草鱼野生和养殖群体间遗传结构比较研究

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1、南京农业大学博士学位论文草鱼野生和养殖群体间遗传结构比较研究姓名：张志伟申请学位级别：博士专业：水生生物学指导教师：夏德全;吴婷婷20060601中文摘簧草鱼野生和养殖群体间遗传结构比较研究箍要草鱼(Ctenopharyngodonidella)属于鲤形目(Cypriniformes)，鲤辩(CyprinJdae)，雅罗鱼亚料(Leuciscinae)，霹其草食·}生、生长快、岛质鲜美等特点，是优良的淡水养殖品种。由于人工繁殖的成功应用，改善了种苗供应不足的状况，也使很多地方引静后建立了独自的繁殖小群体。受囊产条件和生产筑模的限镧，生产单位保存酌亲鱼数量不多，且大部分选自自繁后代，如

2、此经过多年的生殖隔离和多代近交，引起了养殖娅获不藏程度的邈健，如挂旱熟、成熟令傣趋小、藐病力洚低等，在群体遗传学的研究申，利用幂同DNA标记在不同群体出现的频率，预测群体闲的逮转分纯已或舞一令热弱磅竞瀑题。氇袁莩鱼醵研究札巍未霓臻不强分子转记各等位基因出现频率的差异，研究野生和养殖草鱼种质资源的报道。曲于养殖性状的退倦毒稀窍等往基因的丢失疆聂杂垒疫趣玲簸蜜切相关，因媳应用大赣DNA括记研究人工繁殖条件下，草鱼由于近交产生的杂合度下降和不利突变的积裂是一条可行的途经。本丈稍用磁珠雷集法对草鱼微卫星进稼了筛选，然后运藤微卫星(mierosatelliteorsimplesequencel

3、engthpolymorphism)重复序列长度多态、TRAP(targetregionamplifiedpotymorphism)靶拉区域扩增多态、SRAP(sequence-relatedamplifiedpolymorphism)序列相关扩增多态等标记，从基因组重复序列、衰逸序列标嚣以及井放阅读棍等不同轰皮，通过比较莘囊野生爨傣务秦撬群体阉等位墓鼙壤率辣爱托，鼓分手拳警揭示养殖群体遗传物质的爱化，从而为解决养殖性状的退化提供理论依据，也为将来草鱼遗铸璃谱麴建提绥更多转逮铸惦记。葵舔研究建容螽T：1草鱼基因组49：gX及CA重复微卫星富集文摩的构建崩用镑统酚．氯傍法及试期盒法对草

4、鱼焱渡噩麓惫基霹毁提取藏暴遗gs-m较，结暴发现：以m液为试验材料，传统方法抽提效果好于试剂盒法，可能是由于购菇的试剂盒逶合久焱液基霉缎砖缘故；采用传统方法提取摹崴基因照辩，血液提取效袋好于鲮条。根据成物素(biotin)尚链亲和索(strcptavidin)的强亲和性原理，用平端限制性内协酶M酗i港化攀鱼基鞠鲤．DNA，翊汝纯纯3∞．]ooot,pi跨麓段，逮接土接头，与生物索标记的微卫星寡核苷酸探针(CA)16退火结合，用链索和素磁珠(streptavidinmagneticbeads)亲争掳捉，获褥含有微卫星序列的单链目的片段，经PCR{r"增形成双链，然后克隆至1IpMDlg

5、-T载体土，转4％；-至DH5a申，首次成功构建草鱼基西蛆微卫星富集文库。抽样检测阳性率为69．23％，说明构建的富集文库质量较高，适合大规模测革瓴野生轻菇麓群体海遗传结构出较辑究序。2孳鱼野生葶口养殖群体间遗传变异妁徽卫星分析运用微m星标记对江苏省境内分布的草良一个野生群体和两个养殖群体遗传多撵杖避行分辑。誊10含疰位中，每夸藏位产生妁等位基露数扶2翻8不等，共产生55夸等位基因。邪江草鱼野生群体有效等位基因数、多态信息含量、期望杂合度与平均表观杂合度均最高，依次为3、9、O．5068、o。6939、O．7；羌锡羲溯莩童赛殖群体最低：2,2、O．1796、0．5235、0．5286

6、；淡水中心草瓶养殖群体各参数均介于两者之阍。邗汪草鱼野生群体与淡水中心莩怠养殖群体、无锯前洲擎鱼养殖群体间遗传距离分别为0．4732和o．4488，大于两个草鱼养殖群体闻遗传距o．3090，群体阍遗传分化系数也有瞬栉的趋势，结果表明：草鱼野生群体遗传多样性更为丰富，养殖群体存在杂合度降低，遗传多精性下降砖现象。遗传多榉性辑占毙饲砖分耩表娟，85．01％的逮转变劳采鑫予群体内，14．99％的遗传变异来自于群体问。各座位分化程度的f检验结果表明，10个座位中寿GMl8、MFWl．1、MFWl-2三令痉位秽体润分化迭爨较嚣著拳乎。毙菝各座位在不同群体馨位基嘲频率的蹙化发现：座位OMl8的7

7、，MFWl．1的1、2，GM03．1的1、6，GM03-2的5，MFW5的l、5，GMl9的1，Ceal2的l、8等一些低频稀有蒂位基因在养殖群体中丢失，导致蒜遗传多样性下降，从而降低了适威环境的能力。3不同群体草鱼遗传结构的TRAP分析以草鱼DNA为材料，分析了模板DNA，M92+，dNTPs，引物浓度，以及循环参数务邈火温度对TRAP-PCR扩溪结暴转移响，确立了稳定蛀强重复性好妁攀鱼TRAP最佳反应体系和PcR扩增参数。结合微卫藏标记技术，研究新型分