基于滚环扩增技术超灵敏电化学免疫传感器的研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文基于滚环扩增技术超灵敏电化学免疫传感器的研究姓名：逮岭松申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：谢国明201205重庆医科大学硕士研究生学位论文基于滚环扩增技术超灵敏电化学免疫传感器的研究摘要目的：本文欲将电化学免疫方法的高特异性和滚环扩增反应的信号放大作用结合在一起，构建一种超灵敏检测人附睾上皮分泌蛋白4的新型电化学免疫传感器。方法：制备壳聚糖碳化钛纳米复合物，并分步探讨壳聚糖一碳化钛纳米复合膜，纳米金．壳聚糖一碳化钛纳米复合膜等不同修饰步骤的电极的电化学行为。制备超灵敏检测人附睾上皮分泌蛋白4的免疫传感器，对影响免疫传感器检测性

2、能的因素进行优化，并对免疫传感器进行方法学评价。首先在恒电势下，将均一的壳聚糖碳化钛纳米复合膜电沉积在ITO电极上。然后利用循环伏安法将纳米金粒子电沉积到修饰有壳聚糖碳化钛纳米复合膜的Ⅱ0电极上。捕获抗体经由纳米金和纳米碳化钛的双重作用被吸附在电极表面。在捕获抗体，砸4抗原，生物素化的二抗特异性结合后，生物素化引物研蚣经由生物素．亲和素体系被固定在生物素化的二抗上。然后，将适量的环状Ⅸ蚣模板和生物素化的引物D】蚣滴加在电极上，在最适条件下，rr0电极表面开始进行滚环扩增反应。滚环扩增反应的产物提供了大量可用于结合Ⅸ蚣检测探针的结合位点。随后加入的盐酸阿霉素可嵌合在

3、滚环扩增产物和Ⅸ蚺检测探针之间的“G=C”，“C=G"双键中，而其所产生的电流变，)重庆医科大学硕士研究生学位论文化用差分脉冲伏安法进行检测。电极的不同修饰步骤所产生的电极每层表面变化用扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)进行表征。而电极的阻抗变化用电阻抗谱(EIS)进行表征。结果：基于以上级联放大作用，在最适检测条件下，传感器的电流响应与印巨4抗原的浓度在3~300pM范围内呈现良好的线性关系，检测下限为O．06pM。结论：经由经典的滚环扩增反应，生物素杀和素体系，盐酸阿霉素等这一系列级联放大作用，再与高灵敏性和高特异性的电化学免疫方法相结合以后，将

4、该体系应用于微量娅4抗原检测呈现出灵敏的电化学信号响应，较宽的检测范围和较低的检测下限以及良好的重现性。对临床及时快速检测娅4具有十分重要的应用价值。关键词：人附睾蛋白4；电化学免疫法；碳化钛；盐酸阿霉素；滚环扩增ULTRASENSITIVEELECTROCHEMICALIMMUNOSENSORBASEDONROLLINGCIRCLEAI岬LⅢICATIONObjective：ABSTRACTh1廿1iswo止we仃iedt。c。mbiIlethespecif!ic时。felec仃och锄is仃y1mmulloassay咖hthes蜘al锄plific疵n‰cti

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