从tocp暴露鸡脊髓组织中筛选opidn诱发相关蛋白

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1、从TOCP暴露鸡脊髓组织中筛选OPIDN诱发相关蛋白计：学位论文：34页表格：4个插图：6幅张彦宁指导教师：朴丰源教授申请学位级别：硕士学位专业名称：劳动卫生与环境卫生学论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使

2、用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：班签字日期：趁f2年』月型日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0000⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOOIO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34从TOCP暴露鸡脊髓组织中

4、筛选0PIDN诱发相关蛋白硕士生姓名：张彦宁指导教师：朴丰源教授专业名称：劳动卫生与环境卫生学摘要目的：利用PMSF前干预对OPIDN影响特点，通过双向电泳和质谱分析技术，构建OPIDN相关蛋白信息谱，筛选并鉴定TOCP诱发OPIDN相关差异表达蛋白，为探讨TOCP诱发0PIDN作用机制提供靶蛋白依据。方法：取罗曼鹤鸡56只，随机分为低剂量TOCP(750mg／kg)染毒组、高剂量TOCP(1000mg／kg)染毒组、给予PMSF(40mg／kg)后再投TOCP(1000mg／kg)的PMSF前干预组以及对照组，每组14只，分别观

5、察四组鸡迟发型神经毒性行为症状，并于染毒后第5天和20天，从各组8只鸡中取脊髓组织用于双向电泳和质谱分析，而每组剩余6只鸡继续观察迟发性神经毒性症状，第23天观察结束：OPIDN症状观察结束后，处死实验动物，选取高剂量组鸡脊髓组织进行毒理形态观察。双向电泳原始文件用imagemaster2Dplatinum软件搜索相应的数据库，蛋白表达差异2倍以上或0．5倍以下视为差异显著点。利用质谱分析技术对差异表达蛋白点鉴定，通过计算机MASCOT软件的MSMS离子方式对肽质量指纹图谱和分子量、等电点数据进行分析，于蛋白质数据库中搜索与之匹配

6、的相关蛋白，同时查询其功能。肽质量指纹图谱容许误差O．3Da，分子量容许误差4-20％。结果：对神经症状观察的结果显示，两组TOCP暴露鸡从染毒后第5天开始出现轻度迟发性神经毒性症状，并随时间推移其神经毒性症状逐渐加重，第20天这些鸡的平均迟发性神经毒性症状评分值基本达到高峰。尤其，高剂量组鸡的迟发性神经毒性症状较为严重。在染毒23天，高剂量TOCP组的6只中全部出现了OPIDN症状，而低剂量TOCP组的6只中只有3只出现了OPIDN症状。相反，PMSF前干预组和对照组鸡没有出现迟发性神经毒性症状。通过组织病理学对TOCP暴露23

7、天的鸡神经组织观察，可见神经元突起消失，髓鞘肿胀和脱髓鞘，神经元坏死，胶原纤维增生等，出现具有特征性的病理学变化。进一步从病理学角度证实了TOCP诱发鸡OPIDN模型的可靠性。利用双向电泳技术筛选OPIDN相关差异表达蛋白点信息，从TOCP暴露鸡脊髓神经组织中共筛选l36个与OPIDN相关差异表达蛋白点，其中上调点有23个，下调点有113个。利用质谱分析技术，从鸡脊髓组织相关差异表达蛋白点中鉴定了14个可能与OPIDN相关的靶标蛋白，其中下调蛋白13个：cofilin．1．B、Stathmin蛋白、髓鞘碱性蛋I刍(MBP)、突触核

8、蛋白、热休克蛋白beta．1、胰蛋白激酶A、磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶、苹果酸脱氢酶、精氨酸激酶、一型细胞骨架蛋白、Vesicleaminetransportprotein1、塔尔羊蛋白5、电子传递黄素蛋白；上调调蛋白1个：神经丝蛋白。结论：1000mg