pi3k-akt信号通路在igf-1诱导平滑肌细胞增殖中的作用

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1、厦门大学硕士学位论文PI3K--Akt信号通路在IGF--1诱导平滑肌细胞增殖中的作用姓名：郄鹏申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：尤文俊201205摘要目的：比较胰岛素生长因子．1(IGF．1)对人脐静脉平滑肌细胞(HIⅣSMC)和脐动脉平滑肌细胞(刖AsMC)增殖的影响，并探讨其机制。方法：本实验采用人源脐静脉平滑肌细胞(刖VSMC)和脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)进行研究。①检测浓度效应：将冈JVSMC和HUASMC各分为7组，加入不同浓度的药物。分别为：对照组、IGF．1(20n幽：Id)、IGF．1(50n∥砌)、IGF-

2、1(100n酌m)、IGF—l(150ng／1111)、IGF-1(200ng／m1)、wo咖aIlIlill(200uM)。②检测时间效应：通过浓度效应实验分析出IGF．1的合适浓度，加入IGF．1检测O．5h，2h，12h，24h，48h后细胞增值及蛋白的表达。通过MTT法检测IGF．1对两种细胞增殖的影响，WeStemblotting技术检测IGF．1对两种细胞中磷脂酰肌醇．3．激酶／蛋白激酶B(P13K．Al【t)信号通路的影响。结果：①不同浓度的IGF．1对}刑ⅣSMC和}刑『ASMC的增殖均有明显的促进作用，但对阳JvSMC的

3、促增殖作用明显高于H1．JASMC。②进一步检测P13K-A虹信号通路，IGF．1可激活P13K．Akt信号通路，并且IGF．1对HUVSMC的激活明显强于HUASMC。③此外，我们利用IGF．1R抗体或P13K抑制剂wortrna锄【in处理细胞后发现：IGF．1对细胞增殖的促进作用被明显抑制。结论：本研究阐明了IGF．1在平滑肌细胞增殖中具有重要的促进作用，并且在H1UVSMC更为明显。进一步实验发现IGF．1主要通过P13K．A虹信号通路来促进平滑肌细胞的增殖。本文研究在一定程度上解释了搭桥术后静脉移植物比动脉有更大的发生内膜增生倾

4、向的现象。关键词：内膜增生IC限．1HUVSMCHlJASMCP13K-A衄AbsⅡactAbstractAim：TocolnparemeiIlnueIlceofproliferationforthehumanumbilicalveinsmoothmuSclecells删SMC)趾d硼曲ilicalanerialsm00thnmsclecells㈣ASMC)船ctedbyinSulmgr0讹‰tor-l(IGF-1)．Methods：weuSedhumaIl硼曲ilicalveillsmootllmuSclecells(}ⅣVSMC)an

5、dhum趾Ⅷ曲ilicalanerialsm00mmuSclecells叫SMC)forresearCh．①t0detectionconcen仃atione船ct：HUVSMCandHUASMCarediVidedint0seVengr01lps，锄deaChgroupisputin卸UVSMC锄dHU．ASMCeachdividcdi11t0seVengroups．Respectively，也econ们lgroup，IGF一1(20ng／m)，IGF-l(50ng触)，IGF-1(100n酌：111)，IG-F-1(150ng／m1)，

6、IGF-1(200ng／m1)，、Ⅳ0mnallIliIl(200心D．②totesttirnee彘ct：we趾alysisaproperdeIls时ofIGF一1t11rou曲恤concen仃砒ione虢ctexperiment．wedctectceUprolif．eration趾dproteinexpression疵rjoi血gIGF-1O．5ll，2h，12ll，24ll，48h．neprolif．erationofHIJVSMCandHUASMCaredetectedn啪u曲MTTm甜10d．Thee虢CtSofP13K-Akto

7、fmⅣSMC锄dmJASMC碉廊jo劬培IGF-1isdetectedbyWcstemblo比gteclulical．Results：①Difrercntconce助隐ltionofIGF一1allhavesi嘶ficantproIiferater01et0HUVSMC锄d}n『ASMC，butt11epromo衄roleofprOlife】砸0nt0}刑ⅣSMCw豁si班ficantlylli曲er吐衄nleHUASMC．②Fumlert0testP13K·Aktsi刚iI坞p甜1ways，IGF—lc趾ac讯a：ceP13K—Akts

8、ignalpa血、)Irays，髓d吐圮∞tiVationt0}IIjⅣSMCismore也anHUASMC．③madditio玛、ⅣeuseIGF一1Rantibody0rP13K-AI(t