhysiol1947(106)：139-153．4．WardSM，BumsAJ，TorihashiS，SandersK2N／I：Mutationoftheproto—oncogenec—kitblocksdevelopmentofinterstitialcellsandelectricalrhythmicity。‘stine．JPhysiol1994，480(Pt1)：91．97rlqythmicityInmurlneintestineJPhysio199448097．．(-．HuizingaJD，ThunebergL，KluppelM，MalyszJ，MikkelsenHB，BemsteinA：W／kitgenerequiredforinterstitialcellsofCajalandforintestinalpacemakeractivity．Nature1995，373(6512)：347．349．VannucchiMG：ReceptorsininterstitialcellsofCajal：identificationandpossiblephysiologicalroles．MicroscResTech1999，47(5)：325—335．TakedaM，TakayamaI，TeradaN，BabaT，WardSM，OhnoS，FujinoM_A：Immunoelectron-microscopicstudyofKit-expressingcellsinthejejunumofwildtypeandWs／Wsrats．CellTissueRes2001，304(1)：21．30．BeckettEA，HoriguchiK，KhoyiM，SandersKM，WardSM：LossofentericmotorneurotransmissioninthegastricfundusofSYSl(d)mice．JPhysiol2002，543(Pt3)：871—887．HuizingaJD，ZarateN，FarrugiaG：Physiology,injury,andrecoveryof 泸州医学院硕士学位论文interstitialcellsofCajal：basicandclinicalscience．Gastroenterology2009，137(5)：1548·1556．10．SandersKM，KohSD，WardSM：Interstitialcellsofcajalaspacemakersinthegastrointestinaltract．AnnuRevPhysiol2006，68：307—343。11．HennigGW：SpencerNJ，Jokela-WillisS，BayguinovPO，LeeHT,RitchieLA，WardSM，SmithTK，SandersKM：ICC-MYcoordinatesmoothmuscleelectricalandmechanicalactivityinthemurinesmallintestine．NeurogastroenterolMotil2010，22(5)：e138—151．12．KleinS，SeidlerB，KettenbergerA，SibaevA，R0hnM，FeilR，AllescherHD，VanderwindenJM，HofrnannF，SchemannMetal：InterstitialcellsofCajalintegrateexcitatoryandinhibitoryneurotransmissionwithintestinalslow．waveactivity．NatCommun2013，4：1630．13．LuGQianx，BerezinI，TelfordGL，HuizingaJD，SamaSK：InflammationmodulatesinvitrocolonicmyoelectricandcontractileactivityandinterstitialcellsofCajal．AmJPhysiol1997，273(6Pt1)：G1233-1245．14．VillanacciVAnneseVCuttittaA，FisogniS，ScaramuzziGDeSantoE，CorazziN．BassoRiG：Animmunohistochemicalstudyofthemyentericplexusinidiopathicachalasia．JClinGastroenterol2010，44(6)：407-410．15．BassottiGVillanacciVMaurerCA，FisogniS，DiFabioF，CadeiM，MorelliA，PanagiotisT，CathomasGSalerniB：Theroleofglialcellsandapoptosisofentericneuronesintheneuropathologyofintractableslow65 泸州医学院硕士学位论文transitconstipation．Gut2006，55(1)：41-46．16．RolleU，Piaseczna—PiotrowskaA，PurlP：InterstitialcellsofCajalinthenormalgutandinintestinalmotilitydisordersofchildhood．PediatrSurgInt2007，23(12)：1139-1152．17．ChoiKM，GibbonsSJ，Roeder儿，LurkenMS，ZhuJ，WoutersMM，MillerSM，SzurszewskiJH，FarrugiaG：RegulationofinterstitialcellsofCajalinthemousegastricbodybyneuronalnitricoxide。NeurogastroenterolMotil2007，19(7)：585·595．18．WoutersMM，GibbonsSJ，Roeder儿，DistadM，OuYStregePR，SzurszewskiJH，FarrugiaG：ExogenousserotoninregulatesproliferationofinterstitialcellsofCajalinmousejejunumthrough5-HT2Breceptors．Gastroenterology2007，133(3)：897-906．19．LiuHN，OhyaS，NishizawaYSawamuraK，IinoS，SyedMM，GotoK，ImaizumiYNakayamaS：Serotoninaugmentsgutpacemakeractivityvia5-HT3receptors．PLoSOne2011，6(9)：e24928．20．Tanahashi髟WakiN，Unno石MatsuyamaH。IinoS?KitazawaZYamadaM，KomoriS：RolesofMandMmuscarinicreceptorsinthegenerationofrhythmicmotoractivityinmousesmallintestine．NeurogastroenterolMotil2013．21．ForsterJ，DamjanovI，LinZ，SarosiekI，Wetzel只McCallumRW：AbsenceoftheinterstitialcellsofCajalinpatientswithgastroparesisandcorrelationwithclinicalfindings．JGastrointestSurg2005，9(1)：102—108． 泸州医学院硕士学位论文22．KnowlesCH，FarrugiaG：Gastrointestinalneuromuscularpathologyinchronicconstipation．BestPractResClinGastroenterol2011，25(1)：43—57．23．