抗核药物致肝脏损害电镜观察

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1、抗核药物致肝脏损害电镜观察【摘要】目的：以透射电镜观察不同抗虏药物对SD大鼠肝脏超微结构的影响。方法：健康成年SD大鼠(清洁级)152只，体重250〜300g,雌雄各半，随机分为8组。观察组：IT组：异烟腓(INHH)；R组：：利福平(RFPR)；Z组：毗嗪酰胺(PZAZ)；HR组：异烟腓+利福平；HZ组：异烟腓+毗嗪酰胺；RZ组：利福平+毗嗪酰胺；HRZ组：异烟腓+利福平+毗嗪酰胺。对照组：生理盐水。大鼠用药剂量为人每公斤体重常用剂量的5.5倍。标本制备：每天对各组大鼠进行一次灌胃，10天后处死大鼠，分离肝脏，戊二醛固定后做电镜观察。结果：肝细胞部分线粒体溶解，粗面内质

2、网脱颗粒，滑面内质网池扩张，细胞内脂肪颗粒增多，糖原颗粒显著增多；细胞核周水肿；肝细胞间胶原纤维增生。结论:异烟腓、利福平、毗嗪酰胺均可引起大鼠肝脏的损害，多种药物联用比单药应用损害更明显；随着药物应用种类的增多，肝脏损害逐渐加重；毗嗪酰胺组比其他单用药组肝脏毒性更大。【关键词】抗痔药物；透射电镜/超微结构；肝损害/诊断应用【中图分类号】R54【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2013)02-0018-04抗虏药物损害肝脏已有共识，但国内尚未有抗廃药物致肝脏损害行透射电镜观察的文献报道。本实验通过研究抗虏药物对SD大鼠肝细胞超微结构的影响，探索其对肝脏损害的

3、形态学特征。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物：SD大鼠152只，体重200〜250g,雌雄各半，由河北医科大学动物中心提供。1.1.2主要仪器：日立H-7500透射电镜。1.1.3主要试剂：异烟腓（天津力生制药有限公司），利福平（华北制药集团股份有限公司），毗嗪酰胺（成都锦华药业有限公司），戊二醛（天津化工厂出品）。1.2方法1.2.1动物分组与处理：将SD大鼠随机分为8组，雌雄各半，各组均每日一次性空腹定点灌胃给药。实验组：H组：55mg/kg/d；R组：82.5mg/kg/d；Z组:55mg/kg/d；HR组：INH55mg/kg/d+RFP55mg/kg/d

4、；RZ组：R55mg/kg/d+Z192.5mg/kg/d；HZ组：H55mg/kg/d+Z192.5mg/kg/d；HRZ组：H55mg/kg/d+R55mg/kg/d+Z192.5mg/kg/do对照组：生理盐水10ml/kg/do不同组合用药组均为各种单药按前述剂量混合，规律灌喂大鼠10d,动物室具备恒温、清洁、安静等条件。1.2.2观察指标及检测方法：①处死大鼠取出肝脏，放入20%甲醛溶液中固定，包埋制成腊块，光镜切片后HE染色。②在光学显微镜下观察，根据病理改变分级，分级方法因国内外尚未有电镜下药物性肝损害分级统一标准，所以本研究根据大鼠肝细胞膜、核膜、细胞质水

5、肿程度，以及线粒体、粗面内质网的破坏程度，次级溶酶体、糖原颗粒、肝细胞间胶原纤维数量多少，将肝损害分成0、I、II、III、IV级，见表1；结果见表2o③切割各大鼠肝组织并迅速戊二醛固定后，由河北医科大学电镜实验中心观察线粒体、内质网等超微结构变化情况。肝损害电镜结果见表3。1.3统计学方法：采用SAS6.12统计学软件。计数资料病理分级后，组间比较用x2及秩和检验。2结果2.1肝组织损害光镜病理分级在各实验组中的对比分析，见表2。2.2由表2可以看出HR组、HZ组、RZ组、HRZ组与单药组比较肝脏损害明显。单用药组光镜下：肝细胞胞质疏松、浊肿、核仁增多及呈颗粒状。电镜下

6、表现为肝细胞核轻度畸形、核周水肿、糖原增多，线粒体轻度水肿、靖大部消失、膜全部或部分消失，髙尔基复合体较正常，次级溶酶体、粗面内质网脱颗粒，滑面内质网池扩张，细胞器之间轻度水肿、糖原颗粒增多，肝细胞间胶原纤维轻度增多呈束状。其中PZA组尤为严重。合用药组光镜下不仅上述表现加重，尚可见肝小叶排列不齐；电镜下表现为粗面内质网膜旁核糖体脱颗粒现象；糖原增多，线粒体髓样变；肝细胞之间胶原纤维增生,可见红细胞和淋巴细胞。显示合用药组较单用药组肝细胞损害更严重。3讨论异烟腓、利福平、毗嗪酰胺是世界卫生组织推荐的标准抗结核化疗方案中的一线药物，对细胞内外、繁殖期和静止期状态的细菌均有较

7、强杀灭作用。随着抗结核化疗疗程的推移，由抗结核药物所造成的不良反应也相应增加，其中以肝脏毒性反应最为显著［1］。我们知道包括醛基（MDA）在内的脂质过氧化物、超氧化物歧化酶（SOD）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（0-2）保护细胞免受损伤；谷胱甘肽（GSH）是一种低分子清除剂，它可清除0-2。缺乏或耗竭GSH会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用，这可能与增加氧化损伤有关，因而GSH量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素［2］。异烟腓、利福平等在肝内经P-450还原后