山羊成纤维细胞培养过程中支原体污染的去除及预防平台建立

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1、!"#$!"%"##&’试验研究FGH##"I#(11#JK56CL>5=MK@8

2、维细胞"*O.<#为研究对象!通过PQ%R/P方法检测细胞是否存在支原体污染$然后对检测出的阳性细胞株使用!NI"!?J8S支原体抗生素"TM9<876>C#处理!周!再降低浓度为#!IN!?J8S处理#周!最后再通过PQ%R/P方法检测细胞中是否存在支原体污染%结果表明&用!NI"!?J8S的TM9<876>C处理阳性细胞株!周后!支原体阳性条带明显减弱!但并未完全清除$降低浓度为#!IN!?J8S继续处理#周!PQ%R/P检测显示支原体条带呈阴性!即支原体已被消除%说明运用TM9<876>C可对细胞支原体污

3、染进行有效治疗!成功建立了山羊成纤维细胞培养过程中支原体污染的预防和去除平台%关键词!细胞培养$支原体污染$支原体抗生素$PQ%R/P$支原体清除$支原体预防22支原体!!"#$%&’()’"也称霉形体$是一类无细细胞的代谢及功能造成影响$主要表现在以下几个’’%&(胞壁的原核微生物%早在#1&1年O5,769:;和R5方面##"使培养液中的精氨酸大量被消耗$引起P7A@首次从牛胸膜积液中分离出此种微生物$称之细胞蛋白质)F,0):P,0)8P,0的合成障碍&!"支为胸膜肺炎微生物!TMBA:7TCBA87C>

4、97:?9C><8$原体吸附在细胞表面$破坏细胞膜的完整性$影响RRG"&随后有学者于#&(’年在分离污水时发现此细胞信号传递&("支原体活动产生的代谢物会改变类微生物$命名为类胸膜肺炎微生物培养液的TW值$影响细胞代谢&)"造成细胞染色体!TMBA:7TCBA87C>97:?9C><8%M>LB$RRSG"&#&($年$科数量减少$甚至产生染色体畸变或多倍体$而且变学家首次在人体巴氏腺中分离出人系支原体$开辟异后的染色体难以恢复到原来的正常状态&N"支原了对支原体宿主关系研究的新篇章&直至#&N’年$体污染还

5、会影响一些病毒在细胞中的产量$使恶性’#%!(将RRSG正式命名为支原体%支原体作为一种细胞致癌能力下降$影响淋巴细胞分化等%因此$寄生生物$广泛存在于自然界中$有数据表明每种在细胞培养过程中对支原体进行预防)定期检测和’((细胞系有#NUV(NU的概率会感染支原体$有些去除尤为重要%研究发现$在细胞培养液中添加一甚至高达’"U%由于支原体个体微小$直径为定浓度的支原体抗生素!TM9<876>C"可以抑制支原"I#V"I(!8$能通过微孔滤膜过滤器$所以可以吸体甚至完全清除$而且不会对细胞的生理结构等造’)(’

6、#"%#!(附到细胞表面$甚至可以进入宿主细胞内$使培成损害%本试验运用TM9<876>C对感染支原体养液中支持细胞生长所需的营养物质含量减少$造的细胞进行处理$建立广西大学亚热带农业生物资’N(成细胞生长缓慢甚至停止%支原体污染还会对源保护与利用国家重点实验室的支原体预防和清除平台$稳定细胞培养体系$以期为后续试验研究收稿日期!!"#$%"&%"’"修回日期!!"#$%##%!$奠定基础$现将结果报道如下%基金项目!国家自然科学基金项目!(#)"#!’$"(#’’"()!#"广西#2材料自然科学基金项目!!"

7、#’*+,-./0(1"""$#细胞株为山羊耳缘成纤维细胞$山羊耳缘组织块作者简介!张丹丹!#&&($22#%女%硕士研究生%研究方向为采自广西畜牧研究所关中山羊养殖场("日龄以内的动物干细胞及动物胚胎%!$")$’!&’34456785山羊&高糖FXOX)胎牛血清!.Y-"$均购自*>D67公!通信作者!石德顺!#&’!$22#%男%研究员%博士%博士生司&RM9<876>CQ:B9Z8BCZ试剂盒$购自HC[>[7*BC公司&导师%研究方向为动物胚胎工程与转基因动物%9:;<<=>3?@A5B;A56C"黄

8、2奔!#&$&$22#%男!壮族#%研究员%博士%博士生F,0提取试剂盒$购自QH0,*O,公司&超净工作台$导师%研究方向为动物干细胞%9:>=A9C?DBC3E9=7756785购自苏州佳德净化科技公司&/G!培养箱$购自*#*!"#$!"%"##&’试验研究Q=B:87.7:89公司&冰箱$购自W9>B:公司&倒置荧光收集好的样品中加入!""!S缓冲液*0使细胞充分显微镜$购自,