Faussone-PellegriniMS，CortesiniC：Themusclecoatoftheloweresophagealsphincterinpatientswithachalasiaandhypertensivesphincter．Anelectronmicroscopicstudy．JSubmicroscCytol1985，17(4)：673—685．24．VanderwindenJM，LiuH，DeLaetMH，VanderhaeghenJJ：StudyoftheinterstitialcellsofCajalininfantilehypertrophicpyloricstenosis．Gastroenterology1996，111(2)：279-288．25．VanderwindenJM，LiuH，MenuRConreur几，DeLaetMH，VanderhaeghenJJ：Thepathologyofinfantilehypertrophicpyloricstenosisafterhealing．JPediatrSurg1996，31(11)：1530-1534．26．HeCL，SofterEE，FerrisCD，WalshRM，SzurszewskiJH，FarrugiaG：Lossofinterstitialcellsofcajalandinhibitoryinnervationininsulin—dependentdiabetes．Gastroenterology2001，121(2)：427—434．27．NakaharaM，IsozakiK，HirotaS，VanderwindenJM，TakakuraR，KinoshitaK，MiyagawaJ，ChenH，MiyazakiYKiyoharaTetal：DeficiencyofKIT-positivecellsinthecolonofpatientswithdiabetesmellitus．JGastroenterolHepatol2002，17(6)：666—670．28．DeGiorgioR，SamelliGCorinaldesiR，StanghelliniV：Advancesinourunderstandingofthepathologyofchronicintestinalpseudo—obstruction．Gut2004，53(11)：1549-1552．29．StreutkerCJ，HuizingaJD，CampbellF，HoJ，RiddellRH：LossofCDl1767 泸州医学院硕士学位论文(，c—kit)-andCD34-positiveICCandassociatedCD34一positivefibroblastsdefinesasubpopulationofchronicintestinalpseudo—obstruction．AmJSurgPathol2003，27(2)：228—235．30．ShafikA，ShafikAA，E1一SibaiO，MostafaI洲：ElectricactivityofthecoloninsubjectswithconniptionduetototMcolonicinertia：anelectrophysiologicstudy．ArchSurg2003，138(9)：1007—1011；discussion1011．31．AmiotA，Cazals—HatemD，JolyF，Lavergne·SloveA，PeuchmaurM，BouhnikYBedossaP'MessingB：Theroleofimmunohistochemistryinidiopathicchronicintestinalpseudoobstruction(CIPO)：acase-controlstudy．AmJSurgPathol2009，33(5)：749·758．32．YamatakaA，Kato髟TibboelD，Murata髟SueyoshiN，Fujimoto互NishiyeH，MiyanoT：Alackofintestinalpacemaker(c-ht)inaganglionicbowelofpatientswithHirschspmng’Sdisease．JPediatrSurg1995，30(3)：441-444．33．RolleU，PiotrowskaAP,NemethL，PuffP：AltereddistributionofinterstitialcellsofCajalinHirschsprungdisease．ArchPatholLabMed2002，126(8)：928-933．34．NewmanCJ，LauriniRN，LesbrosYReinbergO，MeyratBJ：InterstitialcellsofCajalarenormallydistributedinbothganglionatedandaganglionicbowelinHirschsprung’Sdisease．PediatrSurgInt2003，19(9-10)：662—668．68 泸州医学院硕士学位论文35．TaguchiT，SuitaS，MasumotoK，NadaO：Universaldistributionofc-kit—positivecellsindifferenttypesofHirschsprung’Sdisease．PediatrSurgInt2003，19(4)：273-279．36．BreuerC，OhJ，MolderingsGJ，SchemannM，KuchB，MayatepekE，AdamR：Therapy—refractorygastrointestinalmotilitydisorderinachildwithc-kitmutations．WorldJGastroenterol2010，16(34)：4363—4366．37．KennySE，ConnellMGRintalaRJ，VaillantC，EdgarDH，LloydDA：AbnormalcolonicinterstitialcellsofCajalinchildrenwithanorectalmalformations．JPediatrSurg1998，33(1)：130-132．38．MacedoM，Martins儿，MeyerKF,SoaresIC：Studyofdensityofinterstitialcellsofcajalintheterminalintestineofratswithanorectalmalformation．EurJPediatrSurg2008，18(2)：75—79．39．FarrugiaG：InterstitialcellsofCajalinhealthanddisease．NeurogastroenterolMotil2008，20Suppl1：54-63．40．HuizingaJD，ThunebergL，VanderwindenJM，RumessenJJ：InterstitialcellsofCajalastargetsforpharmacologicalinterventioningastrointestinalmotordisorders．TrendsPharmacolSci1997，18(10)：393—403．41．Yun眦SungR，KimYC，ChoiW’KimHS，KimH，LeeGJ，YouRY,ParkSM，YunSJetal：RegionalDistributionofInterstitialCellsofCajal(ICC)inHumanStomach．KoreanJPhysiolPharmacol2010，14(5)：317-324．42．MuravyovAV,YakusevichVV,ChuchkanovFA，MaimistovaAA，Bulaeva69 泸州医学院硕士学位论文sv,ZaitsevLG：Hemorheologicalefficiencyofdrugs，targetingonintracellularphosphodiesteraseactivity：invitrostudy．