α-synuclein对星形胶质细胞内质网—高尔基体系统及凋亡的影响

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1、万方数据中图分类号壁型!：鱼2学校代码!Q§三兰密级垒迓q．synuclein对星形胶质细胞内质网．高尔基体系统及凋亡的影响EffectsOfa—synucleinOnTheEndoplasmicReticulum—GolgiApparatusSystemAndApoptosisOfAstrocytes作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导老师：王阴阿阿临床医学神经病学湘雅二医院谭利明教授王春喻副教授答辩委员会主席中南大学二零一四年五月万方数据学位论文原创性声明

2、IUllIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY2685832本人郑重声明，所呈交的学位论

3、文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：至骂13Ej期：盘!!年』月尘日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的

4、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：一q0Y导师签名：日期：出!!年—互：月』也日万方数据仅．synuclein对星形胶质细胞内质网一高尔基体系统及凋亡的影响摘要目的：研究过表达O【．synuclein野生型和突变型(A53T、A30P)对星形胶质细胞(astrocyte，AST)内质网一高尔基系统及细胞凋亡的影响。方法：分离培养和纯化新生1．3天SD大鼠皮质区的AST，用免疫荧光的方法对其进行鉴定(GFAP)，Westernblot检钡,qAST内源性旺．synuclein的表达。用2

5、93FT细胞对前期已经构建好的(WT、A30P、A53T)a—synuclein．HA—FUIGW-GFP、GFP—fuigw质粒进行慢病毒包装，收获病毒上清后分别感染AST，分为过表达野生型组(WT组)、A30P组、A53T组和对照组(FuIGw组)。5．7天后免疫荧光及Westernblot检钡,JJAST中(WT、A30P、A53T)O【．synuclein．HA融合蛋白的表达。衣霉素处理AST6d,时作为阳性对照组，Westernblot检测各组内质网应激指标蛋OBIP、CHOP的变化；免疫荧光检测各组GMl30观察高尔基体形态的变化：流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变

6、化。结果：1)星形胶质细胞有内源性c【．synuclein的表达。2)慢病毒感染AST5．7天后免疫荧光及Westernblot可检测到过表达野生型组(WT组)、A30P组、A53T组伐．synuclein—HA融合蛋白的表达，而FUIGW组未检测到吐．synuclein．HA融合蛋白的表达。3)过表达野生型组(WT组)、A30P组、A53T组BIP、CHOPt旨标明显高于对照组(FUIGW组)(P<0．05)；过表达野生型组(WT组)与A30P组、A53T组相LLB]P、CHOP表达无显著性差异(P>0。05)。万方数据4)过表达野生型组(WT组)与A30P组、A53T组的

7、高尔基体分散在细胞质中，囊泡碎裂；对照组(FUIGW组)高尔基体分布在细胞核一侧，囊泡完整无碎裂。经矛榆验，过表达野生型组(wT组)、A30P组、A53T组的高尔基体碎裂百分比明显高于对照组(FUIGW组)(P<0．01)；过表达野生型组(WT组)与A30P组、A53T组的高尔基体碎百分比差异无显著性(胗0．05)。5)过表达野生型组(WT组)、A30P组、A53T组的AST凋亡率明显高于对照组(FUIGW组)(P<0．01)；过表达野生型组(WT组)与A30P组、A53T组的AST凋亡率差异无显著性(扮O．05)。结论：过表达Q—synuclein野生型和突变型(A53T、

8、A30P)可能通过内质网一高尔基体系统损伤诱导星形胶质细胞的凋亡。关键词：O【一synuclein；星形胶质细胞；内质网应激：高尔基体损伤；细胞凋亡分类号：R741．02万方数据EffectsOf伍一synucleinOnTheEndoplasmicReticulum—GolgiApparatusSystemAndApoptosisOfAstrocytesAbstractObjective：Discusstheeffectofoverexpress0【-synucleinofwide．typeormut