缓激肽受体在炎性皮损区异常痒感觉中作用的研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文缓激肽受体在炎性皮损区异常痒感觉中作用的研究Roleofbradykininreceptorsonitchinducedbyalgogenandtouchininflamedskin课题来源：国家自然科学基金(81171040，81371236)广东省自然科学基金(10151008002000005)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员封居冕梁杰贤教授麻醉学专业型硕士第二临床医学院萤起2014年5月23日广州硕士学位论文呲㈣呲㈣m

2、㈣帆l吣眦帆Y2617715缓激肽受体在炎性皮损区异常痒感觉中作用的研究硕士研究生：封居冕指导教师：梁杰贤教授摘要搔痒(itch，orpruritus)是一系列皮肤疾病的主要症状，轻微的搔痒具有自我保护性生理作用，而慢性搔痒则是一个重要的临床问题。在很长一段时间内搔痒被认为是亚疼痛感受的一种，因此搔痒与疼痛是否通过同样的传导通路上传外界刺激的争议一直以来都存在。通常疼痛刺激可以减轻搔痒的感觉。缓激肽(bradykinin，BK)是公认的致痛剂，皮内注射后可产生烧灼样疼痛，但对于特应性皮炎患者来说，缓激肽却

3、可以引起皮损区明显的搔痒感，因而这是病理状态下的一种异常痒感觉。但目前用于研究皮炎的动物模型均会出现自发性搔抓，干扰目的指标的观察。而由完全弗氏佐剂(completeFreund’Sadjuvant，CFA)引起的慢性炎症模型可以排除这一干扰。我们的前期研究则发现，致痛剂辣椒素可引起CFA炎性皮损区的颈背部搔抓，并且这种搔抓可被纳洛酮抑制，说明这是一种搔痒相关行为。但缓激肽是否也可引起CFA炎性皮损区搔痒相关反应却不得而知。缓激肽是激肽释放酶一激肽系统最重要的活性产物，在机体心血管系统、神经系统、内分泌系

4、统等全身各系统中有重要的生理和病理功能。缓激肽为九肽肽段，主要通过与两种亚型的G蛋白耦联受体(G．protein．coupledreceptor，GPCR)受体，即缓激肽Bl受体(bradykininBlreceptor,BlR)和缓激肽B2受体(bradykininB2receptor,B2R)结合发挥生物学作用。缓激肽局部注射使人产生疼摘要痛，而当B1R被选择性拮抗后，或者使用BlR基因敲除动物模型，缓激肽局部注射引起的疼痛反应会减轻，提示B。R可能介导疼痛的传导。B2R则分布广泛，在中枢及外周大多数

5、组织中存在生理性表达。而有关BlR和B2R在搔痒传导机制中的作用的研究却鲜有报道。临床上不仅常见的疼痛刺激可引起特应性皮炎患者皮损区的搔痒，即使轻微的接触，例如棉签轻触在患者的皮损区，也会诱发明显的搔痒。这种轻微的非伤害性机械刺激即可诱发搔痒的现象被称作触诱发痒(alloknesis)。触诱发痒也是一种异常的痒感觉，并且提示了可能存在一种中枢敏感机制，由轻微的触碰等非伤害性刺激即可产生明显的痒感。本研究亦计划在CFA炎性皮损区制作触诱发痒反应模型，并对将对缓激肽受体在触诱发痒反应中的作用做进一步研究。第一

6、章缓激肽受体在致痛剂引起搔痒中的作用目的本研究将通过建立CFA炎症动物模型，并首次在此炎症模型的基础上研究致痛剂缓激肽的致痒作用，再进一步探讨BlR和B2R在这种异常痒感觉中所起的作用，然后对可能的下游通路进行探索。材料与方法1．实验动物本研究选用雄性C57BL／6J小鼠，体重20·25g，购自中山大学实验动物中心。实验动物的使用及处理方法均符合广东省医学科学院动物实验伦理委员会的要求，并尽可能减少使用动物的数量。2．动物模型制备及行为学观察1)CFA颈背部注射引起搔抓反应的观察小鼠颈背部局部皮内注射CF

7、A(501．tL，对照组注射生理盐水)后，并在第0、6、24、48、72和96h观察小鼠用后肢搔抓CFA注射部位的次数，小鼠完成从硕士学位论文举起后肢搔抓注射部位到放下后肢全过程为一次搔抓，记录每只小鼠30min内的搔抓次数。2)缓激肽引起CFA炎性皮损区搔痒的行为学观察小鼠在接受CFA(509L)颈背部皮内注射96h之后，于实验前30min放置于透明塑料盒内预适应。然后用胰岛素注射针(30G针头)进行皮内注射不同浓度的缓激肽(0～lmmol／L，50gL)，颈背部注射药物后立即放入塑料盒内观察小鼠用后肢

8、搔抓缓激肽注射部位的次数，每只小鼠观察30min。3．BlR与iNOS在CFA炎性皮损区的表达情况小鼠颈背部注射CFA(或者生理盐水)96h后，在七氟醚麻醉后取颈背部炎性皮损区(或者生理盐水对照组)全层皮肤经过4％多聚甲醛固定、20％和30％蔗糖溶液脱水、冰冻切片、抗原修复与封闭、孵育一抗与二抗、封片等步骤后用荧光显微镜在200倍物镜下观察BlR与iNOS的共表达情况。4．统计学方法本研究各组数据均采用均数4-标准差(x4-s