ClinHemorheolMicrocirc2007，36(4)：327—334．43．KimTW,BeckettEA，Hanna＆KohSD，OrdogT，WardSM，SandersKM：Regulmionofpacemakerfrequencyinthemurinegastricantrum．JPhysiol2002，538(Pt1)：145—157．44．HwangMWKimJN，SongHJ，LimB，KwonYK，KimBJ：EffectsofLizhongTangonculturedmousesmallintestineinterstitialcellsofCajal．WorldJGastroenterol2013，19(14)：2249．2255．45·MiaoB，ZhangS，WangH，YangT，ZhouD，WangBE：Magnololpretreatmentpreventssepsis—inducedintestinaldysmotilitybymaintainingfunctionalinterstitialcellsofCajal．Inflammation2013，36(4)：897．906．46．ChoiS，ChoiJJ，JunJY,KohJW,KimSH，KimDH，PyoMYSonJP,LeeI，SonMetal：InductionofpacemakercurrentsbyDA．9701，aprokineticagent，ininterstitialcellsofCajalfrommurinesmallintestine．MolCells2009，27(3)：307—312．47．LeeTH，ChoiJJ，KimDH，ChoiS，LeeKR，SonM，JinM：GastroprokineticeffectsofDA一9701，anewprokineticagentformulatedwithPharbitisSemenandCorydalisTuber．Phytomedicine2008，15(10)：836-843．48．IshiiS，ZsujiS，TsujiiM，NishidaT，WatabeK，IijimaH，TakeharaT，KawanoS．HayashiN：RestorationofgutmotilityinKit．deficientmiceby70 泸州医学院硕士学位论文bonemarrowtransplantation．JGastroenterol2009，44(8)：834．841．49．LinL，XuLM，ZhangW，GeYB，TangYR，ZhangHJ，LiXL，ChenJD：RolesofstemcellfactoronthedepletionofinterstitialcellsofCajalinthecolonofdiabeticmice．AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol2010，298(2)：G241·247．50．McCannCJ，HwangSJ，BayguinovYCollettiEJ，SandersKM，WardSM：EstablishmentofpacemakeractivityintissuesallotransplantedwithinterstitialcellsofCajal．NeurogastroenterolMotil2013，25(6)：e418．428．71 宦蓐缮^菇{匕景点√8wcjdC矾vjgnet．com文献综述REVIEW世界华人消化杂志2013年12月18日：21(35)：3965—3970ISSN1009—3079(print)ISSN2219·2859(online)Cajal间质细胞与肠易激综合征关系的研究进展李泽培，邱野，彭燕李泽培．邱野，彭燕．泸州医学院附属医院消化内科四川省sensitivity；Gastrointestinalhormone泸州市6461XXl李泽培，硕士研究生．主要从事胃肠动力方面的研究作者贡献分布：本综述由李泽培完成：文献资料由邱野收集：彭燕审校．通讯作者：彭燕，教授．主任医师．646000，四JIl省沪州市太平街25号，泸州医学院附属医院消化内科．1806857826@qq．com电话：0830—3165331收稿日期：2013—08—15谚回日期：2013—10—13接受日期：2013—10—30在线出版日期：2013-12—18RelationshipbetweeninterstitialcellsofCajalandirritablebowelsyndromeZe-PeiLi，YeQiu，YanPengZe-PeiLi，YeQiu，YanPeng，DepartmentofGastroenter-ology．theAffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege．Luzhou646000．SichuanProvince，ChinaCorrespondenceto：YahPeng，Professor,ChiefPhysician，DepartmentofGastroenterology,theA衔liatedHospita】ofLuzhouMedicalCollege．25TaipingRoad，Luzhou646000，SichuanProvince．China．1806857826@qq．comReceived：2013-08．15Revised：2013-lo-13Accepted：2013-1m30Publishedonline：2013-12-18AbstractInterstitialcellsofCajalarethepacemakerofgastroIntestinaltract，whichcangenerateehc-tricalsignals。conductslowwavesandregulateneurotransmitters．Irritablebowelsyndrome(IBSlisacommongastrointestinaldiseasewhosepathogenesisisverycomplicated．involvinggas·trointestinalmotilitydisorders，visceralhyper—sensitivity．irifectionandabnormalsecretionofgastrointestinalhormones．Inrecentyears，ithasbeenfotmdthatthereareassociationsbetweeninterstitialcellsofCajalandgastrointestinalmotilitydisorders．visceralhypersensitivityandabnormalsecretionofgastrointestinalhormones．Inthispaper，wewillreviewtherecentprogressinunderstandingtherelationshipbetweeninter—strialcellsofCaialandIBS．@2013BaishidengPublishingGroupCo。Umited．AIrightsreserved．KeyWords：InterstitialcellsofCajal；Irritablebowelsyndrome；Gastrointestinalmotil耐；Visceralhyper-投国艄‘i■一4WCJDIWVC'Wwjgnet．cornLiZP。OiuY，PengY．RelationshipbetweeninterstitialcellsofCaMandirritablebowelsyndrome．ShijieHuarenXiaohuaZazhi2013；21(35)：3965—3970URL：http：／／、Jl，、俐．