线粒体atp酶β亚单位在急性白血病多药耐药中作用及调控机制的研究

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1、分类号VDC密级博士学位论文线粒体ATP酶p亚单位在急性白血病多药耐药中的作用及调控机制研究TheroleandregulatingmechanismsforBsubunitofmitochondrialFi一FoATPsynthaseinacuteIeukemiawithmultidrugresistance作者姓名:杨景柯学科专业:内科学(血液病学)院、系(所):湘雅二医院指导老师:张广森教授论文答辩日期，o/0，石、答辩委员会主席体耀芙中南大学0一0年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果

2、。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名:-幸麦勿日期:一到匕年二月毕日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到

3、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名津麦再导师签名，~迪廷日期注毕-年土月止日博一卜学位论文中文摘要中文摘要研究背景急性白血病(AL)是最常见的血液系统恶性肿瘤。对化疗药物产生多药耐药(MDR)是AL患者治疗失败的主要原因。虽然肿瘤细胞MDR的产生机制已经得到广一泛研究，一些新的耐药逆转措施也在临床得以应用，但是MDR现象的分子机制仍未能完全阐明，且目前临床的耐药逆转措施治疗效果十分有限。因此，寻找新的耐药环节及分子靶位，并探讨白血病细胞耐药机制及逆转措施，对于提高AL治疗的有效率具有重要的临床意义。研究表明线

4、粒体不仅控制机体细胞的能量代谢，而且在维持细胞钙稳态，调节细胞凋亡等过程中起着关键作用。线粒体ATP酶是线粒体能量转化的核心酶，其p亚单位(p一F，一ATPase少是氧化磷酸化合成ATP的限速组分。有研究发现p一F!一ATPase在多种实体肿瘤中表达下降。由于线粒体ATP酶表达降低或缺失，可导致细胞氧化磷酸化受阻，ATP产生减少，线粒体相关的细胞凋亡受抑，从而使肿瘤细胞对化疗和放疗产生耐受，并“赋予”线粒体ATP酶与凋亡耐受的化疗耐药相关的新的“含义”。新近研究发现线粒体ATP酶表达下调与结肠癌细胞对5一氟尿嚓咙耐药相关，然而耐药产生的机制并不

5、清楚。近年研究表明，恶性肿瘤细胞，}“特定基因的启动子区域CpG岛甲基化异常及基因的转录活性改变与MDR的形成存在着内在联系。我们课题组在前期的研究件’发现，p一F:一ATPase表达卜调与慢性粒细胞白而一病((’ML)对阿霉素(ADR)}咧药有关;进一步研究提小卜F}一ATPase博卡学位论文中文摘要基因启动子区域高甲基化与CML耐药有关。本研究立足于前期的〔作基础，探讨p一F】一ATPase在AL患者原代细胞中的表达与临床疗效及体外对ADR药敏性的关系，以及原代细胞p一FI一AfPase启动子区甲基化对耐药的影响，以期在探索AL新的潜在的耐

6、药机制，定位新的逆转耐药的分子靶点上有所突破。}再}一学位论文中文摘要产七尹丫.卉口/、弟一首!》力，线粒体ATP酶p亚单位在急’I’4白血病患者骨髓原代细胞中的表达及与临床疗效和体外药敏的关系目的:探讨线粒体ATP酶p亚单位(p一F!一ATPase)的异常表达在AL患者多药耐药中的作用。方法:以82例AL患者为研究对象，其中包括51例急性髓细胞白血病(AML)患者和31例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者，另设11例骨髓相对正常非血液肿瘤患者作为对照。根据临床耐药诊断标准，将AL患者分为临床化疗敏感组和临床化疗耐药组。分离受试者骨髓单个核细胞(

7、BMMCs)并原代培养。采用实时定量PCR(RQ一pCR)和Westernblot方法分别检测AL患者BMMCs中p一F，一ATPasen习又NA和蛋白的表达，比较化疗敏感组和化疗耐药组之间p一FI一ATPasemRNA和蛋白表达水平的差异，井动态观察6例AL患者在初治和首次复发时p一FI一ATPasen1RNA表达的变化;用MTT法检测化疗敏感和化疗耐药的AL患者BMMCS体外对ADR的敏感性，并分别分析两组AL患者BMMCs中p一F，一ATPasemRNA和蛋白表达水平与体外药敏的相关性。结果:1.p一F!一ATPasemRNA和蛋白在所有

8、AL和对照组BMMCs「}’均有小同程度的表达。与对照组相比，p一F!一ATPase麒一NA和蛋白农达水平在AL患者BMMCs中均显著降低(尸<0.0