慢病毒介导rna干扰ngr基因对新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的修复作用

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1、福建医科大学硕士学位论文慢病毒介导RNA干扰NgR基因对新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的修复作用姓名：林如英申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：王玮20090301慢病毒介导RNA干扰NgR基因对新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的修复作用中文摘要目的：构建NgR特异性siRNA慢病毒重组体，在新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤模型水平，探讨NgR特异性siRNA慢病毒重组体干扰大鼠NgRmRNA表达及其对新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的修复作用。方法：1、建立P3新生SD大鼠缺氧缺血性脑白质损伤模型，从生物行为学、组织形态学进行验证。2、

2、设计、构建NgR特异性siRNA慢病毒重组体并鉴定。3、WesternBlot方法外源筛靶、内源筛靶，选择最有效的靶点，并包装成慢病毒。4、40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、空病毒组、慢病毒组(每组10只)，新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤3天后(P6)经侧脑室注射给药，观察大鼠的行为学改变。5、80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、空病毒组、慢病毒组(每组20只)，新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤3天后(P6)经侧脑室注射给药，RT-PCR检测P6、P7、P9、P13SD大鼠NgRmI铷NA表达情况。结果：1、结扎P3新生SD大鼠

3、双侧颈总动脉建立缺氧缺血性脑白质损伤模型，从生物行为学、组织形态学进行验证，模型组都出现了有意义的改变。2、设计、构建NgR特异性siRNA慢病毒重组体经PCR鉴定、基因测序仪测序，结果与设计序列相符，目的基因序列准确无误，慢病毒重组体构建成功。3、筛选最有效的靶点，包装成慢病毒，慢病毒重组体浓度为：E+9TU／ml。4、模型组、空病毒组和慢病毒组大鼠的行为学相对于假手术组出现明显改变，慢病毒组大鼠恢复情况明显好于模型组和空慢病毒组。5、模型组和空病毒组大鼠的NgRmRNA表达量相对于假手术组明显增高，慢病毒组NgRmRNA表达比假

4、手术组增加，但明显少于模型组和空慢病毒组。结论：本研究采用结扎P3新生SD大鼠双侧颈总动脉建立缺氧缺血性脑白质损伤模型，为后续的实验提供了可靠的动物模型：设计、构建NgR特异性siRNA慢病毒重组体并将其应用到动物模型，在活体动物水平探讨NgR特异性siRNA慢病毒重组体干扰大鼠NgRmRNA表达及其对新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤的修复作用。实验结果说明在活体内经侧脑室注射慢病毒重组体转染后可以实现NgR基因的沉默。本研究认为慢病毒介导的RNA干扰有可能成为治疗缺氧缺血性脑白质损伤的有效手段之一，为进一步应用临床试验提供理论依据。关

5、键词：慢病毒Nogo受体RNA干扰脑白质损伤6LentiviralvectormediatedRNAinterferegeneNgRtorepairHypoxic—。ischemicNeonatalWhiteMatterDamageinnewbornratAbstractObjective：ConstructtheeffectiveNgR(Nogoreceptor)specificsiRNALentivirusvectorandexploretheeffectsofNgRspecifiCsiRNALentivirusrecombin

6、ationinNgRmRNAexpressiononnewbornrathypoxic—’ischemianeonatalwhitematterdamageanditsrepairfunctiononnewbornratwhitematterdamagefromanimalmodellevel．Methods：1．Themodelofnewborn(P3)SDratwhitematterdamagewasestablishedandvalidatedbasedonbiologicalbehaviorandhistology．2．De

7、sign，constructandidentificationoftheeffectiveNgRspecificsiRNALentivirusvector．3．WesternBlottoexogenoustargetsieve，endogenoustargetsievetoselectthemosteffectivetargetandtopackageintolentivirus．4．40SDratsweredividedintocontrol，model，controlLentivirusandrecombinantLentivi

8、rusgroupsrandomly(10ratseach)．Drugswereintracerebroventricularmicroinjectedthreedaysafternewbornratwhitematterdamage．