wjgnet．com／1009·3079／21／3965．aspDOI：http：／／dx．doi．org／lO．11569／wcjd．v21．135．3965摘要Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal。Icc)是胃肠慢波的起搏细胞，具有产生自发电信号、传导慢波电位、调节神经递质等功能，是调节胃肠动力的重要环节．肠易激综合征(irritablebowelsyndrome，IBS)是临床上常见的一种消化系统疾病，其发病机制十分复杂，目前主要认为与胃肠运动异常、内脏高敏感、感染、胃肠激素分泌异常等多种因素有关．近年来越来越多的研究表明。IBS存在ICC的形态和数量的异常，ICC与胃肠动力异常、内脏高敏感、感染后IBS以及胃肠激素分泌异常等的发生有一定联系，ICC可能参与IBS的发病过程，本文就二者的关系作一综述．@2013年版权归百世登出版集团有限公司所有关键词：Cajal阃质细胞；肠易激综合征；胃肠动力；内脏高敏感；胃肠激素核心提示：Cajall瓷']质细胞(interstitialcellsofCajal，ICC)是胃肠慢波的起搏细胞，具有产生自发电信号、传导慢波电位、调节神经递质等功能．是调节胃肠动力的重要环节．近年来研究认为肠易激综合征(irritablebowelsyndrome．IBS)存在ICC的形态和数量的异常．ICC与胃肠动力异常、内脏高教感、感染后IBS≯X及胃肠激素分泌异常等的发生有一定联系，本文综述二者的关系．李泽培．邱野，彭燕．Cajal间质细胞与肠易激综合征关系的研究进展世界华人消化杂志2013；2t(35)：3965—3970URL：http：／／www．wjgnet．com／1009-3079／21／3965．aspDoI：http：／／dx．doi．org／10．11569M,cjd．v21．i35．3965●背景资料肠易激综合征rirritablebowelsyndrome．IBS)是临床上常见的一种消化系统疾病．其病因和发病机制目前仍不十分明确．近年来研究认为Caial问质细胞(interstitialcellsofCaial，ICC)与IBS的发病有一定联系，ICC在lBS发病中的作用逐渐受到重视．●同行评议者0引言嚣墓磊竺殳肠易激综合征(irritablebowelsyndrome，IBS)足民医院消化内科2013—12—18lVolume21IIssue35 ISSN1009·3079(print)ISSN2219-2859(online)世界华人消化杂志2013年12月18E3第21卷第35期_研发前沿一种以爿l{痫、腹部4i适伴排便习惯改变为特征I关CC系-与．探m黧鬣器的功能性胃肠病，其发病牢较高，且病因和发病发病机制，进而机制尚不十分清楚．目前认为IBS的发病主要与萋囊。B8的诊疗胃肠运动异常、内脏高敏感、感染、胃肠激素分泌异常等多种因素有关．Cajal问质细胞(inter-stitialcellsofCajal，icc)是胃肠慢波的起搏细胞，具有，觊生自发电信号、传导慢波电位、调节神经递质等功能．是调节胃肠动力的重要环节．近年来越来越多的研究发现，IBS存在ICC的形态和数量的异常”‘3l。且ICC与胃肠动力异常、内脏高敏感、感染后IBS的发病以及胃肠激素分泌异常等有一定联系，ICC可能参与IBS的发病过程．深入研究ICC与IBS的关系可能为IBS的病理研究及治疗提供新的认识．1ICC1893生1=，西班牙神经解剖学家Cajal平lJ用甲基蓝及嗜银染色法发现消化系存在一种特殊间质细胞，主要分布在消化系统自主神经末梢与平滑肌细胞之间，称为ICC．其后学者进行大量研究证实ICC是胃肠道的起搏细胞。具有产生自发电信号、传导慢波电位、调节神经递质等功能．ICC在维持正常胃肠动力方面发挥着重要作用，多种胃肠动力障碍性疾病也存在ICC结构与数量的异常．，CC基因表达产物C．kit的发现对ICC的研究具有重要意义．础，，是原癌基因。编码kit受体(酪氨酸激酶受体)，几乎所有的ICC都表达c．kit受体f4】．在胃肠道中仅有ICC和肥大细胞表达c．kit，ICC用甲苯胺蓝染色后不呈现异染性，而肥大细胞被染色后呈红紫色，借此可区别二者．c．kit受体的标志物及C．kitmRNA已成为研究ICC的有效工具，特别是c．kit免疫组织化学染色技术的运用加深了人们对ICC的人识．最近研究发现Anol(anoctaminl)也可用于ICC的标记，Anol在消化系统ICC所有亚型上均有表达，且其特异性较高睁J．干细胞生长因子(stemcellfactor,SCF)是c．kit受体的闩然配体，近年来研究发现C．kit／SCF途径财ICC的发生、发育及表型的维持具有重要作用．SCF与其受体C．kit结合可将细胞外信号转到细胞内部。引发某些基因的特异性表达，从而精确地调控ICC的分化与增殖．1．1ICC的分类与分布根据细胞形态、分布位置及与神经丛、平滑肌的空问关系可将ICC分为如卜种类陋1：(1)肌问lCC(myentericICC，IC．MY)，分别位于胃体、胃窦、小肠、结肠的环行肌与纵行肌之问的间隙巾；(2)黏膜下ICC(submucosal殴函墨：叶·WCJDl叭vw．wjgnet．cornICC．IC．SM)，沿着结肠环行肌束表厕的黏膜下层分布；(3)深肌层ICC(deepmuscularICC，IC—DMP)，多分布丁小肠，位丁．环肌内薄层与外厚层之间；(4)肌内ICC(intramuscularICC，IC—lM)，分别位于食管、胃底、胃体、结肠的肌层内．前两者主要参与胃肠起搏，后两者主要参与肠神经信号的传导【『”．ICCI“泛分布于胃肠道各肌层，如食管下括约肌‘引、胃底、胃体及胃蜜刚“、小肠‘nj、结肠¨21、胰腺‘131、胆囊⋯】．此外。ICC在胃肠外亦有分布，如～L输尿管‘”1、尿道‘161、子宫肌层‘m、门静脉‘博】、肠系膜动脉‘悖】、心肌细胞‘捌、输卵管及胎盘口”等．1．2功能ICC具有产生慢波，调节胃肠平滑肌收缩，传导肠道活动的电信号，调节神经递质等功能．1．2．1胃肠起搏：近年来的研究证明，ICC产生慢波，是胃肠道的起搏细胞．慢波决定着平滑肌细胞的收缩节律，调控胃肠道运动发生的时间、地点、频率和方向．ICC的发育及功能维持需要C．kit的表达．自发性c．kit突变W／Wvd、鼠小肠ICC的发育受损，其小肠不能产生慢波R2,231．有关ICC产生慢波的机制目前尚无定论．有学者认为，慢波的产生是由于氯通道的开放使ICC膜电位去极化，但氯通道缺乏特异的阻滞剂．不能被特异性阻断进行研究．最近研究发现Anol蛋白(钙激活氯通道蛋白)参与慢波的产生，为氯通道产生慢波的假说提供了支持【241。也有学者认为慢波的产生是由于ICC产牛TCa引调节的、电压依赖的非选择性钙离子电流，依据是研究发现采用钙通道抑制剂后，未对1CC的电活动产生明显影响，细胞PbCa2+浓度的变化可以改变ICC的电活动㈣．1．2．2传导慢渡电位：ICC是慢波电位的传播者，其中ICC．IM、ICC．DMP是慢波电位传导系统的主要参与者．ICC的长突起与肌纤维平行走行，而从长突起发出的细小突起则与肌纤维及其他的ICC相联系。细胞问的连接为缝隙连接，为电信号传递提供了途径．起源于ICC．MY的慢波沿着ICC．IM、ICC．DMP形成的神经样网络传导，最终通过缝隙连接将慢波信号传导至胃肠道平滑肌系统．1．2．3介导神经信号传导：ICC是肠神经系统·p传递神经递质的中介．ICC与平滑肌及神经问距仅为20nm左右，远小丁神经和平滑肌之问的距离，ICC与神经轴突接触仆常紧密，通过突触前后膜的特殊连接，形成神经元与ICC的密切关2013—12·18IVolume21}Issue35 李泽培，等．CajalI司质细胞与肠易激综合征关系的研冤进展3967系∞J．ICC细胞膜上有多种神经递质受体，包捅牛长．郝筱倩等m1报道腹泻型IBS患者的症状与一相关报道P物质、一氧化氮(No)、血管滔性肠肽(vasoac．小肠消化间期MMc周期缩短、IiI女11波幅升南、’IB；#il琵菇葛tineintestirlalDeDtide．