hnis基因转染人结肠癌细胞建立裸鼠模型介导放射性显像

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1、万方数据论文题目：hNIS基因转染人结肠癌细胞建立裸鼠模型介导放射性显像答辩委员会主席：张敏鸣教授浙江大学附属第二医院答辩委员会成员：张敏鸣教授浙江大学附属第二医院许崇永教授温州医科大学附属第二医院程建敏主任医师温州医科大学附属第二医院论文答辩日期：2014—05—24万方数据目录中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1英文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4刖材料与方法⋯．．．．．．．．．．．．⋯．．．⋯．⋯．．．⋯．9结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

2、．．．．．．．．．24I：I；木···································。分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32结论．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．34参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．35附致录．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36综述及参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38独创性声明．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．43万方数据温州医科大学硕士掌位

3、论文h⋯S基因转染人结肠癌细胞建立裸鼠模型介导放射性显像中文摘要目的：钠／碘转运体(sodium／iodidesymportor，NIS)作为一种主要存在于甲状腺滤泡细胞基底膜上的跨膜糖蛋白【11，它能将碘从细胞外逆浓度梯度转运到细胞内。它的这种浓聚碘的能力是甲状腺激素生物合成、临床上诊断性甲状腺核素显像以及甲状腺功能亢进和甲状腺肿瘤放射性碘治疗的基础【孙。临床上利用放射性碘(131I)是治疗甲状腺恶性肿瘤的重要手段之一，它发挥杀伤肿瘤细胞效应的基础是一一肿瘤细胞必须具有摄碘功能。遗憾的是，临床上少部分高分化和大部分低分化甲状腺癌及其转移灶聚碘能力低下，此外还有其他

4、非甲状腺肿瘤细胞更无聚碘功能，这使得131I治疗起不到良好的作用。结肠癌为我国恶性肿瘤第三位【3】，死亡率仅次于肺癌和肝癌。起病隐匿，而且早期通常没有明显的临床表现，等出现明显症状时大多已到了中晚期。此时，由于其生物学特性复杂且恶性程度高，且化疗的多重耐药性令其预后不理想，进展期结肠癌的治疗一直都不理想。结合基因转染技术和核素放射性治疗，可在hNIS低表达或者不表达的肿瘤实现放射性核素治疗，为恶性肿瘤的治疗开辟了全新的诊治途径。我们设想将钠／碘转运体重组质粒(pcDNA3．1+-hNIS)通过脂质体转染法转染至SW480结肠癌细胞中，使原本不表达hNIS的肿瘤细胞表

5、达hNIS蛋白，从而获得一定程度的摄碘能力，然后建立动物模型，进行分子显像，为进一步的核素治疗打下基础。方法：1．对已经构建好的重组质粒pcDNA3．1+-hNIS进行测序；BamHI／EcoRI双酶切鉴定；转化到大肠杆菌中，进行扩增以及提取。2．培养SW480细胞并分组，脂质体法转染重组质粒至SW480细胞；半定量逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)和WesternBlot方法(WB)检测转染细胞hNIS基因和蛋白的表达情况。3．转染重组质粒后的SW480细胞，经抗生素G418筛选，获得稳定表达hNIS基因的细胞系(hNIS．SW480)。万方数据温州医科大掌硕士掌

6、位论文4．体外摄131I试验及过氯酸盐抑制实验；AnnexinV．FITC／PI双染行流式细胞仪检测细胞凋亡情况。5．细胞株hNIS．SW480接种到BALB／C．nu／nu裸鼠肩胛骨处皮下，设立对照组；接种同时开始在裸鼠饮水中加入优甲乐(L．T。)施行甲状腺封闭；待皮下移植瘤直径约达到约15mm，腹腔内注射99mTc04。和1311分别进行显像。6．取出裸鼠皮下肿瘤组织进行WB检测。结果：1．对pcDNA3．1+．hNIS重组质粒进行双向测序，得到插入基因序列全长1944bp(含起始密码子ATG到终止密码子TGA共643个氨基酸)且大小和方向正确，与参考序列H．s

7、apienssolutecarderfamily5(sodiumiodidesymporter)，(GenBankaccession：NM．000453)的CDS序列完全匹配。2．BamHI／EcoRI双酶切之后，琼脂糖凝胶电泳鉴定酶切产物，结果显示，在1944bp和5405bp左右有两清晰电泳条带，与理论结果相符，证实本次构建质粒确实为重组质粒pcDNA3．1+-hNIS。扩增后提取质粒电泳可见，在7000bp左右有清晰条带，BamHI／EcoRI双酶切电泳亦在1944bp和5405bp左右见清晰条带，说明提取质粒成功。3．SW480细胞转染后RT．PCR显示