鼻咽癌耐药细胞株14-3-3σ表达研究

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1、分类号UDC硕士学位论文密级鼻咽癌耐药细胞株14．3．30表达研究Theexpressionof14—3—30inchemoresistancenasopharyngealcarcinomacell作者姓名：学科、专业：学院(系、所)：导师姓名及职称：王望临床检验诊断学湘雅医院易斌教授答辩委员会主席中南大学二零一二年五月一奄一一，平丑月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单

2、位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：本课题受以下基金资助[1]中南大学研究生创新基金项目“鼻咽癌耐药细胞株14。3—3

3、13f表达与耐药机制研究”(2010ssxt280)[2]国家自然科学基金“采用定量蛋白质组学技术筛选与鼻咽癌发生和转移相关的甲基化基因”(81071796)[3]国家自然科学基金“采用定量蛋白质组学技术筛选与鼻咽癌化疗耐药相关的甲基化基因”(81172098)硕士学位论文中文摘要摘要目的：研究14．3．36基因在鼻咽癌细胞株HNEl和耐顺铂的鼻咽癌细胞株HNEl．DDP中的表达及其启动子区域的甲基化情况，初步探讨14．3．36基因与耐药的关系。方法：首先采用蛋白印迹法(WesternBlotting)检测HNEl-DDP细胞与HNEl细胞1

4、4．3．36的表达，并采用荧光定量PCR(QuantitativePCR，qPCR)检测14—3-36基因的mRNA表达水平。然后利用甲基化抑制剂5．杂氮．2’。脱氧胞苷处理HNEl．DDP细胞，观察不同浓度对细胞生长及细胞周期的影响，并采用WesternBlotting及qPCR分别检测药物干预前后14—3—36基因表达的改变。用WestemBlotting检测p53蛋白在HNEl及HNEl．DDP中的表达，并采用亚硫酸氢钠处理后测序法(BisulfitegenomicsequencingPCR)检测14—3-36启动子区域CpG位点的甲基

5、化情况。采用SPSSl3．0统计软件进行数据分析。结果：较HNEl细胞，14．3．30蛋白及其mRNA、p53蛋白在HNEl。DDP细胞株中表达均明显下降。经过不同浓度的5-aza．2’．dC(O，1，5，10gmol／L)处理HNEl．DDP细胞后，细胞生长曲线出现明显差异，细胞活性抑制，细胞阻滞在S期和G2．M期。同时，随着药物的处理，HNEl．DDP细胞的14．3．30蛋白和mRNA重新表达并逐渐上升。此外，亲本细胞株HNEl、耐药细胞株HNEl．DDP及处理后的细胞株中，14．3．3o启动子区域的CpG位点几乎均为非甲基化状态。硕士学

6、位论文中文摘要结论：14．3．36下调与鼻咽癌耐药相关，提示14．3．36可能是鼻咽癌耐药相关的蛋白。5-aza一2’．dC具有抑制鼻咽癌耐药细胞株生长、阻滞耐药细胞株周期和上调14．3．36的作用，且14．3．36可能也参与了药物的抑制作用。但在鼻咽癌耐药细胞株HNEl．DDP中14．3．36表达下调可能不是由于其甲基化所致，而和抑瘤蛋白p53的表达下降有关，但具体机制有待进一步研究。关键词鼻咽肿瘤，14．3．3蛋白质类，顺铂，甲基化，p53IIABSTRACTObjective：Tostudytheexpressionof14··3—-3

7、6inthenasopharyngealcarcinomacelllineHNE1andcisplatinresistancecelllineHNE1一DDPandthemethylation14-3—36gene，inordertoprimarilydiscusstherelationshipbetween14—3—36anddrugresistance．Methods：Inthisstudy,WesternBlottingandQuantitativePCRwerefirstlyusedtodetecttheexpressionof14-

8、-3·-30inHNEl--DDPcellsandHNE1cellsonproteinandmRNAlevelsrespectively．ThenMTTassaya