viP)等．是胃肠活动电信时程延长、传导速度加快有艾．便秘型IBS患者和数量的异常．号传递至平滑声L晶介矗[27j．茜肠道神经元释放递的MMc则与之相反．No对MMc有一定影响，内：芸澎茹辇!篙质，与ICC表嘶受体结合，ICC通过缝隙连接介导源性NO口J‘使MMC周期缩短，而抑甫i]NO的合成妻竺!釜苎：，羔神经信号传递至胃肠道平滑肌细胞，使之去极可使MMC周期延长【3“．ICC上存在NO受体，能合联系中断，功能上，目∥0；wH巳·‘．Jo|wY化或超极化，从而产生兴奋或抑制效果．成No，对氮能神经递质的作用起放火效应p71．推嚣吐；鏊喜翥测lcc可通过影响No的合成参与MMc的调节．商毒≮．一‘2ICC-与IBS2．1．3lCC&高幅收缩波：正常人体结肠收缩时研究发现，mS存在ICC的形态和数量的异常．Jee收缩压力>50mmHg且传橘距离超过10cm时称等⋯报道感染后IBs模型大鼠小肠细菌过生长为高幅收缩波(highamplitudepropagatingc011-t-jICC—DMP[㈣-关．刘书中等旺1报道感染tractions，HAPCsPl，这种收缩可引起痉挛性排后IBS模型组lCC出现超微结构损伤，与周围细便．近年来研究认为HAPCs与IBs患者腹痛的发胞缝隙连接减少．韩真等[3]报道IBS模型大鼠小生有一定关系．Chey等Ⅲ1报道便秘型IBS患者肠、结肠组织的c-kit表达显著增强，并认为lCCHAPCs减少。而腹泻型IBs患者则与之相反．ICC可能在腹泻型IBS发病中有重要意义．参-qHAPCs的产生过程，PIuia等舯1报道分布在2．1ICC-七Jms胃肠动力异常肠道运动异常是IBS结肠肌间神经丛的ICC．MP参与HAPCs的产生．的常见临床表现，而肠道运动异常与ICC结构功因此，lCC可能通过产生HAPCs参与IBS的发病能的损伤密切相关例．ICC是胃肠慢波的起搏细过程．胞，是调节胃肠动力的重要环节口引．ICC损伤或2．2ICC与IBS内脏高敏感内脏高敏感是IBS的缺失均有可能导致胃肠动力障碍，而动力异常是重要病理生理指标之～，是产生疼痛的主要因IBS症状产生的病理生理基础之一．贾后军等斟”素．IBS彭．I内脏高敏感表现为对生理性刺激出现报道IBS中腹痛腹泻等胃肠动力改变可能-七jlcc的不适感，对伤害性刺激呈现的强烈反应㈣．丁的结构与功能损伤相关．众多研究表明IBS患者瑞峰等⋯1报道内脏高敏感大鼠结肠lCC细胞数存在全胃肠道动力紊乱．周婷等pu报道慢性综合较对照组明显增加．并认为Icc增多可能是内脏应激使大鼠肠道ICC超微结构发生改变、数量高敏感的发生机制之一．研究发现，IBs存在着减少，与周围平滑肌和神经末梢之间的缝隙连胃肠道黏膜局部炎症反应，而此、c基因表达产物接显著减少，进而认为ICc形态结构改变可能是c-kit的配体．SCF可分泌大量c-kit激酶，该激酶应激所致功能性胃肠病动物模型胃肠运动异常可导致肥大细胞、单核细胞活化增殖进而引发的重要环节．肥大细胞、单核细胞在肠道火量浸润[22,42,43】．同2．1．1Icc与慢波：ICC产生慢波，是胃肠道的起时，ICC的存活与发育需要c．kit／SCF信号途径调搏细胞。其中胃和小肠的慢波r}1lcc·MP、ICC·控．SCF的过度激活可能在内脏高敏感的发生中IM产生，而结肠的慢波主要rhlCC-SMP产生I强1．起重要作用．张静瑜等1441用旋毛虫感染大鼠复慢波决定着平滑肌细胞的收缩节律，调控胃肠道制IBS模型，当给T,IBS大鼠结肠扩张刺激时，其运动发生的时间、地点、频率和方向．有研究认ICC活化程度、腹直肌肌电变化及支配左半结为IBS患者胃肠道存在异常慢波．Shafic等p副报道肠运动的骶髓后连合核放电频率显著增强，当IBS患者出现类似快速心律失常波形的异常慢给予SCF／c．kit特-异性阻断剂甲磺酸伊马替尼后．波．Wang等p41用旋毛虫诱导lBs动物模型，发现IBS大鼠因扩张刺激所产生的内脏痛反应、c．kitICC出现电活动异常，并失去电活动同步性，出表达及骶髓后连合核放电频率均显著降低．提现多个异位起搏点，造成电失偶联的发生雨1局示SCF活化在JBS内脏高敏感中起重要作用．内部慢波频率紊乱．IBS患者胃肠道的异常慢波可脏高敏感的发生机制仍不十分清楚，目前认为能与ICC的异常有关．肠神经系统及多种神经递质在外周、脊髓及中2．1．2lCC与消化问期移行性复合运动：消化问期枢参与内脏高敏感的调控．ICC与神经轴突接触移行性复合J．垂_(migratingmotorcomplex，MMC)非常紧密，通过突触前后膜的特殊连接，形成神IIl期对清除消化问期未消化的残食具有币要意经元与lCC的密切关系126】，ICC具有接受、传递义，并能防止小肠淤滞，从而防止肠道细菌过度兴奋与抑制性神经递质的作用．ICCflH胞膜上匿西蒜k—WCJDIWWW．wjgnet．corn2013—12·18IVolume21lIssue35l 3968ISSN1009—3079(print)ISSN2219-2859(online)世界华人消化杂志2013年12月18B第21卷第35期_创新盘点存在多种受体如毒蕈碱M2、M3受体、神经激妻麦要iFX餮；肽受体、vTP受体和五羟色胺(5．hydr。xytrypta．188誊病6登系，mine，5-HT)受体，并可观察到Icc对乙酰胆碱、努崭B、8蓦差茎NONO、VIP、P物质等神经递质均有反应m】．因此，力异常、内脏高、物质等神经边质均有反应p“．因此，募霪鼻亲鬟釜橐ICC可能通过介导ENs神经信号的传导参与内后IBs的关系．脏高敏感的形成过程．2．3ICC与感染后IBS临床上部分被肠道病毒、细菌或寄生虫感染者．在病原体已清除及黏膜炎症消退后，仍可发生IBS样症状，对此称为感染后IBSf451．研究发现感染后IBS动物模型存在ICC数量及形态异常．Jee等Il】报道感染后IBS模型大鼠小肠细菌过生长与ICC．DMP的减少有关．刘书中等121报道感染后IBS模型组ICC出现超微结构损伤，与周围细胞缝隙连接减少．有研究认为炎症可以导致ICC损伤，从而引起胃肠动力紊乱．Lu等【461报道肠道炎症模型狗慢波波幅缩小，且波幅的缩小与环形SLICC的损伤有关．因此，ICC形态及数量的异常可能与感染后IBS的发病有关．2．4ICC与IBS胃肠激素异常目前研究认为胃肠激素的异常是IBS的发病机制之一，众多研究也发现IBS患者存在胃肠激素表达异常m’48】．ICC上存在多种胃肠激素受体，ICC可能通过介导胃肠激素参．-与IBS的发病过程。2．4．1ICC与五羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)：IBS患者胃肠道存在5．HT表达的异常147,49,50]．Dun-lop等【41报道便秘型IBS患者血浆5．HT水平降低，而腹泻型IBS患者血浆5．HT水平升高．5-HT是一种旁分泌信使，其作为感觉换能器，刺激内源性和外源性初级传入神经元，分别引起蠕动和分泌反射并将信号传送到中枢神经系统．研究发现ICC细胞膜上表达五羟色胺(5．HT)受体13”，ICC可能通过中介5．HT引起IBS症状的产生．同时，5．HT对ICC亦有一定影响，Wouters等p’】报道5．HT2B受体通过激活蛋白激酶C叫介导ICe增值．2．4．2ICC与缩胆囊素及神经激肽：近年研究发现某些肽类激素如缩胆囊素、神经激肽等可能与IBS症状有关，这有助于解释胃肠动力异常、内脏高敏感及精神因素之间的内在联系．Zhang等娜J报道TBS患者血浆和肠组织缩胆囊素水平较正常人明显升高，而神经肽Y水平降低，且腹泻型IBS患者较便秘型IBS忠者降低更明显．ICC表达缩胆囊素受体、神经激肽受体，并可观察至O]cc对缩肌囊素、神经激肽均有反应p7-521．I：!il此，ICC可能通过中介缩胆囊素、神经激肽等递质参与IBS的发病过程．医西嚣knWCJDIx,vvg％v．wjgnet．com3结论ICC与-IBS有。定关系，ICC口J能参与IBSfl',J发病过程．但ICC在IBS发病rI、的确切机制尚刁i明了，有待于进一步研究．