致病疫霉中致病相关mirna的挖掘及功能分析

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1、硕士学位论文致病疫霉中致病相关miRNA的挖掘及功能分析IdentificationandFunctionalAnalysisofPathogenicmicroRNAsinPhytophthoroinfestans学21118075完成日期：2Q!垒生垒月大连理工大学DalianUniversityofTechnology

2、JIlllJlllJlllIJlllllllrrlllllllllllJllJY2592086大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研

3、究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。学位论文题目：丝塑塑鍪之丝垄塑堡圭=坚丝塑堕至望堡兰垒作者签名：豸至笾硇日期：垄!!年—互月—t日大连理工大学硕士学位论文摘要microRNA(miRNA)是一类长约22nt的非编码小RNA分子，参与真核生物的生长发育和胁迫响应等过程。近年来，越来越多的研究表明，miRN

4、A在病原物与植物互作过程中起着重要的调节作用。致病疫霉(Phytophthorainfestans)可侵染番茄和马铃薯，造成严重的晚疫病，该病发生面广，影响甚大。但是，致病疫霉中miRNA的研究甚少，更没有与致病相关miRNA的挖掘报道。基于上述状况，本研究利用生物信息学方法，系统地预测了致病疫霉中致病相关的miRNA，并通过生物学实验验证了它们的功能。首先，借助计算机数据挖掘技术，共计预测到128个致病相关的miRNA，它们隶属于66个miRNA家族。通过致病相关miRNA关系网络的构建，初步筛选到能

5、形成网络的33个miRNA家族。分别挑选位于网络核心和边缘的各2个miRNA进行检测，顺利地验证到了pi．miR466和pi．miRl918。其次，通过实时定量分析pi．miR466和pi．miRl918的表达特性，发现二者的表达量均在致病疫霉处理番茄后的第二天变化明显，说明它们是致病相关的miRNA，可能在致病疫霉的致病过程中发挥着重要作用。最后，以拟南芥miRl59a的前体为骨架序列，成功地构建了amiR466表达载体及番茄叶片瞬时表达体系。过表达miR466可抑制晚疫病的发生，提高番茄的抗性。本研

6、究首次系统地预测并验证了致病疫霉中致病相关的miRNA，为阐明病原物与植物互作的分子机制奠定了基础。关键词：miRNA；致病疫霉；番茄；生物信患学；病原物与植物互作致病疫霉中致病相关miRNA的挖掘及功能分析IdentificationandFunctionalAnalysisofPathogenicmicroRNAsinPhytophthorainfestansAbstractBeingonel(indofapproximately22ntlongsmallRNAs．microRNAs(miRNAs)

7、haveshowntheirpivotalrolesinbothgrowthdevelopmentandstressresponses．Inrecentyears，moreandmoreresearcheshaveshownthatmiRNAsparticipateinregulatingtheprocessofpathogenandplantinteractions．Phytophthorainfestans(尸．infestans)isamajorpathogenthatcausesdevastat

8、inglateblightofpotatoandtomato．However，therehavebeenfewsystematicresearchesonmiRNAsinP．infestans，letaloneresearchesonpathogenicmiRNAs．Basedontheabove，byusingbioinformaticstrategies，wecomprehensivelypredictedandidentifiedpathogenicmiRNAsthatmayexistin尸．in

9、festans．Then，weanalysedthefunctionofpathogenicmiRNAinP．infestans,viamolecularbiologyexperiment．First，atotalof128putativemiRNAsbelongingto66miRNAfamilieswereidentifiedbybioinformaticapproaches．33vitalpathogenicmiRNAswerescr