OPIDN致鸡大脑脑型肌酸激酶差异表达-论文.pdf

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1、中国公共生2014年7月第30卷第7期ChinJPublicHealth，Jul2014Vo1．30№．7·921··实验研究·OPIDN致鸡大脑脑型肌酸激酶差异表达李双月，朴丰源摘要：目的探讨有机磷化合物致迟发性神经毒性(OPIDN)鸡脑组织中脑型肌酸激酶同工酶(CK．BB)表达变化。方法罗曼鹤母鸡24只，随机分成三磷甲苯磷酸酯(TOCP)染毒组(1000mg／kg)、苯甲基磺酰氟(PMSF)干预组(在染毒之前给予40mg／kgPMSF)和对照组(生理盐水)，每组8只。染毒第5和第2l天，每组分别处死8只动

2、物，分离大脑，提取总蛋白；用双向电泳和质谱分析技术，筛选相关差异表达蛋白。结果蛋白双向电泳结果显示，在染毒第5天，TOCP组与对照组、PMSF干预组与对照组的CK—BB蛋白点灰度比值分别为0．8583和0．9133，各组间差异无统计学意义(P>0．05)；染毒第21天，TOCP组和PMSF干预组与对照组差异蛋白点CK—BB灰度比值分别为0．3275与0．6757，前者表达下调达3．0倍；对该蛋白点的质谱分析结果在Swiss—por数据库中进行比对，其与鸡种属、蛋白序列号为gil45384340的creatin

3、ekinaseB—type(CK—BB)蛋白的肽段匹配数为26，序列覆盖率为75％，评分值为1603(可信度高)，显示该蛋白点即为CK—BB蛋白。结论OPIDN可致鸡大脑组织CK—BB蛋白表达显著下调，其变化可能与OPIDN模型动物神经组织损伤有关。关键词：迟发性神经毒性(OPIDN)；脑型肌酸激酶同工酶(CK—BB)；三磷甲苯磷酸酯(TOCP)；苯甲基磺酰氟(PMSF)；双向电泳分析中图分类号：R992文献标志码：A文章编号：1001—0580(2014)07—13921—03DOI：10．11847／zg

4、ggws2014—30—07—22Differentialexpression0fCK．BBinbraintissueofhenswithOPIDNLIShuang—yue，PIAOFeng—yuan(DepartmentofOccupationalandEnvironmentalHealth，DalianMedicalUniversity，Dalian，LiaoningPrvince116044，China)Abstract：ObjectiveTodetectdifferentialexpressionso

5、fbraintypeisoenzymeofcreatinekinase(CK—BB)inthebrainofhenswithorganophophorscompoundsinduceddelayednerutoxicity(OPIDN)andtoprovidetargetproteinevi—dencefordiagnosisofPOIDN．MethodsTwenty-fourRomanhenswererandomlydividedintothreegroups：treatedgroup(1000mg／kgt

6、riorthocresylphosphate，TOCP)，intervenedgroup(40mg／kgphenylmethanesulfonylfluoride[PMSF]beforeTOCPtreatment)，andcontrolgroup(tapwater)．Eighthensineachgroupweresacrificedatday5andday20afterthetreatments；then，thebraintissueofthehenswereseperatedatlowtemperatur

7、eandtotalproteinofthebraintissuewereextracted．WithsolidphasePHgradientsodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis(SDS—PAGE)andtwo—dimensionaleleetrophoresisandmassspectrometry，wedetecteddifferentlyexpressedCK—BBpro—tein．ResultsComparedwiththecontr

8、olgroup，thedifferenceinCK—BBexpressionwasnotsignificantatday5(P<0．05)，whileatday20，thegraylevelratioofCK-BBexpressionoftreated—groupandintervened—groupwere0．3275and0．6757．withathree—folddown—regulation