随着对ICC生理功能及病理改变研究的深入，人们对丁．1BS的认识和诊治水平可能会得到提高．深入开展ICC与IBS关系的研究将可能为IBS的病理研究及治疗提供新的认识．4参考文献lJeeSR，MoralesW，LowK．ChangC，ZhuA，Pok—kunuriV，ChatterjeeS，SofferE。ConklinJLPimen．telM．ICCdensitypredictsbacterialovergrowthinaratmodelofpost．infectiousIBS．WorldJGastro—enterol2010；16：3680—3686【PMID：20677340DOI：10．3748／州g．v16．i29．3680l2刘书中，陈睨锴，郑双英．沈世强．跨骥蛋白16A介导感染后肠易激综台征中自细胞介素-4对Cajal细胞损伤的机制中华实验外科杂志2013；30：958·9603韩真，王运东．腹泻型畅易激综合征模型大鼠肠道Cajal间质细胞的变化及意义中国病理生理杂志2008：24：2263—2264．22714VannucchiMG．ReceptorsininterstitialcellsofCajal：identificationandpossiblephysiologicalroles．MicroscResTech1999；47：325．335【PMID：10602292DOI：10。1002／(SICI)1097一0029(19991201)47】5SandersKM．ZhuMH，BrittonF，KohSD，WardSM．Anoctaminsand譬astrojntestinalsmoothmuscleexcitability．ExpPhysioJ2012；97：200—206『PMID：22002868DOI：10．1113／expphysi01．2011．05824816SandersKM．AcaseforinterstitialcelIsofCajaiaspacemakersandmediatorsofneurotransmissioninthegastrointestinaltract．Gastroenterology1996：l11：492．515【PMID：8690216DOI：10．1053／gast．1996．vll1．pm869021617WardSM．SandersKM．HirstGD．Roleofintersti．tialcellsofCaialinneuralcontrolofgastrointestinalsmoothmuscles．NeurogastroenterolMotil2004；16Suppll：112．117fPMID：15066015DOI：10．111l／i．1743．3150．2004．00485．xI8TDrihashiS．HorisawaM．WatanabeY．c-Kitimmu—noreactiveinterstitialcellsinthehumangastroin．testinaltract．JAutonNervSrst1999；75：38—50[PMID：9935268D01：10．1016／S0165．1838(98)00174．XI9HirstGD．BeckettEA，SandersKM，WardSM．RegionalvariationincontributionofmyentericandintramuscularinterstitiaIcellsofCa]altogen-erattonofslowwavesinmousegastricantrum．JPhysiol2002：540：1003—1012『PMID：11986385DOI：10，1111／i1469．7793．2002．t01．1．01003．x】10MazetB．RaynierC．InterstitialcellsofCajalintheguineapiggastricantrum：distributionandregionaldensity．CellTJssueRes2004：316：23．34fPMlD：14986098DOI：10．1007／s00441．003．0835-9111RomertP．MikkelsenHB．c-kitimmunoreactiveinterstitialcellsofCajalinthehumansmallandlargeintestine．HistochemCejjBJoJ1998；109：195—202IPMID：9541467112MazziaC。PorcherC，Jul6Y．ChristenM0．HenryM．Ultrastructuralstudyofrelationshipsbetweenc-kitimmunoreactiveinterstitialcellsandothercellularelementsinthehumancolon．HistochemCellBiol2013—12-18IVolume21IIssue35l 131415161718192l2526李泽培．等．CajaI间质细胞与肠易激综合征关系的研究进展2000：113：40l-41¨PMID：10嬲3399】PopescuLM，HinescuME．IonescuN．CionteaSM，CretoiuD．ArdeleanC．InterstitialcellsofCajalin∞ncreas．JCPJJMDJM耐2005：9：169．190IPMID：15784175DOI：lO．1111／i．1582．4934．2005．tb∞347．xlXuD．YuBP．LuoHS．ChenLD．ControlofgaIl-bladdercontractionsbYcholecVstokininthrou簧hcholecystokinin．Areceptorsongallbladderin．terstjtjalcellsofCalal．WorJdJGas￡r∞n幼．0j2008：14：2882．2887IPMID：18473415DOI：10．3748／州g．14．2882lLan壁科，KlemmMF．InterstitialcellofCajal—likecelIsintheupperurinarytract．JCeJJMoJMed2005：9：543—556fPMlD：16202204DOI：lO．1ll1／i．1582．4934．2005．tb∞487．xlSer叠eantGP．HollWvoodMA．McHaleNG，Thom-bun，KD．Ca2+signaIlinginurethralinterstItialcellsofCaIal．J勋”j0』2006：578：715—720IPMID：16916912DOI：lO．1113／iphysj01．2∞6．115956lCjonteaSM．RaduE．Re趸aliaT。CeafjlanL，Cre—toiuD，Gher曲iceanuM．Bra譬aRI．MalincencoM．za耵eanL，HjneScuME，PopescuⅢ．C粕timmu-nopositiveinterstitiaIceIIs(Caial·type)inhumanmyometrium．JceJjMDJ^fed2005：9：407-420lPMlD：15963260DOI：lO．111l／i．1582．4934．2∞5．tb∞366．xlHarhunMI．GordienkoDV。PovstyanoV．M∞sRF．BoltonTB．Functionofinte贼iualcelIsofCaialinthe蒯bnponalveiTl．CjrcRes2∞4：95：619．626IPMID：15331453DOI：10．116I／01．REs．∞00143014．04535．a3lPucovsk审V．MossRF，Bolton11B．Non—contractiIecellswiththinprocessesresemblin譬interstitialcelIsofCaialfoundinthewaUofguin∞-pigm岱-entericaner池．