活化cd8+t细胞来源的exosomes通过fas途径促进肿瘤侵袭及其相关机制的研究

《活化cd8+t细胞来源的exosomes通过fas途径促进肿瘤侵袭及其相关机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、浙江大学博士学位论文活化CD8+T细胞来源的exosomes通过Fas途径促进肿瘤侵袭及其相关机制的研究姓名：杨菲申请学位级别：博士专业：免疫学指导教师：王建莉20120229浙江人学博I：学位论文中文摘要活化CD8+T细胞来源的exosomes通过Fas途径促进肿瘤侵袭及其相关机制的研究博士研究生导师中文摘要杨菲王建莉迄今为止，肿瘤的免疫治疗在临床中效果有限，究其原因，主要在于肿瘤免疫和免疫逃逸机制的复杂性，现在肿瘤复发与逃逸已经成为肿瘤免疫治疗的主要障碍，而肿瘤的远处转移是肿瘤复发、不易根治的最主要原因，因此深入研究肿瘤转移的相关机制，对

2、于探索一种有效的肿瘤治疗方法具有非常重要的科学意义．肿瘤的侵袭能力指肿瘤细胞破坏基底膜及移行进入结缔组织的能力，肿瘤侵袭能力的强弱最终决定了肿瘤转移的程度。MMP9是基质金属蛋白酶(MatrixmetaJloprotein嬲es，MMPs)中的一种，可以降解基底膜的主要成分一胶原，能够促进肿瘤细胞的侵袭．现在有研究表明，在炎症或者肿瘤发生时，高表达的FaSL能够通过活化外周血髓系细胞或者肿瘤细胞的Fas信号，上调这些细胞的MMP9表达，加速它们向周围组织浸润、侵袭．这些结果提示细胞F私信号的活化与MMP9的表达水平存在着某种重要的关联．F弱是

3、经典的死亡受体，当Fas配体(F髂lig锄d，FaSL)与F硒结合后，可以介导F鹊活化，诱导细胞凋亡，从而维持机体的稳态．但是，在很多情况下，F舔可以引起非凋亡途径，包括促进炎症反应、神经突生长、肝组织再生、细胞增生及分化、血管再生、纤维化、细胞周期进展、细胞迁移等．虽然几乎所有的肿瘤细胞都表达F觞受体，但很大一部分肿瘤细胞中F邪信号的活化，不但不引起肿瘤细胞的凋亡，反而促进肿瘤的生长与转移．1II浙江人学博士学位论文中文摘要活化的肿瘤抗原特异性细胞毒性T细胞(C”otoxicTlymphocytes，CTLs)是清除肿瘤细胞的最重要的效应细

4、胞，活化的CTL能够高表达FasL．肿瘤发生时，虽然机体免疫被激发，肿瘤局部有活化CD8+T淋巴细胞(cTLs)聚集，但是其杀伤肿瘤的作用非常有限．因此，理解肿瘤逃逸和复发的机制可能为促进抗肿瘤T细胞治疗提供重要的思路。现在，肿瘤活化的CTL通过FaSL／FaS信号对肿瘤产生了怎样的作用还不清楚。有文献报道活化的T细胞分泌大量表达F舔L的具有生物活性的exosomes，这种懿oSomes能够诱导T细胞和树突状细胞(Dendriticcells，Dcs)凋亡，从而发挥免疫抑制功能．Exosomes是由活细胞分泌的来源于多囊泡体的具有脂质双分子层

5、膜结构的纳米级囊泡，其直径约为50-100姗，密度范围从1．13咖l到1．19咖l，可经过多次密度梯度超速离心分离得到。来自不同细胞的exosomes具有生物功能的多样性。现在已经有大量的关于F弱L表达的exosomes及其相关的免疫抑制功能的文献报道，但是，这些文献主要关注的是F嬲L表达的exosomes对T淋巴细胞及DC免疫功能的影响，而有关F鹊L表达的exosomes是否能够直接参与肿瘤F弱信号的活化，并促进肿瘤的转移，特别是与肿瘤转归密切相关的活化CTL分泌的F嬲L表达的Exosomes与肿瘤细胞转移是否具有相关性的文献报道很少。我们

6、设计实验，制备了来自活化cTL的FaSL阳性exosomes，研究其对肿瘤细胞侵袭的作用及其相关机制，并且证实了这样的exosomes在体内的存在及其生理意义．首先，我们通过ovA257-264多肽活化OT．I小鼠来源的CD8+T淋巴细胞，提取其分泌的活化CD8+T细胞来源F弱L阳性的弧osomes(EXO)。将EXO与表达F弱的B16小鼠黑色素瘤细胞或3LL小鼠肺癌细胞共培养，检测B16细胞或3LL细胞的增殖和凋亡情况，结果发现，B16细胞或3LL细胞表现出对EXO诱导凋亡抵抗，而EXO对B16细胞或3LL细胞的生长增殖没有影响．为了进一步

7、观察ExO对于肿瘤细胞的影响，我们进行了体外侵袭实验．EXo可以促进B16小鼠黑色素瘤细胞以及3LL小鼠肺癌细胞的侵袭能力，当EXO用F勰L中和抗体处理之后，它们对B16细胞和3LL细胞诱导侵袭能力的作用明显下降，表明ExO通过F弱L／F弱信号发挥对肿瘤细胞的侵袭作用。由于MMP9与F笛信号的相关性以及MMP9对细胞侵袭的重要作用，我们检测了EXo作用于B16细胞之后，MMP9IV浙江人学博上学位论文中文摘要的表达变化．Realtime及westemblot结果显示，EXO能够通过Fas信号上调B16细胞MMP9的表达，当MMP9的作用被抑制

8、之后，EXO诱导B16细胞侵袭的能力明显下降，证明EXO对B16细胞的侵袭作用是通过Fas信号上调MMP9表达来完成的。F邪L能够活化肿瘤细胞的NF．心和ERK信号