一个野生大麦群体与栽培大麦品种间遗传多样性的比较

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1、4一个野生人麦群体与栽培人麦品种间遗传多样性的比较与经典的PCR反应相比,RAPD具有如下特点:(1)在引物上,经典的PCR反应所用的是2个(~对)引物,长度通常为20bp(碱基对)左右,RAPD所用的引物为1个,长度多为lobp。(2)在反应条件上,经典的PCR的复性温度较高,一般为60℃左右,而RAPD的复性温度多在40℃以下。(3)在扩增产物上,经典PCR产物为特异扩增,而RAPD产物为随机扩增。RAPD的优点主要是简单易行、需要的DNA量极少(15~25ug)、无需应用放射性元素、实验设备简单、周期

2、短,因此受到研究者的普遍欢迎。但凡垤D在一些作物中扩增产物的稳定性较差,且多数位点的标记表现为显性,因而不能提供完整的遗传消息。目前该方法己广泛应用于种质资源鉴定和分类、遗传多样性分析、目标性状基因的标记等研究上,也有人利用黜蟑D标记来绘制遗传连锁图谱(wclsh掣20】,1990;Ra眺幽【翻等,199l;wei血玛和L舢曙rid∥231,1991;Devos【24】等,1992;schachellIla一251等,1994;wi出等,1.990【26】)。凡廿D标记在大麦遗传多样性分析中的应用及国内外研

3、究进展。自从DawSon,I.K.等(1997)和Giese,H.等(1996)【27,28】发表关于利用凡廿D标记对大麦进行检测和作图。鼬盱D分析就以其简单,易操作等特点而被用于基因定位,例如大麦抗病基因(圣洫ch%H.R.等,1996、Mohl鹅S.J.等,2000)【29’30】和抗大麦黄矮病基因(W锄岛R.R.等,1996、Zhallg,Z.Y.等,2001)【31'32】。。Nm等(1998)【33】和Baum等(1997)【34】利用鼬址D技术对以色列、土耳其、伊朗的野生大麦群体中的基因型进行遗

4、传多样性研究。结果表明遗传差异来自于个基因型,来自于群体之间。这种差异与胁迫环境,如热或冷、干早、沙漠相关,电泳条带频率显著与同种异型酶的基本构成因子相关。Reddy和Solim粗(1997)【35】用4个引物分析了17个野生大麦品种和7个栽培大麦品种,共扩增出片段大小范围为150.2300bp,约33%片段是野生和栽培品种共有的,67%是野生材料所特有,其中种内片段差异小于种间片段差异。作者通过实验认为黜廿D标记技术可以用来区别野生种和栽培种。Ch0啪趾e等(1998)【36】利用黜心D的3个引物分析西亚

5、和北非的315个大麦自然群体,结果表明群体之间有较高遗传差异,同时也指出有些不同地区的大麦群体具有共同性。洪棋斌等(2001)【37】分析了44个四川西北高原青稞的遗传多样性,筛选出17个黜廿D引物,扩增出79条多态条带,根据品种地理来源、主要品种特性,如多粒、大粒、早熟矮杆等表现,说明它们之间有趋同性。F珊k和Ana(2001)【38悃7个RAPD引物分析了地中海盆地西部的29个大麦材料,13个野生大麦祖先,2个其他地区的品种,结果指出该地栽培大麦演化途径为野生大麦祖先在摩洛哥进行大量突变形成野生型,并与

6、地中海东部的野生大麦杂交,最后才形成栽培大麦。侯永翠,颜泽洪等(2005)【39】对60份来自不同地区的大麦品种进行RAPD遗传多样第一章文献综述5性分析,其中有西藏近缘野生大麦19份,我国不同省市地方品种33份和8份外国大麦品种。共用32个引物。结果表明19份西藏近缘野生大麦的遗传距离为O.818~0.969。不同省市地方品种33份大麦的遗传距离为0.783~o.98l。8份外国大麦品种的遗传距离为0.82㈣.956。可以看出中国大麦的遗传多样性最为丰富。也支持中国是世界栽培大麦的遗传多样性中心之一。1.

7、1.3.2扩增片段长度多态性(AnJ)扩增片段长度多态性(Amplific撕onFraj蛐ent‰gmPol弘no印Ksm.AFLP)技术是对限制性酶切片段的选择性扩增,又称基于PCR的RFLP。AFLP标记的基本原理是:对基因组的DNA进行双酶切,再将酶切片段和含有与其粘性末端相同的人工接头连接,连接后的接头序列及邻近的内切酶识别位点就作为以后PCR反应的引物结合位点,通过在末端分别添加l~3个选择性碱基,选择性地识别具有特异配对序列的酶切片段,实现特异性扩增,最后用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩增产物。A

8、FLP是目前效率较高的一种分子标记,其特点可总结如下:(1)数量几乎无限,所用限制性内切酶及选择碱基的种类,数目结合很多,且可加以调整;(2)揭示出的多态性程度极高,每次可检测50~100条谱带;(3)是典型的孟德尔方式遗传;(4)无物种特异性,可用于任何物种的DNA指纹图谱构建及标记目的基因;(5)稳定性和重复性高,PCR扩增时所用的退火温度较高,克服了一般PCR扩增中易出现假带的缺陷;(6)所需DNA量不大,

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