nrf2-are信号通路与自噬在卵巢癌顺铂耐药的相关机制研究

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1、万方数据学校代码：10246学号：1121125000I织旦大学硕士学位论文Nrf2-ARE信号通路与自噬在卵巢癌顺铂耐药的相关机制研究院系：妇产科医院专业：妇产科学姓名：包灵洁指导老师：易晓芳副主任医师导师组成员：李听副主任医师姚明研究员徐丛剑教授完成时间：2014年03月10日万方数据TheroleofNrf2—AREsignalingpathwayandautophagy1nclsplatln_J●1●resistanceofovariancancer受资助项目1．上海市自然科学基金：Nrf2一Keapl-ARE信号通路在卵巢癌铂类耐药的机制研究课题编号：09

2、ZRl405002．国家自然科学基金青年科学基金：Nrf2一Keapl信号通路与自噬在卵巢癌顺铂耐药中的串话课题编号：81302261万方数据中文摘要一．目录．．．．01英文摘要⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一⋯⋯03第一部分自噬与卵巢癌铂类耐药的相关性研究材料和方法⋯⋯⋯⋯一．结果⋯⋯⋯⋯⋯一小结⋯⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一一14一⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯一⋯⋯一⋯一．19第二部分Nrf2一ARE信号通路在卵巢癌铂类耐药的作用及对自噬潜在调控机制的初步探讨材料和方法⋯⋯⋯结果⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一

3、⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯25，J、结⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯一⋯⋯⋯⋯32讨论⋯⋯⋯一⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯参考文献一⋯．⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯．33一一一一．．．．．．．．．．一．．．．．．．．．．．．一一一一．．．．．．．．．．．．一．．．．．．．．．．．．一一．．一一．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．一一38绢；述⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯一⋯44英文缩写词表⋯⋯一在读期间发表及完成的学术论文⋯⋯一一．致谢一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯一⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯⋯60万方数据由寸播暮

4、铂类耐药是卵巢癌治疗的一大难题，其发生机制及如何逆转耐药是多年来研究的热点。近年来人们发现一些与靶点作用无关，却与肿瘤耐药相关的影响因素，例如自噬、Nrf2分子等。但是，这些因素参与卵巢癌耐药的机制尚不明了。因此，深入研究相关机制为寻找潜在靶点具有重要的I临床意义。自噬(autophagy)是一种不同于凋亡的程序性死亡。当缺氧或饥饿时，细胞可形成双层皱褶包裹受损的细胞器及大分子物质，利用自身溶酶体进行消化，维持能量代谢平衡。自噬功能的异常可导致疾病的发生，如衰老、神经退行性病变等。自噬与肿瘤的研究颇具争议，部分研究表明自噬可抑制肿瘤形成，而其他研究认为自噬可促进肿瘤

5、生长。自噬与肿瘤耐药的研究有相似的现象，不同的是大部分研究表明自噬活性增高与肿瘤耐药相关，而小部分实验表明耐药可损伤自噬功能。但自噬与卵巢癌耐药关系如何，罕见报道。Nrf2一ARE信号通路(NF—E2一relatedfactor2-antioxidantresponseelement)是存在细胞中抗氧化应激的信号通路。当细胞受到氧化应激时，Nrf2分子高表达从而引起下游抗氧化反应元件的活化，发挥保护细胞的功能。近年研究表明高表达的Nrf2分子与肿瘤耐药相关。我们课题组前期工作发现耐药的卵巢癌细胞高表达Nrf2，下调Nrf2水平可提高细胞对顺铂的敏感性。但是Nrf2一

6、ARE信号通路参与卵巢癌铂类耐药的分子机制不十分清楚。综上，我们课题组假想自噬与Nrf2-ARE信号通路在卵巢癌耐药中可能存在某种调节。本课题主要研究自噬及Nrf2一ARE信号通路在卵巢癌铂类耐药中的作用及初步探讨二者之间可能存在的调节机制。第一部分自噬在卵巢癌铂类耐药中的相关性研究目的：探讨自噬对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。方法：以卵巢癌敏感细胞A2780及耐药细胞A2780cp为主要研究对象，经或不经顺铂处理后，通过Westernblot、免疫荧光及电镜比较两种细胞间的自噬水平。对自噬水平高的细胞，通过自噬药物抑制剂3一MA或重要自噬基因beclin1siRNA

7、转染下调自噬水平，检测细胞对顺铂敏感性及凋亡水平的改变。结果：耐药细胞A2780cp对顺铂的24小时半数抑制浓度是敏感细胞A2780的6．5倍，为卵巢癌铂类耐药研究提供了理想的研究模型。A2780cp细胞中自噬蛋白LC3I／II、beclin1蛋白表达显著高于A2780细胞：A2780cp细胞中免疫荧光LC3表达高于A2780细胞；在相同处理条件下，A2780cp细胞中自噬小体的数量显著多于A2780细胞。经3一MA与顺铂联合处理，A2780cp细胞对顺铂的敏感性显著增加，但对顺铂引起的凋亡无明显改变；经beclin1siRNA转染下调自噬水平后，A2780cp