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《分子伴侣促进截短型人乳头瘤病毒58亚型l1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、摘要人乳头瘤病毒（HumanPapillomavirus，HPV）为双链环状DNA病毒，具有多种亚型，根据感染后引起病变的差异，将其分为低危型和高危型，它通过感染人体的表皮和粘膜鳞状上皮进而引发寻常疣、扁平疣、外阴癌、前列腺癌、口腔癌、宫颈癌等疾病。其中HPV58亚型属于高危型，与宫颈癌等的发生密切相关。在亚洲地区宫颈病变的妇女中，HPV58亚型的感染率很高，严重威胁着广大女性的健康，然而国内HPV疫苗研究相对落后，目前尚没有成熟的疫苗产品，只有葛兰素史克（Glaxosmithkline，GSK）的HPV二价（HP
2、V16/18）疫苗在中国上市，我国又是宫颈癌高发国家，迫切需求自主研发有效的HPV58疫苗。本课题旨在研究一种高效、廉价的HPV58L1蛋白表达系统，为进一步制备HPV58预防性疫苗奠定基础。本研究将含有分子伴侣的质粒转入大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）BL21感受态细胞内，制备含有分子伴侣pTf16的E.coliBL21感受态细胞，再将含有重组表达载体pGEX-6P-HPV58-L1的质粒转入上述感受态细胞，构建重组共表达菌株，经初步诱导表达证实，重组蛋白GST-HPV58L1与分子伴侣p
3、Tf16可实现表达，可溶性分析结果显示分子伴侣能够显著促进重组蛋白的可溶性表达；通过优化IPTG浓度、诱导温度、L-阿拉伯糖浓度与L-阿拉伯糖诱导时间，筛选出最佳表达条件：加入2.0mg/ml的L-阿拉伯糖，37℃，220rpm诱导表达20min；再加入1.0mmol/L的IPTG，18℃，诱导表达24h。将获得的重组蛋白经GST亲和层析柱纯化，采用PrescissionProtease酶切去除GST标签，经SDS-PAGE与Westernblot鉴定结果显示，约在50KD处出现截短型HPV58L1蛋白的特异性条带
4、，其纯度可达90%以上。将获得的截短型HPV58L1蛋白免疫昆明小鼠，经ELISA检测血清效价，结果显示，不同小鼠个体间免疫应答水平存在一定差异，无论是高免疫剂量组（40μg/只）还是低免疫剂量组（20μg/只）均能产生特异性抗体，且与PBS对照组相比均具有显著性的差异。高剂量组抗体效价（1:6400）高于低剂量组（1:3200），但二者差异不显著。初步免疫结果显示该蛋白具有较好的免疫原性，为后期相关疫苗的研制奠定了基础。关键词：HPV58亚型；截短型HPV58L1蛋白；分子伴侣pTf16；原核表达IAbstrac
5、tHumanpapillomavirusisakindofdoublestrandedDNAvirus,whichhasmanysubtypes.Accordingtothedifferenceoftheinfection,itcanbedividedintolowrisktypeandhighrisktype.Itcausescommonwarts,flatwarts,genitalcancer,prostatecancer,oralcancer,cervicalcancer,andotherdiseasesth
6、roughtheskinandmucousmembranesofthehumanbody.Inthispaper,thestudyoftheHPV58subtypeishigh-risk,andcervicalcancerandcervicalintraepithelialneoplasiaiscloselyrelatedtotheoccurrenceoftheinfectionoftheHPV58subtype.AmongwomenwithcervicallesionsinAsia,therateofHPV58i
7、nfectionishigh.Anditisaseriousthreattothehealthofthemajorityofwomen.However,domesticHPVvaccineresearchisrelativelybackward,thereisnomaturevaccineproducts,onlytheGSKtwoHPV(HPV16/18)vaccineinChina.Chinaisahighincidenceofcervicalcancer,theurgentneedforindependent
8、researchanddevelopmentofeffectiveHPV58vaccine.TheaimofthisstudyistodevelopanefficientandinexpensiveHPV58L1proteinexpressionsystem,whichlaysthefoundationforfurtherpreparationofHPV58
