传染性支气管炎病毒s基因的克隆及在原核细胞中的表达

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1、浙江大学硕士学位论文传染性支气管炎病毒S基因的克隆及在原核细胞中的表达姓名：沈行燕申请学位级别：硕士专业：生物物理学指导教师：严庆丰;周继勇2001.5.1I·：’．致谢首先，在此硕士论文完成之际谨向恩师严庆丰副教授和周继勇教授致以最诚挚的谢意和衷心的祝福．两年多来，导师在学术上悉心指导，在生活上关心照顾，不仅指导我如何一丝不苟地做科研，还教导我如何踏踏实实地做人。两位恩师实事求是的科学态度、严谨的治学作风、执着的事业心绘我留下了深刻的印象，这一切都使学生铭记在心，并将永远激励我不断进取。感谢浙江大学核农所汪志平博士、生物所吴建样硕士在我实验过程中给予的大力支持和帮助。感谢浙江大学生物所薛朝

2、阳博士、陈伟良博士、陈振明博士、浙江省农业科学院陈炯博士和师兄何永强在论文研究过程中给我的帮助和支持。感谢卢觅佳硕士、张志育硕士、程丽琴博士、丁红梅硕士、JohnDikId硕士、陈吉刚硕士、张德勇硕士、谢荣辉硕士、吴华君学士、黄耀伟博士、李建荣博士等在实验过程中的帮助。感谢李琦羹对我实验的支持。特别感谢浙江大学生命科学院生物物理专业98级全体硕士生和99级苏清锋、吴一峰、高燕萍、方林等硕士给我的关心和支持。衷心感谢钱凯先教授、龚兴国副教授、周小萍老师对我的关心和支持。感谢我最亲爱的妈妈爸爸和可爱的妹妹，感激之情难以言表，我将永远珍藏心底。感谢所有关心和帮助我的老师和同学们．祝大家万事如意、事

3、业辉煌!谨以本文献给所有爱我的和我爱的人■●I，，l；硕士在读期间发表的学术论文1·沈行燕·周继勇，丁红梅，吴建祥等．禽传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)s2基因的克隆和序列分析．中国兽医学报，2001，21(5)：2·周继勇·沈行燕，程丽琴，丁红梅等．新的变异的禽传染性支气管炎病7_3971毒株S基因的克隆及序列分析．中国农业科学(已录用)3·丁红梅，周继勇，沈行燕，吴建祥等．禽传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(7-2971毒株)N基因的克隆．农业生物技术学报，2001，9(3)：4-吴建祥，周继勇，程丽琴，沈行燕等．传染性支气管炎病毒s1基因植物真核表达载体的构建．浙江大学学报(

4、农业与生命科学版)，2001，26(3)：●．-●本研究的刨新性1．在国内首次克隆并获得了传染性支气管炎病毒株Z,J971S基因并获得其全序列，Crenbank登录号为：AF352311；2．首次在分子水平上阐述了传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株组织嗜性改变的机制g3．首次在大肠杆菌中表达了完整的IBV-ZJ971S蛋白，为传染性支气管炎新型疫苗的研究奠定了理论基础。I．●●^本研究获下列资助：墨家自然科学基金项目(批准号：39970030)浙江省重点科技项目(批准号：991102030)浙江大学硕士学位论文摘要鎏佳篷丝塞皇笪壅(Infectiousbronchitis，IB)是由传染性支气管炎

5、病毒(InfectiousBronchitisVirus，IBV)引起的一种急性高度接触性传染病，在世界范围内广泛流行，造成重大的经济损失。IBV变异速度快，血清型众多，各血清型问缺乏交叉保护能力，防治困难。1997年周继勇等从以腺胃肿大为特征的病鸡腺胃中分离到一株嗜腺胃IBV，命名为IBV-ZJ971。研究表明IBV-Z1971Sl基因与IBVH120同源性很高，但组织嗜性迥然不同。为了在分子水平上探讨IBV-ZJ971组织嗜性改变的机理．并为新型疫苗的研制起铺垫工作，我们克隆测序了IBV-ZJ971S基因，并在大肠杆菌中表达了s基因。同时还克隆测序了标准株H52S基因。(研究结果显示．I

6、BV-Z1971具有以下分子特征：1)ZJ971第3241位碱基由G突变为T，形成一个终止密码子，造成s基因翻译提前终止，其s2蛋白比IBV-H52少82个氨基酸。2)Z1971S基因与呼吸型IBV．H52、M41、Beaudette、KB8523同源性很高，尤其是与IBV-H52闽源性高达99．71％，但与Ark99、6／82、Cut／、B1648等毒株同源性较低(83．33．踮．52％)。3)ZJ971S基因第343、395、484、2555、”06、3241位核苷酸与H52及其它对照毒株不同，其中除2706位以外，其余都是有意义突变。4)对IBV-ZJ971、H52、M41、Beaud

7、ette、Ark99、6／82、Cut2、KB8523、B1648S蛋白一级结构分析显示，7_3971S蛋白因多处氨基酸突变而不同于其它IBV，他们是：115位氨基酸由Tyr突变为His导致亲水性增加；130位、132位突变为Pro可能造成口螺旋不能形成；162位氨基酸由Asn突变为Tyr；852位突变为Gly导致S2蛋白亲水性降低，使S1蛋白构象因s2蛋白二级结构的改变而改变。这些特征说明zJ971病毒株因