低氧对新生小鼠心脏成纤维细胞增殖与表型的影响及其表型转化机制的实验研究

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1、徐州医学院硕士学位论文低氧对新生小鼠心脏成纤维细胞增殖与表型的影响及其表型转化机制的实验研究姓名：张亚洲申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：董红燕2012-05徐州医学院硕士学位论文————————————————————————————————————二——————一低氧对新生小鼠心脏成纤维细胞增殖与表型的影响及其表型转化机制的实验研究中文摘要目的探讨低氧对新生小鼠心脏成纤维胞(cardiacfibroblasts，CFs)增殖与表型的影响及其表型转化的相关机制。方法体外分离培养新生小鼠CFs，通过倒置显微镜观察其形态，同时运用免疫荧光染色和流式细胞技术检测

2、CFs特异性的标记物盘状结构域受体2(DiscoidinDomamReceptor2，DDR2)。分别应用Real．timeRCR和WestemBlot方法检测低氧诱导因子-1a(hypoxiainduciblefactor-la，HIF-la)的表达。RT-CES系统监视CFs的生长状况；CCK-8法检测CFs的增殖情况。分别通过Real—timeRCR、免疫荧光染色、流式细胞技术和WesternBlot技术从核酸和蛋白水平检测CFs向心脏肌成纤维细胞(cardiacmyofibroblasts，CMFs)表型转化的标记物。L一平滑肌激动蛋白(0【．smoothmu

3、scleactin，位．SMA)。运用WesternBlot技术检测JNK的磷酸化水平。结果1．CFs的纯度鉴定：分离培养的细胞呈梭形或多角形，胞体及细胞核较大，细胞核呈椭圆形，无自发性搏动，呈现出CFs的典型形态特征。Vimentin和DDR2的免疫荧光染色呈阳性。流式细胞技术检测结果显示，Vimentin和DDR2的阳性率分别为99．94％、94．76％。2．低氧对CFs增殖的影响：常氧组、1％02组和5％02组中，CFs持续地表达HIF．1amRNA，它们之间差异无统计学意义(P>0．05)。与常氧组相比，1％02组和5％02组CFs中HIF．1a蛋白的表达显著

4、性增加(P<0．05)。与常氧组相比，在140h时期内，1％02组CFs的细胞指数值显著性下降；5％02组CFs的细胞指数值持续性上升，CFs未出现凋亡或死亡现象。与常氧组相比，5％02组CCK一8A450nm值显著性增加(P

5、SMAmRNA和蛋白的表达水平显著性增加(尸

6、路发挥着重要作用。关键词低氧；增殖；表型；心脏成纤维细胞；心脏肌成纤维细胞；JNK徐州医学院硕士学位论文—————————————————————————————————————二_———————一EffectsofHypoxiaonProliferationandPhenotypeofNeonatalMiceCardiacFibroblastsandItsMechanismAbstractObjectiveToinvestigatetheeffectsofhypoxiaonproliferationandphenotypeofcardiacfibroblasts(C

7、Fs)fromneonatalmiceandthemechanismthatiSrelatedtophenotypictransdifferentiation．．MethodsCFsisolatedfromneonatalmicewereculturedinvitro．ThemorphousofculturedceilsWasobservedbymicroscopy．ImmunofluorescentstainingandflowcytometryassaywereusedtodetectexpressionofDiscoidinDomainRece