星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响

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1、新乡医学院硕士学位论文星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响姓名：徐建可申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：谭军201204新乡医学院硕士学位论文星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响摘要．目的．一分析星显舷嘴垦蔓‘adenosine，Ado’对缺氧7复氧神经元损伤的保护作。用i探讨腺苷预处理后：的星形胶质细胞条件培养液的营养性作用，从而揭示腺苷对1神经系统的保护机制一为腺苷应用于临床治疗脑血管疾病奠定理论基础。方法’体外培养sD’大鼠大脑皮层星形胶质细胞和海马神经元及大脑皮层神经元，纯化后建立模拟脑缺血再灌

2、注损伤模型：收集再灌注l8h一的星形胶质细胞条件培养液(Astroc叭econditionedmedium，ACM)和经腺苷预处理的再灌注18h的星形胶质，细胞条件培养液(ACMa)，然后用ACM、ACMa及ACM+a(ACM+含100“mol，，L腺苷的DMEM液)以1：5的浓度培养缺氧／复氧损伤神经元；倒置显微镜下观察神经元形态学变化，XTT法测定神经元活性，利用免疫荧光技术和免疫细胞化学技术分别测定NSE、Bcl一2强阳性细胞的表达量。‘，夸士甲：口7卜．光镜观察：正常组神经元生长良好，形态规则，胞体椭圆，折光性好，突触

3、连接紧密呈网状；模型组神经元胞体变大不规则，折光性差，突触明显减少或消失；ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞状态介于两者之间，总体肉眼观察，其作用：ACMa>ACM+a>ACM。‘XTT法细胞活性检测：模型组神经元活力下降，OD值明显低于正常对照组。ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞活力均高于模型组，根据0D值，其作用：ACMa>ACM+a>ACM。NSE、Bcl—2的测定：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元表达NSE和Bcl．2的能力均较模型组提高，对染色结果阳性的细胞培养片进行图像分析，其作用：ACMa>AC

4、M+a>ACM。新乡医学院硕士学位论文结论j。．一’1、、通过细胞活性检测及受损神经元NsE的表达量反映出AcM对缺氧／复氧损．，伤的神经元有重要的保护和修复作用；2、通过受损神经元表达bcl．2的变化表明，●AcM具有抗凋亡作用≯3、：星形胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用，腺·。苷可通过星形胶旋细胞间接地保护和修夏受损神经元。’～．●●一·j’关键谪裱吾；缺氧；’复氧；神经元；’星形胶质细胞条件培养液，．’．7．j·，‘．·-’新乡医学院硕士学位论文InnuenceOfAstrocyte—Conditionedmed

5、iumonanoxiaobjecti、，edamagedNeuronsAbstractToanalysemeprotectiVeeff．eCtofastr．oc矿esandadenosineonthehypoxia／reoxygenationd锄agedneuronsa工1deXplore也enutritionalroleofmecultl】remediumofastrocytesaReradeno§ine—preconditioningfor缸rtherreVealingmeneu【roprotective，mechanis

6、msofadenosine．Thatcanma_kefoundationf．ortheclinical仃ea缸Ilentofischemiccere_brovasculardisease．MethedsCultl矗ed‘SD—ratcerebralcomcalastrocytes，neuronsandhippocampalneuronswere—purifiedtoestablishmodelsofsimulatedcerebralischemia—r印ermsioninjWy．ARerrepermsionfor18h，ast

7、rocyteconditionmedium(ACM)andadenosine—preconditioningastrocyteconditionedmedium(ACMa)werec011ected．Thend锄agedneurons，丘ommodelsofsimulatedcerebraliscllemia—r印er如sioninjurywerecultllredinACM，ACMaandACM+a(ACMmixedwiⅡlDMEMmediumcontaining100¨m01／Ladenosine)．Theconcentr

8、atiQnis1：5．些ghtmicroscopywasusedtoobseⅣethemo印h0109icalchangesofneuronsa工lddetenninetheneuronalactiVity．Immullonuorescencea11dimmullocyto．