水浸束缚应激对大鼠下颌下腺内瘦素表达的影响

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1、水浸束缚应激对大鼠下颌下腺内瘦素表达的影响赵豫凤，刘广忠，杨加周，苗乃周【关键词】应激；水浸束缚；颌下腺；瘦素；大鼠　　Effectofmersionrestraintstresssonleptinexpressioninsubmandibularglandofrats　　【Abstract】AIM:Toobservethechangesofleptinexpressioninsubmandibularglandofratsfollomersionrestraintstressandtoexploretheeffectsandsignificanceofstressrespon

2、seonleptinsecretioninsubmandibulargland.METHODS:Tmersionrestraintstress(alcontrolgroup(n=10).Localizationanddistributionofleptininratsubmandibularglandmunohistochemistry,andtheconcentrationsofleptininserumandsubmandibularglandinedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).RESULTS：Leptinimmunore

3、activecellsainlylocatedintheepithelialcellsofthegranularconvolutedandstriatedducts.Theimmunoplexesoftheductsbutnotinthenuclei.Thestainingintensityforleptininthegranularconvolutedductuchhigherthanthatinstriatedduct.Theleptinstainingintheductsofsubmandibularglandinandsubmandibularglandarkedlyp

4、aredalcontrolgroup(P0.01).CONCLUSION:Leptinisandibulargland.andibulargland,andtheseresultssuggestedthatleptininsubmandibularglandmightbeinvolvedintheregulationofstressresponseprocess.　　【Keymersionrestraint;submandibulargland;leptin;rat　　【摘要】目的：观察应激状态下大鼠颌下腺内瘦素表达的变化，探讨应激反应对颌下腺瘦素分泌的影响及其意义.方法：采用

5、水浸束缚应激（ersionrestraint)组（n=10）和正常对照组（n=10）.采用水浸束缚应激模型〔4〕.乙醚麻醉下将大鼠四肢固定于特制的木板上，待动物清醒后，置于高约30cm的方形塑料桶内，桶内加入温度为21±1℃的冷水，使水面至大鼠的胸骨剑突，经10h后，即可成功诱发L注射器心内取血2mL于4℃静置2h，离心（7000r/min）20min取上清，-20℃保存备用.然后从颈部取出双侧颌下腺组织，一侧颌下腺于-70℃保存、留待ELISA检测；另一侧颌下腺组织入Bouins液固定24h后，常规脱水、石蜡包埋、制成厚5μm切片，分别裱贴于预先用APES(3aminopro

6、pyltriethoxysilane,Sigma公司)处理过的载玻片上，于37℃恒温箱烤干备用.　　1.2方法　　1.2.1免疫组织化学染色兔抗瘦素多克隆抗体购自武汉博士德公司（Boster）；生物素标记的羊抗兔IgG以及ABC试剂盒均购自Sigma公司.根据免疫组化ABC染色程序，取制备好的石蜡切片入二甲苯脱蜡10min×2次，无水乙醇漂洗5min×2次.新鲜甲醇配制的3g/L(V/V)双氧水漂洗30min，以消除内源性过氧化物酶.0.01mol/LPBS(pH7.3)漂洗5min×3次.用15g/L(V/V)正常羊血清封闭30min；甩去正常羊血清后，滴加第一抗体兔抗瘦素（

7、1∶200），4℃冰箱内孵育过夜；PBS漂洗5min×3次，滴加生物素标记的羊抗兔IgG(1∶400)，室温2h；PBS漂洗5min×3次，滴加ABC复合物1h(1∶200)；PBS漂洗5min×3次，DABH2O2显色8~15min；常规脱水、透明、DPX封片.用正常兔血清替代瘦素抗体作为第一抗体进行染色作为阴性对照实验.　　1.2.4颌下腺及血清中瘦素的检测瘦素ELISA试剂盒购自武汉博士德公司（Boster），具体操作步骤按试剂盒说明书进行.取冻存的颌下腺组织、称重，用2mL匀浆器匀浆