pi3k-akt信号通路在葡萄糖诱导的鹅肝细胞脂质合成中的作用研究

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationResearchaboutrolesofP13K．．AktsignalingOilglucoseinducedlipogenesisingooseprimarynepat0CyteS一_lVByLiuDandanDirectedbyProf．WangJi—wenHanChunchunAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGeneticsan

2、dWaterfowlBreedingThecollegeofAnimalScienceandTechnology，SichuanAgriculturalUniversityYa’an，SichuanProvince，ChinaJune，2014万方数据本论文由国家自然科学基金项目(31101712)资助本试验在匹tJJl农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用四川省重点实验室”完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致

3、谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研宄生虢3，旧四J。，q年萌J／日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发

4、表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：导师签名：3相刀可谚参?々．0年‘月f7日J，·c，年{)月／7日万方数据四川农业大学硕士学位论文{两要动物机体内葡萄糖代谢和脂质合成之间有着非常紧密的联系。当动物摄入富含碳水化合物饮食时，过量的葡萄糖分解形成的代谢产物如乙酰辅酶A为肝脏脂肪酸合成提供底物，重新合成的脂肪酸最后转化成甘油三酯(triglyceride，TG)储存在肝脏或脂肪组织【l】。体内葡萄糖缺乏时，体内脂肪分解重新转化成葡萄糖供机体利用。P13K／Akt通路广泛存在于各种细胞中，是细胞糖类和

5、脂质代谢调节的信号转导通路，主要参与调控糖脂代谢途径关键酶的活化。关于葡萄糖诱导肝脏脂质合成的过程是否由P13K．Akl通路介导的目前还未见报道。本研究以鹅原代肝细胞为试验对象，采用P13K抑制剂LY294002处理细胞24h，使P13K—Akt通路活性受到抑制，探讨LY294002依赖的P13K．Akt通路抑制对肝细胞脂质合成的影响：通过添加葡萄糖处理肝细胞，分析葡萄糖对肝细胞脂质合成的诱导作用，以及对P13K．Akt信号通路活化的影响；同时在LY294002抑制P13K—Akt通路的条件下，重新添加葡萄

6、糖处理细胞，分析葡萄糖是否介导P13K．Akt通路活化参与肝脏脂质从头合成过程。试验结果表明：1．不同浓度LY294002(10、20、409mol／L)处理鹅肝脏细胞24h，尸仃K，Akt2，roTOR，raptor基因转录水平低于对照组(P<0．05)，P13K，Aktl，mTOR，S6K蛋白浓度减小；S6K和P．S6K蛋白表达受到抑制，表明LY294002抑制P13K．Akt信号传导及下游mTORCl通路的活化。2．LY294002(10、20、40pmol／L)处理24h，SREBP—lc，ChRE

7、BP，FAS，ACCa，LXRa基因表达下调，FAS，ACCa蛋白浓度减小；LY294002(10、409mol／L)处理细胞24h后，通过油红0染色，处理组细胞内脂质含量明显低于对照组，且高浓度LY294002(40tamol／L)抑制作用更明显，以上结果表明LY294002下调脂质合成相关因子的表达，进而抑制肝细胞脂质合成。3．葡萄糖(5、20、359mol／L)处理24h，和对照组相比，PDK，Akt2，mTOR，Raptor基因表达显著增加：P13K，Aktl，mqlOR，S6K蛋白浓度上调；S6K

8、和P．S6K水平均高于对照组，表明葡萄糖激活P13K—Akt信号传导及下游mTORCl通路活化。4．葡萄糖(5、20、359mol／L)处理24h，SREBP—lc，ChREBP，FAS，ACCa，LXRa基因表达量增加，FAS，ACCct蛋白表达增加；5和35btmol／L葡萄糖处理细胞24h，通过油红O染色，葡萄糖处理组细胞内脂质沉积高于对照组，表明在鹅肝脏细胞中，葡萄糖上调肝细胞脂肪合成相关基因和蛋白的表达