JPhysjoj2∞3：552：119-133IPMID：12897177DOI：10．1113／iphysioI．2003．046243lPoDescuLM．GherghiceanuM，HinescuME，Cre·toiuD．CeafalanLRegaliaT，PopescuAC，Arde—l龃nuC，MandacheE．Insi足htSintot11einterstitiumofventrjcularmyocardjum：interstilialCa{a】．1ikecellsⅡCLC)．JCeJJMoJMed2006：10：429-458IPMID：16796810DOI：10．111l／i．1582—4934．2006．tb∞4lO．x1SuciuL．PopescuLM。GherghiceanuM．Humanplacenta：deviSudemonstrationofinterstitialC囊jal．1ikecelIs．JceJJM0』M甜2007：ll：590-597IPMID：17635651DOI：10．111l／i．1582．4934．2007．00058．xlHulzingaJD，ThunebergL，KlnppelM。MalyszJ，MikkelsenHB，BemsteinA．W／kitgenerequiredforjnlerstIliaJcel】sofCa{aIandforjntestinaIpace-makeractjvity．^『a￡ure1995：373：347·349【PMID：75303331WardSM．BumsAJ．TbrihashiS．Sande体KM．Mu—tationoftheproto．oncogenec—kitbIocIcSdevelop·mentofinterstitialcellsandelectricaIrhvthmicityinmurineint鹤tine．Jf)hysjoJl994：4∞(Pt1)：9l·97【PMID：7853230lStanichJE。GibbonsSJ，Eisenman汀．BardsleyMR，RockJR．Ha睡BD．0rdogT．Faml幽G．Anol笱aregulatorofprollferation．AmJPh”jojGastrojn—fe5fLjverPh邗jDJ201l：30l：G1044一G105l【PMID：21940901DoI：lO．1152／ajp疏ool96．20llJPerrinoBA．Regulationof砭astrointestinalmotil—itvbVCa2+／calmodulin—stimuIatedprOteinkinase11．ArchBiochemBiophys20ll：510：174-181【PMID：21443856DoI：10．1016／i，abb．Z0儿．03．009】WardSM．BeckettEA．WangX．BakerF．KhoyiM。SandersKM，InterstjtialcellsofCajalmediatecholiner印cneurotransmissionfromente订cmo—torneuronS．JNeumscj2000：20：1393．1403IPMID：画嚣k—wcJDIⅥ删．川gnet．com303l34404I42396910662830】●应用要点I抽oS．HoriguchiK．Interstitjalcelbofcaialarein．深入研究ICC与volvedinneurot阳鹏mi鹞ioninmeg硒trointestinalIBS发病的关系，tract．Ac阳H』sfDchemC’，fochejT】2006：39：145．153有助于提高人们【PMID：1732790lDOl：加．1267／ahc．06023】对于IBs的了解，SpillerR．GarsedK．Postinfectiousirritablebowel可能会为lBS的病s_；；rndrome．Gastroenterojogy2009：136：1979．1988理研究及治疗提I毒M1D：19457422DoI：10．1砧3以鼬哦m．2009．02．074】供斯的认识·GibbonssJ，DeGiorgioR．FaussonePene对injMS，Garrity—ParkMM，MiUerSM．SchmalzPF，Young-FadokTM．LarsonDW，Dozois嵇，CamilleriM，StaJl咖mniV，S踟rszdwski】H’Famt叠iaG．Apop-toticcelldeathofhumaninterstitialcelISofCajal．Neuro鼬stroenfer0』MocjJ2009：2I：85．93【PMID：18798796DoI：10．111l以1365．2982．2懈．01185．x】贾后军．童卫东．刘宝华．干细胞因子促进Cajal间质细胞恢复的研究．中华实验外科杂志2012：29：8踮．890岗婷，陈明锴．张丽，沈世强．罗和生．慢性综合应激对大鼠肠道Cajal间质细胞的影响中华实验外科杂志20ll：28．42．44LammerswJ，StephenB．Originandpropagationofindividualslowwavesalon皿theintactf色linesmallint船tine．￡j巾Pb”jDJ2∞8：93：334—346fPMID：18156170DOI：10．1l13／expphysi01．2∞7．039180】Sha丘kA，日．Sibai0．Shafil【从．Ahmed1．日ectncactivitVofthecoloninirritabkbowelsyndrome：the’tachyarrhythInic．elec砸cpanem．JGasf，De订删HepatoJ2004：19：20S．2lOlPMID：14731132DOl：10．11ll／{．1440·1746．20叫．03279．x】WangXY，VannucchiMG。NieuwmeyerF。YeJ。Fau豁one·PeUegriniMS，HuizingaJD．Changesininte体titiaIcelIsofCaialatt}ledeepmuscularplexusareassociated毗hlossofdiSten廿on．inducedburst’typemuscleacti、，ttV协lIIiceinf每ctedbyTrichinellaspiralis．AmJPa曲oJ2005：167：437·453IPMID：16049330DoI：10．1016／SO∞2—9440【lo)62988．4】郝筱倩，赵董．多种胃肠激素对肠易激综台征患者小阮运动功能的研究南方医科大学学报2007：27：1492．1495PowenAK。B¨，aterRA．Murineintestimlmjgrat．ingmOtorcompIexes：Iongitudinalcomponents．Neurogasrroenrer0JMofjJ2003：l5：245-256lPMID：12787334DOI：10．1046／i1365．2982．2003．00405．xIK0hSD'KimTw．Jun】Y．Gl瑟gawNJ，WardSM．SandersKM．RegulationofpacemakercurrentsininterstitialcellsofCaialfrommurinesmaIlintes—tinebvcvcljcnucleotid髂．J助涮川2000：527P￡1：149．162『PMID：10944178】Chev、^憎，JinHO．LeeMH．SunSW。L雌KY．Co．10nicmomityabno咖alitvinpatientswith洲tablebowelsVndromeexhjbitingabdominalpainanddi-arrh∞．A用JG笛㈣ncemJ2∞l：96：14∞一1506【PMID：11374689DOI：10．