人lifnt--3基因克隆及其双基因载体构建和表达的研究

《人lifnt--3基因克隆及其双基因载体构建和表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、单位代码：10472学号：1l17002中图分类号：Q28密级：公开拓浙嚣茅绕硕士学位论文人LIF／NT-3基因克隆及其双基因载体构建和表达的研究TheStudyonCloningofHumanLIF／NT-3GenesanditsDualGeneVectorConstructionandExpression年级三Q二二级TheStudyonCloningofHumanLIF／NT-3GenesanditsDualGeneVectorConstructionandExpressionAThesisSubmittedfor

2、theDegreeofMasterCandidate：LiWeidongSupervisor：Prof．FengHuigengSchoolofLifeSciencesandTechnologyXinxiangMedicalUniversity新乡医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律

3、后果由本人承担。作者签名：日期：伽J怍6月f日，学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权新乡医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。储虢磨嘴、眺Ⅶ嘛易月f日导师签名：期：伽l够年6月1日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．51综述：干细胞治疗脊髓损伤的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56攻读学位期间发表文章情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯．68致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．69个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．70新乡医学院硕士学位论文人LIF／NT-3基因克隆及其双基因载体构建和表达的研究摘要背景脊髓损伤(Spinalcordinjury,SCI)是中枢神经系统的严重创伤，人脐带间充质干细胞(Humanumbilcalcordstemcell，HUC．MSCs)对SCI的治疗有一定的效果。有研究发现，神经营养因子一3(Neurotrophinfactor-3，NT

6、-3)与白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF)基因对神经系统有修复创伤和维持神经元生存的作用。因此，LIF／NT-3双基因载体复合HUC．MSCs，能否增强脐带间充质干细胞的治疗效果是需深入探索的重要临床课题。目的本研究旨在通过克隆人LIF与NT-3基因，构建LIF．IRES．NT-3双基因载体并整合到HUC—MSCs基因组中，获得过表达LIF和NT-3基因的HUC．MSCs，为干细胞移植治疗中枢神经系统疾病特别是脊髓损伤提供新的思路。方法1．以人血液单核细胞来源的人基因组DNA为模板

7、，利用重叠PCR和姊妹PCR技术克隆人LIF和NT-3基因。2．利用基因工程技术，构建plRES2-LIF-EGFP和plRES2-LIF．IRES-NT-3真核表达载体。3．将筛选出的阳性质粒转染HEK293T细胞，通过RT-PCR和蛋白质印迹实验技术检测mRNA、蛋白质的表达水平。4．利用基因工程技术，获取LIF和LIF．IRES-NT-3基因片段，构建pCDH．LIF和pCDH．LIF．IRES—NT-3质粒。5．将构建的pCDH．LIF和pCDH．LIF—IRES-NT-3重组质粒与慢病毒包装质粒pVSVG、A8

8、．91共转染HEK293FT细胞，收集慢病毒上清，浓缩后将获得的慢病毒颗粒转染HEK293FT细胞，通过RT-PCR和蛋白质印迹实验技术检测mRNA、蛋白质的表达水平。新乡医!学院硕j仁学位论文6．将鉴定过的慢病毒颗粒转染HUC．MSCs，检测LIF和NT-3基因mRNA的表达。结果1．成功克隆人LIF和NT-3基因