番茄细菌性叶斑病菌超分支滚环扩增快速检测技术.pdf

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1、艋扬保2014，40(2)：90—94番茄细菌性叶斑病菌超分支滚环扩增快速检测技术王念武，王婷，沈建国，胡方平(1．福建农林大学植物保护学院，福州350002；2．福建出入境检验检疫局，福州350001)摘要根据番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonassyringaepv．tomato，Pst)的一段特异蛋白基因序列，按照锁式探针的设计原理设计探针和扩增引物，优化系列反应条件，建立了特异性的Pst超分支滚环扩增技术。试验结果表明：该检测技术能够从供试的10种不同的病原茵中特异性地检测出番茄细菌性叶斑病菌，DNA检测的最低浓度为500fg／／2L，检测灵敏度高于常规PCR。关键词番茄细茵性

2、叶斑病菌；超分支滚环扩增；锁式探针中图分类号：S436．412文献标识码：ADOI：10．3969／j．issn．0529—1542．2014．02．017RapiddetectionofPseudomonassyringaepV．tomatousinghyperbranchedrollingcircleamplificationWangNianwu，WangTing，ShenJianguo2，HuFangping(1．CollegeofPlantProtection，FujianAgriculturalandForestryUniversity，Fuzhou350002，China；2．

3、FujianBureauofExit—EntryInspectionandQuarantine，Fuzhou350001，China)AbstractApadlockprobewasdesignedbasedonthesequenceoftheuniquehypotheticproteingeneinthecom—pletegenomeofPseudomonassyringaepv．tomato(Pst)，accordingtothedesignprincipleofpadlockprobeandprimers．Detectionsystemofhyperbranchedrollingci

4、rcleamplification(HRCA)wasestablishedandoptimized．TheresultsshowedthatPstcouldbespecificallydetectedbythismethod，whileotherreferenceplantpathogenscouldnotbedetected．ThedetectionsensitivityofHRCAwasabout500fg／~tLofDNAconcentration，higherthanthatoftheconventionalPCRmethod．KeywordsPseudomonassyringae

5、pv．tomato；hyperbranchedrollingcircleamplification；padlockprobe番茄细菌性叶斑病(bacterialspeckoftomato)是原菌的快速检测是植病工作者的研究内容之一。番茄上重要的病害之一，病原菌为Pseudomonassy—传统的方法可用于诊断和鉴定P．syringaepv．ringaepv．tomato(Okabe)Young。Dye&Wm【ietomato病原，但费力费时；用非放射性元素标记(Pst)。该病害最早于1933年在美国的布雷登顿市被DNA探针可用于检测番茄植株上的叶斑病菌，但因发现，但因为这种病害很容易和其他

6、细菌性病害混菌株自身产生毒素，检测结果常受到影响；Zac—淆，致使在其他地方很少被报道，直到1977—1978年cardelli等l_4]利用hrpZ基因特异性序列通过常规在霍姆斯特德地区大暴发之后才被重视[1]。该病菌PCR方法来检测受感染的植株和幼苗，获得了一定仅危害番茄，可造成叶片斑点、坏死，导致植株生长不的成功。但常规PCR的方法有一定的局限性，容易良而减产；在果实上危害形成瑕疵症状，影响番茄的受污染形成假阳性结果，而且不能高通量检测病原感官品质而导致难以销售『2]。该病害因缺少典型的物。自锁式探针被报道以来_5]，它以灵敏、特异、稳诊断鉴别症状极易和其他病害的症状混淆，另外，病定

7、等特点被广泛应用到分子检测中。锁式探针是由原菌又可由种子携带，所以对该病害的快速诊断和病3和5端两段靶标序列和中间的一段对检测结果没收稿日期：2013—04—23修订日期：2013一O7—14基金项目：国家质检总局项目(20011K158)；国家自然科学基金项目(30671463)；福建省发改委项目(KY0030060)*通信作者E-mail：huf@fafu．edu．ca4O卷第2期王念武等：番茄细菌性叶斑病菌超分支滚