北山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析

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1、学校代码：10126分类号：——论文题目学号：—3100—8024编号：——北山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析学院：生命科学学院专业：动物学研究方向：动物细胞工程姓名：王蓉蓉指导教师：李煜教授李瑶副教授2014年3月28日内蒙古大学硕士学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内墓直太堂及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研

2、究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：日期：指导教师签名在学期间研究成果使用承诺书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征得内蒙古大学就读期间导师的同意；

3、若用于发表论文，版权单位必须署名为内蒙古大学方可投稿或公开发表。学位论文作者签名：日期：指导教师签名：日北山羊戌纤维细胞休外培养体系的建立及特性分撕北山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析摘要北山羊为国家一级保护动物，本研究将获取的北山羊肌肉组织采用组织块法培养，进行了原代培养、传代培养、冷冻与复苏，建立了北山羊肌肉组织成纤维细胞的体外培养体系，对所培养细胞部分的生物特性进行了分析研究，并对在4种不同的培养基中、5种不同血清浓度梯度下细胞的生长状态进行了比较。结果显示：北山羊肌肉组织成纤维细胞在体

4、外培养的过程中，正常生长，其组织块在接种5d后，可观察到有梭形细胞出现，并从组织块向外周爬出，7d后多数游离出组织块并逐渐汇合。在细胞F5、F10、F15代，分别进行了细胞生长动力学的检测：计算贴壁率、比较细胞冻存前和复苏后的存活率、绘制生长曲线。生长动力学的测定显示细胞生长正常，随着细胞传代增加细胞增殖速度●有所下降，三代的倍增时间分别为F5：35．65h，F10：43．29h，F15：48．40h。在染色体核型分析部分，选取了不同代次的100个中期分裂细胞，其中88％以上均为二倍体细胞，已经大于建

5、系正常二倍体占75．80％的要求，说明即使经过细胞的多次传代、冻存、复苏，本实验所建立的细胞系遗传特性是稳定的，这种培养体系下培养的北山羊成纤维细胞，可以用于生物工程或其他生物学领域的研究。其性染色体表明研究对象为一只雄性北山羊。在MEMAlpha、DMEM／F12、M199、DMEM高糖四种培养基的对比中，MEMAlpha相较其他培养基更适合北山羊肌肉组织成纤维细胞的体外培养。在血清浓度的选择上，12％的浓度应是最北山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析优浓度。本实验成功建立了北山羊肌肉组织成纤

6、维细胞的体外培养体系，在细胞水平上保存了北山羊的遗传资源，为今后北山羊细胞或建立在细胞基础上的研究提供试验材料和基础数据。关键词：北山羊；成纤维细胞；体外细胞培养；生物学特性此山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析ESTABLIS删ENfT0FCELLCULTURESYSTEMANDCHARACTEIUSTICANAI，YSIS0FCAPRAⅢEXFⅡ≥ROBLASTCELLSABSl№～CTCapraibexisoneofthefh'stnationalprotectedanimals．Them

7、usclefibroblastcellsofCapraibexgotbytissueculturewereusedtoestablishcellculturesysteminvitroandanalysebiologicalcharacteristicsbyperformingprimaryculture，subculture，andconventionalmethodsofcryopreservationandrecoveryinthisexperiment．Andduringtheexperime

8、ntthegrowthofthecellswerealsobecomparedindifferentculturemediumsandserumlevels．Theresultsshowthatfibroblastcellsgrewoutwardafter5d，after7dmostofthemseparatedfromthetissueandjoinedeachothersduringthenormalgrowthofthemuscletissuein