1016／S咖2．9270(01)02367．XlPlui矗L。AlbertIE，Fern矗ndezE，MikkelsenHB，Thunebe唱LJim垂nezM．踟dencesupponingpres·ence《fwopacemakersinralcolon．AmJ鼬蚓oJGasc删nf时Ljv"劭倒0j2∞l：281：G2S5．G266IPMID：114082791柯美云功能性胃肠病并非单纯功能病．中嘲实用内科杂志：临床前沿版2006：26：721．722丁瑞峰．王爱鱼，王宏杰，郭元虎．赵鹏程．j勺脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞C—KIT表达增加．基础医学与临床2012：32：566-5690hmanL．Simr垂nM．Patho窟enesisofIBS：roleofjnnammanon．immunitvandneurojmmuneinlerac—tjo璐．NarRPvGasCroenfer0JHeDaCoJ2010：7：163-173【PMID：20101257DOI：10．1038／nrgastro．2叭O．4】2013—12—18lVolume2lII骚ue35I 3970ISSN1009-3079(print)ISSN2219-2859(online)世界华人消化杂志2013：1丰-12月18日第21卷第35期■同行评价表文阐述lCC的分布、功能以及与IBS的关系．有助于对IBS的发病机制最新进展的了解．43444547BarbaraG．DeGiorgioR．StanghelliniV．CremonC．CorinaldesiR．Aroleforinflammationinirritablebowelsyndrome?GUt2002：5lSuppll：i41一i44lPMID：12077063D01：10．1136／gut．51．suppl_1．i41】张静瑜，黄裕新，泰明，王景杰SCF／c·kit过度激活在肠易激综台征内脏敏化中的作用山两医科大学学报2012：43：177一18lRubinG，DeWitN，Melneche．SchmidtV+SelfeftB．HalIN．HunginP．ThediagnosisofIBSinpri—marycare：consensusdevelopmentusingnominalgrouptechnique．FamP阳ct20∞：23：687-692IPMID：17062586DOI：10．1093／fampra／cml050lLuG，嘶XBere西nl，TI捌GLHuizingaJD，SarmSK．Inflammationmodulatestnvitrocolonicmyoelec·tricandconlractihactivityandinterstitialcellsofCa汹．AmJPhysiol1997；273：G1233￡1245IPMD：9435548JDunlopSP。ColemanNS，BlackshawE。PerkinsAC．SinghG。MarsdenCA．SpillerRC．Abnormali—tiesof5-hydroxytryptamlnemetabolisminirri—tablebowelsyndrome．CIinGastroenterolHepatoJ2005；3：349．357fPMID：15822040DOI：10．1016／S1542．3565(04)00726-814849505lZhangH．YanY．5biR．LinZ，WangM，LinL．Cor-relationofguthormoneswithirritablebowelsyn·drome．Digestion2008；78：72．76IPMID：18948690DOI：10．1159／000165352l李兆申，詹丽杏，邹多武，许围铭，满晓华，叶熙亭．肠易激综台征患者分泌5一羟包胺的肠嗜铬细胞形态及功能的改变．中华消化杂志2004：24：94·97朱艮如，谢／J、-'T-，钱伟，跌晓华．5一羟色胺在胃机械感觉过敏中的作用．q·华消化杂志2005；25：166·168WoutersMM．Roeder儿．TharayilVS，StanichJE，StregePR，LeiS，BardsleyMR．OrdogT。GibbonsSJ．FarrugiaG．ProteinkinaseC{gamma)mediatesregulationofproliferationbytheserotonin5-hy-droxytryptaminereceptor2B．JBjoJChem2009：284：21177．21184lPMID：19531484DOI：10．1074／jbc．M109．0158591PattersonLM，ZhengH，WardSM。BerthoudHR．1mmunohistochemicalidentificationofcholecys·tokininAreceptorsoninterstlttalcellsofCajal．smoothmuscle。andentericneuronsInratpylorus．CelJTj嬲ueRes2001；305：11．23【PMID：11512662D01：10．1007／s004410100402】编辑郭鹏电编鲁亚静灏ISSN1009．3079(print)1SSN2219-2859(online)DOI：10．115692013年版权归Baishideng所有《世界华人消化杂志》被评为中国精品科技期刊·消息·本刊讯2011．12．02，中围科学技术信息研究所在北京发布2010年中国科技论文统计结果，经过中国精，口l科技期11J遴选指标体系综合评价，《世界华人消化杂志》被评为2011年度中国精品科技期刊．中国精品科技期刊以其整体的高质量示范作用，带动我困科技期刊学术水平的提高．精fil,,"l-技期|1J的遴选周期为一i年【《世界华人消化杂志》编辑部)函嚣：叶一WCJDI、^，、vw．Wjgnet．com20t3—12—18lVolume21Iissue35l 泸州医学院硕士学位论文泸州医学院毕业硕士研究生学位论文独创性声明及发表承诺书本人声明所呈交的学位论文(已整理成发表形式)是我个人在泸州医学院导师指导下，由导师及泸州医学院提供一切科研条件的情况下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在即将毕业离校之际，本人郑重承诺：该论文将以泸州医学院的名义发表(论文作者为研究生及导师，作者所在单位为泸州医学院)，并在发表后立即将发表论文原件(期刊)寄与导师1册。学位论文作者签名：李弋智鸭同期：z口f中年上月≯矿日导师签名：同期：泸州医学院硕士学位论文版权使用授权书本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送交本人学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，允许有关部门或机构以电子出版物形式出版发行，并对外进行全文内容服务。本人授权泸州医学院可以将本人学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，进行数字化处理汇编、通过网络或其它途径进行交流传播，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印、扫描或其他复制手段保存和汇编学位论文，即泸州医学院具有本人学位论文的数字化制品复制权、信息网络传播权和汇编权。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。保密口，在——年解密后适用本授权书。本人提交的学位论文属不保恐D／(请在以上方框内打“√”)蔷翥茅篙麓名同期：Z9f眵年j月妒闩地址及邮政编码：联系电话：电子信箱：之聋鸽I导师签名导师签章同期：联系电话l弓6,q9蹦H∥Ⅲ19r蹦r乡厶一粒脚爹年