α-synuclein对星形胶质细胞分泌gdnf及调控神经元轴突生长的影响

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1、万方数据中图分类号～R741．02610硕士学位论文学校代码lQ§三三密级公珏0c—synuclein对星形胶质细胞分泌GDNF及调控神经元轴突生长的影响Theeffectofa·-synucleinonastrocytessecretingGDNFandregulatingthegrowthofneuronaxons作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：刘玫临床医学神经病学湘雅二医院谭利明教授王春喻副教授答辩委员会主席中南大学二O一四年五月为放万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导

2、下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。储签名：牛醐：业年上月埘学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或

3、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：半导师签名万方数据a-synuclein对星形胶质细胞分泌GDNF及调控神经元轴突生长的影响摘要目的：研究过表达Q．synuclein野生型和突变体(A30P、A53T)对星形胶质细胞(astrocyte，AST)分泌胶质源性神经营养因子(glia-derivedneurotrophicfactor，GDNF)的影响，以及对神经元的轴突生长的影响。方法：分离纯化新生1．3天的雄性大鼠皮质区AST和新生24小时内的雄性大鼠皮质神经

4、元，Westernblot检测AST中内源性仅一synuclein的表达。用293FT细胞对前期已构建好的仅一synuclein(WY／MU)一HA—FUIGW-GFP及FUIGW-GFP慢病毒载体进行包装，收获的病毒上清在体外感染原代培养的AST，分为Fuigw组、WT组、A30P组及A53T组，其中Fuigw组为空白对照组。使用免疫荧光染色及Westernblot检测AST中野生型及突变型Q—synuclein的表达后，酶联免疫吸附测定法(enzyme．1inkedimmunosorbenassay，ELISA)检测各组转染后AST培养上清中

5、GDNF水平；用Transwell培养皿将感染后的AST与分离纯化的神经元进行共培养，，免疫荧光染色观察共培养的神经元轴突长度的变化。结果：1．原代培养的AST中存在内源性a-synuclein的表达。2．免疫荧光染色和Westernblot检测发现感染后各组AST0【一synuclein(WT)一HA、a-synuclein(A30P)一HA、0【·synuclein(A53T)万方数据．HA成功表达。3．酶联免疫吸附测定法检测发现WT组、A30P组、及A53T组的培养上清中GDNF浓度均低于FUIGW组，且差异有统计学意义(P<0．01)。4

6、．免疫荧光检测发现WT组、A30P组及A53T组的神经元突起长度均较FUIGW组短，且差异有统计学意义(P

7、e：ToinvestigatetheeffectsofoverexpressionofQ—synucleinWTandmutatants(A30P、A53T)onsecretionofGDNFinASTandgrowthofneurons．Method：ASITandneuronswereisolatedfromnewbommicewithin1-3daysandwithin24hours，resepectively．Endogenous0c-synucleinwasdetectedbyWestemblotinprimaryculturedAST

8、．After48and72hourstransfectionthelentivirusexpressingwidetypea-synuc