转化生长因子β-1及其作用后的星形胶质细胞条件培养液对神经元树突生长以及突触素1表达的影响

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1、目录目录………………………………………………………………1英文缩略词表……………………………………………………2中文摘要…………………………………………………………4英文摘要…………………………………………………………6引言………………………………………………………………8第一部分…………………………………………………………11材料与方法……………………………………………………11结果……………………………………………………………13讨论……………………………………………………………17第二部分…………………………………………………………19材料与方法………………

2、……………………………………19结果……………………………………………………………24讨论……………………………………………………………26结论………………………………………………………………28参考文献…………………………………………………………29附录………………………………………………………………33个人简历………………………………………………………33致谢……………………………………………………………34综述………………………………………………………………36参考文献…………………………………………………………421英文缩略词表(abbreviation)

3、英文缩写英文全称中文全称TBITraumaticBrainInjury创伤性脑损伤TGF-β1TransformingGrowthFactor-β1转化生长因子-β1SiRNASmallinterferingRNARNA干扰技术DMEMDulbecco'sModifiedEagleMedium改良Eagle培养基PBSPhosphateBuffer磷酸盐缓冲液PLLPoly-L-Lysine多聚-L-赖氨酸FBSFetalbovineserum胎牛血清ECMExtracellularMatrixc细胞外基质ACMastrocyteconditionedmedium

4、星形细胞条件培养液GFAPGlialfibrillaryacidicprotein胶质纤维酸性蛋白FITCfluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素,HanksHank'sBlanaceSaltMixtureHank's平衡盐混合液MAP2microtubuleassociatedprotein-2结构性微管相关蛋白-2PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链反应Hhour小时Minmininute分钟TabTable表2FigFigure图SPASSStatisticalProductandServiceSolution

5、s社会科学统计软件ICCimmunocytochemistry免疫细胞化学技术3转化生长因子β-1及其作用后的星形胶质细胞条件培养液对神经元树突生长以及突触素1表达的影响中文摘要目的研究不同浓度转化生长因子β-1（TGF-β1）以及TGF-β1作用后的星形胶质细胞条件培养液对体外培养的胎鼠小脑神经元树突生长及突触素1（Synapsin1）表达的影响，探讨脑损伤后促进神经功能恢复的机制及TGF-β1作用下星形胶质细胞条件培养液对神经元生长的调节作用。方法（1）取孕18天小鼠神经元细胞进行体外原代培养，在培养7d的小脑神经元中加入不同浓度的TGF-β1（1ng/ml、

6、5ng/ml、10ng/ml），并设正常对照组。作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubuleassociatedprotein-2,MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。（2）取出生3d内的新生鼠，纯化培养小鼠星形胶质细胞，传代接种后采用SiRNA基因沉默技术，干扰Smad3基因的表达，RT-PCR验证沉默效果，将实验分5组，-1分别加入浓度为10ng·ml的TGF

7、-β1以及Smad3-SiRNA-1，Smad3-SiRNA-2及Smad3-SiRNA-3，并设空白对照，培养2d后，制成星形胶质细胞条件培养液，-20℃冻存。把经过处理后的星形胶质细胞条件培养液加入到体外培养的原代神经元细胞作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubuleassociatedprotein-2,MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。4结果（1）在1n

8、g/ml、