灵杆菌多糖抗内毒素作用及作用机制研究

《灵杆菌多糖抗内毒素作用及作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2008级博士学位论文灵杆菌多糖抗内毒素作用及作用机制研究ProtectiveEffectofHemarisinagainstEndotoxin—InducedToxicityandStudyoftheUnderlyingMechanism课题来源：广东省自然科学基金(7005189)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员药理学张群雷林生教授陈建海教授吕俊华教授李悦山教授叶春玲教授庞建新教授论文评阅人史红研究员李明春主任药师徐江平教授2012年4月10日广州博士学位论文{{IllllllII!11111I11IIIIIIIlllIIIIIIIY22

2、57463灵杆菌多糖抗内毒素作用及作用机制研究博士研究生：张群指导教师：雷林生摘要前言灵杆菌多糖是从灵杆菌菌体中提取精制得到的脂多糖物质，目前国内注册的英文通用名为hemarisin，国内曾经称灵杆菌多糖为“灵杆菌素”，国外，尤其是前苏联或俄罗斯所报道的同类产品叫做prodigiozan。由于灵杆菌(Bacillusprodigiosus)是粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens)的老式叫法，因此，灵杆菌多糖和prodigiozan都是从粘质沙雷氏菌或灵杆菌中提取的脂多糖类物质。灵杆菌多糖虽然也是属于细菌内毒素的范畴，但其毒性极低，具有免疫促进作用，在临床主要用于

3、各种原因引起的自细胞减少症、乙型肝炎及急慢性盆腔炎等疾病的辅助治疗。目的在药物筛选过程中，我们发现灵杆菌多糖具有明显的抗内毒素作用，据此，本研究采用动物模型对灵杆菌多糖的抗内毒素作用进行确证，并从不同角度探讨灵杆菌多糖抗内毒素的作用机制，为理解灵杆菌多糖的临床用途提供新的视角，同时为灵杆菌多糖用于内毒素血症的辅助治疗提供前期实验依据。研究内容1．灵杆菌多糖对小鼠内毒素休克及内毒素血症模型的影响1．1灵杆菌多糖对小鼠内毒素休克致死模型的保护作用1．1．1材料与方法摘要先给KM小鼠(以下称：小鼠)腹腔注射灵杆菌多糖或生理盐水或阳性对照药物，0．5h后，每组动物均腹腔注射内毒素(铜

4、绿假单胞菌脂多糖，LPS)60mg／kg，观察3d内动物死亡情况。1．1．2结果腹腔注射大剂量LPS(60mg／kg)后，小鼠出现明显的中毒反应，20h后陆续有动物死亡，48h后仍存活的动物逐渐恢复正常活动与摄食。灵杆菌多糖(100、50U／kg)预防性腹腔注射给药使动物存活率分别提高60％和45％(妒=15．000，P=0．000；X,2=9．231，Bonferroni校正P=0．006)。1．2灵杆菌多糖对内毒素血症模型小鼠炎症相关因子产生的抑制作用1．2．1材料与方法先给小鼠腹腔注射灵杆菌多糖或生理盐水或阳性对照药物，0．5h后，正常对照组动物腹腔注射等体积生理盐水，

5、其余动物均腹腔注射LPS(10mg／kg)，导致内毒素血症。3h后，小鼠摘眼球放血制备血清，ELISA方法测定血清中自介素．1p(ILlp)、白介素．6(IL-6)、肿瘤坏死因子Ⅱ(TNF口)、前列腺素E2(PGE2)的含量。Griess法检测一氧化氮(NO)的含量。1．2．2结果小鼠腹腔注射LPS后，其血清中IL-lp、IL-6、TNFn、PGE2、NO的含量明显升高，预先给予灵杆菌多糖(100，50U／kg)腹腔注射，然后再给LPS，其血清中各指标升高的幅度明显下降，灵杆菌多糖组各指标均数与LPS组相比，差异有统计学意义(IL-Ip：P=0．007，P=0．023；IL-

6、6：P=0．018，P=0．046；TNFa【：P=0．001，P=0．019；PGE2：P-0．001，P-0．009；NO：P=0．012，P=0．039)。1．3灵杆菌多糖对内毒素血症模型小鼠炎症相关基因mRNA表达的抑制作用1．3．1材料与方法动物分组及处理同1．2．1节，小鼠腹腔注射LPS(10mg／kg)3h后，脱颈椎处死，取出脾脏置液氮中保存，提取总RNA，实时荧光定量PCR法检测ILlⅡ博士学位论文p、11．,-6、TNFQ、COX．2(环氧酶．2)、iNOS(诱导型一氧化氮合酶)mRNA的相对含量(2．一，以GAPDH为内参)。1．3．2结果小鼠腹腔注射LP

7、S后3h，脾脏中IL．1p、IL-6、TNF伍、COX．2、iNOSmRNA的表达明显增多，提前0．5h腹腔注射灵杆菌多糖(100，50U／kg)可部分抑制由LPS诱导的上述各目的基因mRNA的表达，灵杆菌多糖组各参数均数与LPS组相比，剂量为100U／kg时，差异均有统计学意义(IL-113：P=0．026；IL6：P=0．015；田师a：P=0．029：COX-2：P=0．016；iNOS-P-0．020)；剂量为50U／kg时，差异有些有统计学意义(IL-1IB：P=0．072；IL-6：P--0