基于组织芯片筛选多种相关蛋白建立卵巢浆液性癌的分子分型

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1、学校代码：学号：1002320050105l基于组织芯片筛选多种相关蛋白建立卵巢浆液性癌的分子分型Ureat1ngatoolecu上arc上ass1士1cat10nofo’’1■，’●●一ovarianserouscarcinomabytissuemicroarrayandmulti-proteinscreening专业年级：北京协和医学院临床医学专业2005级姓名：刘思伟导师：沈铿教授导师小组：杨佳欣教授曹冬焱副教授北京协和医学院临床学院(北京协和医院)妇产科教研室完成日期：2013年6月目录摘要．．．．．．．．．．⋯．．．⋯

2、⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．1ABSTRACT．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．⋯．．．⋯．．．．．．⋯．3缩略词表．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．⋯⋯⋯⋯．．．．5前言⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．7刖舌⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．／l材料与方法．．．．．．．．．⋯⋯．．．．⋯⋯．．．⋯．．．⋯⋯．．．．．．

3、．⋯．．．．．．．．91．1试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯．．91．2试验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯．．112结果．⋯⋯．．．⋯．．．⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．．．．．⋯．．．132．1完成122例卵巢浆液性癌临床病理数据采集⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯132．2免疫组织化学染色⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．3图像采集分析与蛋白表达结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．4Pim-1等10个蛋白入选预后分子分型拟合范围⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯．．322．5HER-2等11个蛋白

4、入选铂类敏感性分子分型拟合范围⋯⋯⋯⋯⋯．402．6采用Logistic回归模型拟合预后及铂类敏感性分子分型⋯⋯．⋯．．．492．7统计学模型转化为临床应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．523讨论⋯⋯⋯．⋯．．．⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．544结论．．．．．．．⋯⋯⋯．．．⋯．．．．⋯⋯．．．．⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．．．57参考文献⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．．⋯⋯．．．．．．58原癌基因pim—l与肿瘤分子分型的研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．66致谢⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．74独创性声明及学位论文版权使用授权书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．75摘要研究背景组织病理学诊断是肿瘤诊断的金标准和临床治疗的基础，但对病理分级与手术病理分期相同的卵巢浆液性癌患者采取同样的治疗方案，他们的治疗反应以及预后却有着明显的不同，究其原因是卵巢浆液性癌在分子水平上存在高度个体异质性。基于分子异质性的个体化诊疗是妇科肿瘤治疗的新方向，而分子分型是实现个体化诊疗的基础。本研究目的是通过多蛋白筛选初步构建卵巢浆液性癌预后以及铂类敏感性分子分型。研究方法1．构建临床病理数据库以及制作组织微阵列纳入2000

6、年初至2009年底10年间在北京协和医院妇产科完成初次肿瘤细胞减灭术和铂类术后化疗并留有初次手术病理标本的晚期卵巢浆液性癌患者，共计122例，严密随访截止至2012年12月31日。由两位病理科医师确认原发癌灶(癌灶直径≥3mm)并标记，镜下观察癌组织无明显钙化及坏死，制作卵巢浆液性癌癌灶组织微阵列(组织芯片)蜡块并切片，选取高质量组织芯片备后续试验使用。2．免疫组织化学染色以及显微图像采集分析选取21个蛋白进行免疫组织化学染色，严格固定同一批次组织芯片免疫组织化学染色以及显微图像采集的各项物理、化学、时间、硬件及软件参数，确保同

7、一批次芯片每一个芯片点接受同样的试验操作。对采集的图像进行灰度分析，获取平均光密度值，修正后，根据平均光密度值大小转化为表达强度分级(无／微量表达、低表达、中表达和高表达)。3．分子分型统计模型构建以及临床应用转化以3年为界，将0S<3年定义为预后差，0S≥3年定义为预后好；以1年为晁，将DFS／PFS<1年定义为铂类不敏感，DFS／PFS≥1年定义为铂类敏感。采用Pearson卡方fISpearmann等级相关对蛋白表达强度和预后指标及铂类敏感性指标进行交叉分析，P值<0．05表示差异具有统计学意义，将P值<0．05的蛋白纳入

8、下一步建模拟合范围。对进入建模拟合范围的蛋白，采用Logistic回归建模，SCORE检验选入，似然比检验筛除，逐步回归，得到预测预后以及化疗敏感性准确率最高的分子分型。研究结果1．初步建立卵巢浆液性癌预后分子分型联合检测Pim．1、HER-2和wT．1对预测预